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YDL080C和LEU2基因敲除对工业黄酒酵母异戊醇生成量的影响 被引量：9
1
作者 李童 孙军勇 +3 位作者 吴殿辉 李晓敏 谢广发 陆健 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期189-193,共5页
通过敲除生成途径中关键酶的编码基因,对异戊醇在工业黄酒酵母N85中的生成进行了研究。采用融合PCR技术,分别构建类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C)缺失组件"YDL080C-URA3-YDL080C"和β-异丙基苹果酸脱氢酶基因(LEU2)缺失组件"... 通过敲除生成途径中关键酶的编码基因,对异戊醇在工业黄酒酵母N85中的生成进行了研究。采用融合PCR技术,分别构建类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C)缺失组件"YDL080C-URA3-YDL080C"和β-异丙基苹果酸脱氢酶基因(LEU2)缺失组件"LEU2-URA3-LEU2",转化工业黄酒酵母N85尿嘧啶缺陷型单倍体Na-u(MATa ura3),获得单倍体工程菌Na-y和Na-l。将转化子与亲本分别进行实验室规模的黄酒发酵实验,结果 YDL080C缺失工程菌的异戊醇含量与亲本相比没有明显变化,说明类丙酮酸脱羧酶不是该途径关键酶;LEU2缺失工程菌的异戊醇含量降低16.16%,说明糖代谢途径存在,但只占小部分,而其他理化指标无明显差异。 展开更多
关键词 异戊醇 工业黄酒酵母 类丙酮酸脱羧酶基因 β-异丙基苹果酸脱氢酶基因 基因敲除
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白花丹参丙酮酸脱羧酶基因的克隆和表达分析 被引量：3
2
作者 史仁玖 常正尧 +1 位作者 王健美 王德才 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期90-95,共6页
目的获得白花丹参丙酮酸脱羧酶(SmPDC)全长基因,分析该基因在白花丹参不同组织部位,以及缺氧胁迫处理后的该基因表达差异。方法利用cDNA文库筛选获得SmPDC基因全长,利用半定量RT-PCR,分析SmPDC基因在白花丹参不同部位的表达情况,及缺氧... 目的获得白花丹参丙酮酸脱羧酶(SmPDC)全长基因,分析该基因在白花丹参不同组织部位,以及缺氧胁迫处理后的该基因表达差异。方法利用cDNA文库筛选获得SmPDC基因全长,利用半定量RT-PCR,分析SmPDC基因在白花丹参不同部位的表达情况,及缺氧处理条件下的表达情况。结果获得的SmPDC基因由2 190个核苷酸组成,编码605个氨基酸,蛋白相对分子质量约6.485×104,等电点pI 5.49;半定量RT-PCR检测,该基因在丹参的根中表达量最高,其次是茎和叶;缺氧胁迫处理会诱导该基因的表达,随胁迫时间延长表达量逐渐增加。结论白花丹参SmPDC基因是PDC家族新成员,其功能与植物耐缺氧代谢途径有关。 展开更多
关键词 白花丹参 丙酮酸脱羧酶基因 克隆 RT-PCR 缺氧胁迫
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编码酿酒酵母丙酮酸脱羧酶(Pdc6)基因克隆及其生物信息学分析
3
作者 王长丽 廖巍 +5 位作者 叶广彬 葛菁萍 刘磊 马毓坚 黄霞 宾晓芸 《中国农学通报》 2021年第9期103-108,共6页
