hTERT启动子驱动的TRAIL诱导宫颈癌细胞的凋亡作用 被引量：5

1

作者 张明 辛晓燕 +1 位作者 李红梅 宋晖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期638-640,644,共4页

目的:探讨端粒酶(hTERT)启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对宫颈癌细胞生长抑制的作用。方法:脂质体转染将hTERT-TRAIL转染至宫颈癌细胞HeLa,RT-PCR检测TRAILmRNA的表达;通过MTT、流式细胞术检测稳定转染细胞的生长情况... 目的:探讨端粒酶(hTERT)启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对宫颈癌细胞生长抑制的作用。方法:脂质体转染将hTERT-TRAIL转染至宫颈癌细胞HeLa,RT-PCR检测TRAILmRNA的表达;通过MTT、流式细胞术检测稳定转染细胞的生长情况,电镜观察转染细胞的超微结构。结果:转染真核表达载体hTERT-TRAIL组细胞中TRAILmRNA细胞表达量高于对照组(P<0.05);hTERT-TRAIL组细胞对宫颈癌细胞的抑制率高于CMV-TRAIL组和对照组(P<0.05);hTERT-TRAIL组细胞对宫颈癌细胞的凋亡率明显高于转染CMV-TRAIL组和对照组(P<0.01);电镜结果显示,hTERT-TRAIL对细胞作用是以细胞凋亡为主。结论:hTERT启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人宫颈癌细胞的生长有明显的抑制作用和诱导凋亡作用,为宫颈癌的研究奠定基础和临床治疗提供思路。 展开更多

关键词 宫颈肿瘤 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 端粒酶启动子 细胞凋亡

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重组TRAIL基因真核表达载体的构建及其诱导喉癌细胞株Hep2凋亡的效应 被引量：1

2

作者 陈剑秋 成诗银 +2 位作者 张惠中 韩明坤 张丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期229-232,共4页

　目的: 研究TRAIL基因结合端粒酶启动子特异性靶向治疗的作用。方法: 利用已有编码凋亡诱导功能区的TRAILcDNA片断的表达载体pRNDE2 -1和IL- 2信号肽基因序列, 扩增IL- 2信号肽基因和TRAIL基因的融合基因, 并克隆入真核表达载体pGL3 18... 　目的: 研究TRAIL基因结合端粒酶启动子特异性靶向治疗的作用。方法: 利用已有编码凋亡诱导功能区的TRAILcDNA片断的表达载体pRNDE2 -1和IL- 2信号肽基因序列, 扩增IL- 2信号肽基因和TRAIL基因的融合基因, 并克隆入真核表达载体pGL3 181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游, 构建TRAIL基因的重组真核表达载体pGL3 181hTERT/TRAIL。将该重组载体经阳离子脂质体转染入人喉癌细胞株Hep2中, 以台盼蓝拒染法和基因组DNA琼脂糖凝胶电泳, 观察转染的Hep2细胞的凋亡。结果: 构建了肿瘤人可溶性TRAIL基因的重组真核表达载体pGL3 181hTERT/TRAIL, 其表达产物能诱导喉癌细胞Hep2凋亡。结论: 成功地构建了重组真核表达载体pGL3 181hTERT/TRAIL, 为肿瘤的基因靶向治疗提供了可能性。 展开更多

关键词 TRAIL 端粒酶启动子 分泌表达 凋亡 基因治疗

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MDA-7基因的腺病毒载体构建及对肿瘤细胞凋亡的影响 被引量：1

3

作者 王艳 浦颖艳 +6 位作者 方琳 孙丽君 胡晓翠 邱红 苏长青 曹祥荣 江淑芳 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2008年第3期205-208,共4页