旨在从生物信息学角度更好地研究酿酒酵母丙酮酸脱羧酶(Pdc6)的结构和功能,克隆酿酒酵母H5的丙酮酸脱羧酶基因pdc6。利用Primer 5.0软件设计1对20 bp引物,以H5基因组DNA为模板克隆获得pdc6,并利用生物信息学分析方法对其序列进行验证及... 旨在从生物信息学角度更好地研究酿酒酵母丙酮酸脱羧酶(Pdc6)的结构和功能,克隆酿酒酵母H5的丙酮酸脱羧酶基因pdc6。利用Primer 5.0软件设计1对20 bp引物,以H5基因组DNA为模板克隆获得pdc6,并利用生物信息学分析方法对其序列进行验证及分析。该序列长度为1692 bp,无碱基缺失,且该基因具有完整的开放阅读框,该基因编码的Pdc6包含563个氨基酸残基,该蛋白质中酸性氨基酸残基数量和碱性氨基酸残基数量大致相同;Pdc6理论等电点5.8,疏水性最大值为2.32,亚细胞定位预测其位于细胞外基质,属于酸性蛋白质,并预测了空间结构模型。本研究说明该蛋白结构与Pdc1和Pdc5结构类似,对酿酒酵母H5编码丙酮酸脱羧酶(Pdc6)基因序列克隆和生物信息学分析后,可为后续单基因敲除选取基因顺序的研究提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 生物信息学分析 克隆 丙酮酸脱羧酶基因 开放阅读框
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酿酒酵母类丙酮酸脱羧酶基因缺失对高级醇生成量的影响 被引量：12
4
作者 郝欣 肖冬光 张翠英 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1030-1035,共6页
【目的】通过构建酿酒酵母类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C)缺失的工程菌株,研究该基因对酿酒酵母浓醪发酵产高级醇特别是异戊醇的影响。【方法】以酿酒酵母工业菌株AY-15的单倍体a-8或α-22的基因组DNA为模板,PCR分别扩增YDL080C上下游非... 【目的】通过构建酿酒酵母类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C)缺失的工程菌株,研究该基因对酿酒酵母浓醪发酵产高级醇特别是异戊醇的影响。【方法】以酿酒酵母工业菌株AY-15的单倍体a-8或α-22的基因组DNA为模板,PCR分别扩增YDL080C上下游非编码区片段YA和YB;以pUG6质粒为模板,PCR扩增KanMX抗性基因片段。分别将YA、YB和KanMX片段连入pUC19载体,构建重组质粒pUC-YABK;并以其为模板,PCR扩增YA-KanMX-YB重组盒,分别电转化单倍体a-8和α-22。将转化子和亲本分别进行酒精浓醪发酵,发酵结束后测定其发酵性能和高级醇的生成量。【结果】筛选获得了YDL080C基因缺失突变株。酒精发酵后发酵性能和高级醇测定结果显示,转化子的异戊醇及总高级醇生成量与对应的单倍体亲本相比没有明显变化,但酒精度分别比亲本提高了0.6(%,v/v)和0.4(%,v/v)。【结论】YDL080C基因缺失对降低酿酒酵母发酵产高级醇特别是异戊醇没有明显作用,但会使酒精度有所提高。 展开更多
关键词 酿酒酵母 类丙酮酸脱羧酶 类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C) 高级醇
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热休克蛋白增加大肠杆菌抗逆性和乙醇产量的研究 被引量：2
5
作者 李伟丽 李海燕 +2 位作者 李良 曾一梅 汪浩勇 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第5期54-58,共5页
目的:研究热休克蛋白对增加大肠杆菌抗逆性和乙醇产量的影响。方法:运用基因工程技术,用大肠杆菌的Lac启动子、运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因(pdc)和乙醇脱氢酶基因(adhB),构建可以在大肠杆菌中表达的Lac-AP操纵子。Lac-AP操纵子导... 目的:研究热休克蛋白对增加大肠杆菌抗逆性和乙醇产量的影响。方法:运用基因工程技术,用大肠杆菌的Lac启动子、运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因(pdc)和乙醇脱氢酶基因(adhB),构建可以在大肠杆菌中表达的Lac-AP操纵子。Lac-AP操纵子导入大肠杆菌,可使大肠杆菌发酵糖生产乙醇。再用来自超嗜热菌强烈火球菌(Pyrococcus furiosus)的小分子热休克蛋基因(sHsp),构建在大肠杆菌中表达的Lac-APH操纵子。结果:成功地构建了耐高温产生乙醇的大肠杆菌LAPH和LAP,它们发酵后乙醇的产量分别为11.5g/L、7.9g/L,而对照菌LH的产量只有为0.5g/L。与对照菌LH相比,LAPH和LAP的产量分别提高了23倍和15.8倍。结果证明:与对照LAP相比,热休克蛋白使菌种LAPH的45℃温度耐受性提高15.75倍、50℃温度耐受性提高40.7倍,乙醇的产量增高高达4.74倍。结论:研究表明,小分子热休克蛋白的表达,可使细菌在致死温度下的存活率显著提高,耐受温度明显增强,乙醇产量显著提高。 展开更多