目的:构建一种端粒酶启动子调控目的基因MDA-7/hIL24表达的复制缺陷型腺病毒,并初步探索其抗肿瘤活性。方法:通过基因操作技术将启动子(hTERTp)+目的基因(MDA-7)插入到5型腺病毒E1A区域,构建复制缺陷型腺病毒AdTP-mda7;同时构建对照病毒... 目的:构建一种端粒酶启动子调控目的基因MDA-7/hIL24表达的复制缺陷型腺病毒,并初步探索其抗肿瘤活性。方法:通过基因操作技术将启动子(hTERTp)+目的基因(MDA-7)插入到5型腺病毒E1A区域,构建复制缺陷型腺病毒AdTP-mda7;同时构建对照病毒AdTP-EGFP。TCID50法测定病毒滴度。应用蛋白质印迹法检测MDA-7在肿瘤细胞株中的表达状态;通过结晶紫染色实验检测两种病毒对肿瘤细胞的杀伤差异。结果:成功构建携带目的基因的腺病毒载体,PCR鉴定正确;蛋白质印迹结果表明MDA-7选择性地在多种肿瘤细胞株中表达,诱导肿瘤细胞凋亡,如A549,SGC-7901等,在以相同MOI值感染原代成纤维细胞时,原代细胞中没有检测到MDA-7表达;结晶紫染色试验结果表明AdTP-mda7对肿瘤细胞株的杀伤能力明显高于对照病毒AdTP-EGFP。结论:成功构建复制缺陷型腺病毒AdTP-mda7,并证实MDA-7蛋白在肿瘤细胞中过表达诱导多种肿瘤细胞株发生凋亡。 展开更多

关键词 复制缺陷型腺病毒 端粒酶启动子 肿瘤基因治疗

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人甲状腺鳞癌细胞中端粒酶启动子功能分析 被引量：1

4

作者 张蕾 金辉 +2 位作者 田力 李伟伟 李鹏飞 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期217-219,共3页

目的观察不同长度的人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子对启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)能力的差异,评价启动子启动功能与长度的关系。方法克隆4段不同长度的端粒酶基因起始位点(ATG)上游序列长约2 068、1 135、333和142 bp的启动子片段... 目的观察不同长度的人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子对启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)能力的差异,评价启动子启动功能与长度的关系。方法克隆4段不同长度的端粒酶基因起始位点(ATG)上游序列长约2 068、1 135、333和142 bp的启动子片段,通过观察EGFP的荧光强度,确定启动效率。结果显微镜观察荧光亮度及荧光分光光度计检测荧光强度随着启动子长度的缩短而减弱,荧光强度由高至低依次为8.56,7.81,6.88,3.62。结论人端粒酶的表达强度及端粒酶的活性变化与其启动子的长度有关,而肿瘤细胞的端粒酶表达相对增强,可通过下调启动子活性,为肿瘤的靶向性基因治疗提供新思路。 展开更多

关键词 端粒酶启动子 荧光蛋白 SW579

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hTERT启动子调控的TRAIL基因对乳腺癌细胞株的杀伤作用

5

作者 刁建东 卢振霞 毕黎琦 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第2期167-169,共3页

目的探讨hTERT、CMV启动子调控下TRAIL基因对乳腺癌细胞的生长抑制作用。方法脂质体法将pACCMV-EGFP-TRAIL、pAChTRET-EGFP-TRAIL转染至乳腺癌细胞MDA-MB-435,MTT法检测转染前后乳腺癌细胞的增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果p... 目的探讨hTERT、CMV启动子调控下TRAIL基因对乳腺癌细胞的生长抑制作用。方法脂质体法将pACCMV-EGFP-TRAIL、pAChTRET-EGFP-TRAIL转染至乳腺癌细胞MDA-MB-435,MTT法检测转染前后乳腺癌细胞的增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果pACCMV-EGFP-TRAIL转染组和pAChTRET-EGFP-TRAIL转染组OD490值明显低于空白对照组和空质粒转染组,流式细胞术检测细胞凋亡率也明显增高,并且pAChTRET-EGFP-TRAIL转染组稍高于pACCMV-EGFP-TRAIL转染组。结论pAChTRET-EGFP-TRAIL、pACCMV-EGFP-TRAIL对乳腺癌细胞的生长有明显的抑制作用和诱导凋亡作用,为乳腺癌的基因治疗研究奠定基础。 展开更多

关键词 乳腺癌 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 端粒酶启动子 细胞凋亡

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端粒酶启动子肿瘤靶向基因抗大肠癌的研究

6

作者 何超 陈斌 +5 位作者 张磊 胡文献 劳伟峰 黄学锋 胡晓彤 方炳良 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2004年第8期475-477,共3页