关键词 丙酮酸脱羧酶基因(pdc) 乙醇脱氢酶基因(adhB) 大肠杆菌 燃料乙醇 热休克蛋白基因(sHsp)
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热休克蛋白对枯草芽孢杆菌抗逆性和乙醇产量的影响 被引量：1
6
作者 李伟丽 秦琦 +2 位作者 李良 罗敏 汪浩勇 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第21期8963-8965,共3页
[目的]研究热休克蛋白对增强枯草芽孢杆菌的抗逆性和增加乙醇产量的影响。[方法]运用基因工程技术,用大肠杆菌的Lac启动子、运动发酵单胞菌丙酮酸脱羧酶基因(pdc)和乙醇脱氢酶基因(adhB),构建在枯草芽孢杆菌中表达的BLAP操纵子,BLAP操... [目的]研究热休克蛋白对增强枯草芽孢杆菌的抗逆性和增加乙醇产量的影响。[方法]运用基因工程技术,用大肠杆菌的Lac启动子、运动发酵单胞菌丙酮酸脱羧酶基因(pdc)和乙醇脱氢酶基因(adhB),构建在枯草芽孢杆菌中表达的BLAP操纵子,BLAP操纵子导入枯草芽孢杆菌可使其发酵糖生产乙醇。然后用超嗜热菌强烈火球菌(Pyrococcusfuriosus)的小分子热休克蛋白基因(sHsp)构建在枯草芽孢杆菌中表达的BLAPH操纵子。[结果]成功地构建了能表达小分子热休克蛋白,产生乙醇的枯草芽孢杆菌。[结论]小分子热休克蛋白的表达,使枯草芽孢杆菌在致死温度下的存活率显著提高,对温度及乙醇的耐受性显著增强。同时枯草芽孢杆菌的乙醇产量显著提高。 展开更多
关键词 丙酮酸脱羧酶基因(pdc) 乙醇脱氢酶基因(adhB) 枯草芽孢杆菌 燃料乙醇 小分子热休克蛋白基因(sHsp)
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探索一种新型生物发酵途径生产乙醇
7
作者 黄立 黄潇 +4 位作者 董元楷 邢芸 葛驰宇 刘景晶 曹荣月 《药物生物技术》 CAS CSCD 2012年第3期213-217,共5页
在质粒pUC19中插入菊欧氏杆菌pehX启动子,并与全合成的运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因(pdc),乙醇脱氢酶基因(adhB)串联,构建pUC19-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆,转化大肠杆菌DH5α,经气相色谱检测,在大肠杆菌中乙醇的表达量达到0.85%。... 在质粒pUC19中插入菊欧氏杆菌pehX启动子,并与全合成的运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因(pdc),乙醇脱氢酶基因(adhB)串联,构建pUC19-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆,转化大肠杆菌DH5α,经气相色谱检测,在大肠杆菌中乙醇的表达量达到0.85%。菊欧氏杆菌富含多种纤维素酶,与一些仅可利用基本糖类作为碳源的大肠杆菌等相比,其可以利用纤维素作为碳源。本实验设计将pUC19-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆转化至菊欧氏杆菌,尝试用氯化钙、电击等转化方法,但均没有获得转化子。提示需要寻找新的转化方法或者将pdc和adhB基因整合到菊欧氏杆菌的基因组中以使其能产生乙醇。 展开更多
关键词 菊欧氏杆菌 丙酮酸脱羧酶基因(pdc) 乙醇脱氢酶基因(adhB) 气相色谱 转化
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