目的探讨端粒酶 (hTERT)启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducingligand ,TRAIL)基因在大肠癌细胞DLD1的表达及肿瘤杀伤作用。方法通过腺病毒载体系统将hTERT启动子驱动的TRAIL基因转入大肠癌细胞DLD1... 目的探讨端粒酶 (hTERT)启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducingligand ,TRAIL)基因在大肠癌细胞DLD1的表达及肿瘤杀伤作用。方法通过腺病毒载体系统将hTERT启动子驱动的TRAIL基因转入大肠癌细胞DLD1,流式细胞仪检测GFP/TRAIL的表达和DLD1细胞凋亡率。结果端粒酶启动子驱动的GFP/TRAIL基因和CMV启动子驱动的GFP(绿色荧光蛋白 )基因在DLD1内的表达率分别达 4 1 6 3%和 5 4 0 7% ;GFP/TRAIL基因对DLD1细胞的生长抑制率和凋亡率分别达 93 5 0 %和 5 6 97% ,与PBS和Ad/hTERT LacZ的差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论端粒酶启动子驱动的GFP/TRAIL融合基因在大肠癌细胞中能够有效地表达 ;TRAIL基因对大肠癌细胞DLD1有明显的抑制生长和促凋亡作用。 展开更多

关键词 端粒酶启动子 基因治疗 大肠癌 肿瘤坏死因子 凋亡诱导配体

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人端粒酶启动子(hTERTp)真核表达载体的构建

7

作者 田力 李伟伟 +1 位作者 李鹏飞 张蕾 《辽宁医学院学报》 CAS 2008年第6期481-483,共3页

目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子,构建真核表达载体pEGFP-hTERT。方法以人类基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增hTERT上游序列长约1135 bp的启动子片段,克隆入绿色荧光蛋白GFP的基因上游,测序鉴定。结果DNA测序结果与GenBank中... 目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子,构建真核表达载体pEGFP-hTERT。方法以人类基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增hTERT上游序列长约1135 bp的启动子片段,克隆入绿色荧光蛋白GFP的基因上游,测序鉴定。结果DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致,片段长度为1135 bp。结论人端粒酶启动子的真核表达载体pEGFP-hTERT构建成功,为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 端粒酶启动子 荧光蛋白 肿瘤

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肿瘤特异性溶瘤腺病毒载体的构建及其在肿瘤细胞中特异性的表达

8

作者 浦颖艳 方琳 +5 位作者 沈权 孙丽君 胡小翠 王艳 曹祥荣 苏长青 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期92-96,共5页

为构建一种由人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控的能够在肿瘤细胞中特异性增殖的新型肿瘤基因治疗溶瘤腺病毒载体系统,利用基因重组技术将hTERTp插入5型腺病毒E1A基因上游,构建肿瘤特异性增殖腺病毒AdSU,使其携带绿色荧光蛋白报告基因... 为构建一种由人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控的能够在肿瘤细胞中特异性增殖的新型肿瘤基因治疗溶瘤腺病毒载体系统,利用基因重组技术将hTERTp插入5型腺病毒E1A基因上游,构建肿瘤特异性增殖腺病毒AdSU,使其携带绿色荧光蛋白报告基因.同时构建增殖缺陷型腺病毒Ad-EGFP作为对照.通过Westernblot分析表明该特异性增殖腺病毒AdSU-EGFP在肿瘤细胞中特异性表达EIA.而通过荧光显微镜观察两者增殖实验发现,AdSU-EGFP在正常成纤维细胞株BJ及原代子宫成纤维细胞中无增殖,在肝癌细胞株MH-CC和肺癌细胞株A549中,则可见病毒增殖并裂解细胞的现象.由此可认为成功构建了肿瘤基因治疗的特异性溶瘤腺病毒载体系统AdSU,该系统能够在肿瘤细胞中特异性增殖并表达所携带的外源基因,这对肿瘤的定向基因治疗有着重要意义. 展开更多

关键词 基因治疗 溶瘤腺病毒 肿瘤 端粒酶启动子

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靶向性重组TRAIL基因诱导人黑色素瘤细胞株A375凋亡的效应

9

作者 朱春生 陈剑秋 《山东大学耳鼻喉眼学报》 CAS 2008年第5期408-411,共4页

目的研究TRAIL基因结合端粒酶启动子特异性靶向治疗的作用。方法刺激人外周血淋巴细胞增殖,提取总DNA。采用RT-PCR扩增含有IL-2信号肽和TRAIL功能区的融合基因,克隆入pGL3-181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游,构建TRAIL基因的重组真... 目的研究TRAIL基因结合端粒酶启动子特异性靶向治疗的作用。方法刺激人外周血淋巴细胞增殖,提取总DNA。采用RT-PCR扩增含有IL-2信号肽和TRAIL功能区的融合基因,克隆入pGL3-181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游,构建TRAIL基因的重组真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL。将该重组载体经阳离子脂质体转染入人黑色素瘤细胞株A375中,以台盼蓝拒染法和电镜下细胞形态变化,观察转染的A375细胞的凋亡。结果构建了肿瘤人可溶性TRAIL基因的重组真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL,其表达产物能诱导人黑色素瘤细胞株A375凋亡。结论成功地构建了重组真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL,为肿瘤的基因靶向治疗提供了可能性。 展开更多

关键词 TRAIL 端粒酶启动子 凋亡 基因治疗

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端粒酶启动子突变对EGFP启动效率影响

10

作者 张蕾 田力 +1 位作者 李伟伟 李鹏飞 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1011-1012,共2页

目的观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)的突变启动子启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)发光强度的变化情况。方法应用PCR引入突变方法获得hTERT上游序列长约300bp的启动子片段,包括单增强子(E-box)突变序列(2个);双E-box突变序列;单转录因子特... 目的观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)的突变启动子启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)发光强度的变化情况。方法应用PCR引入突变方法获得hTERT上游序列长约300bp的启动子片段,包括单增强子(E-box)突变序列(2个);双E-box突变序列;单转录因子特异蛋白1(Sp1)结合位点突变序列(5个);Sp1结合位点全部(Sp1-5)突变序列,分别克隆入无启动子的绿色荧光蛋白EGFP的基因上游,稳转入SW579细胞中,观察细胞EGFP的发光强度。结果除了约-110bp的单Sp1突变对EGFP的启动效率影响不大之外,任何一种E-box或Sp1突变的启动子均显示启动效率不同程度的下降,其中双E-box突变的启动子和5个SP1结合位点均突变的启动子启动绿色荧光蛋白的表达强度明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染人端粒酶启动子突变基因,能够抑制SW579细胞EGFP的发光效率,证明人端粒酶启动子的E-box序列、SP1结合序列对启动子的启动效率密切相关,为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗提供了基础依据。 展开更多

关键词 端粒酶启动子 绿色荧光蛋白 SW579细胞

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E-box元件修饰端粒酶核心启动子序列及体外转录活性分析(英文) 被引量：1

11

作者 杨应斌 蔡绍皙 +8 位作者 于淑惠 杨力 李军 余松涛 戴小珍 王星星 晏小清 辛鑫 宋国立 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期510-514,共5页

人类端粒酶启动子(hTERT启动子)在肿瘤基因治疗中的有效性已经得到了证实.然而,hTERT启动子有限的肿瘤靶向转录活性困扰着它的临床应用.早期研究已经揭示,核心hTERT启动子上的-34位E-box元件与该启动子的肿瘤靶向转录活性有关.为进一步... 人类端粒酶启动子(hTERT启动子)在肿瘤基因治疗中的有效性已经得到了证实.然而,hTERT启动子有限的肿瘤靶向转录活性困扰着它的临床应用.早期研究已经揭示,核心hTERT启动子上的-34位E-box元件与该启动子的肿瘤靶向转录活性有关.为进一步探索核心hTERT启动子序列3′端富余E-box元件是否能提高启动子的肿瘤靶向转录能力,用化学合成方法在野生型hTERT(WT-hTERT)核心启动子片段(编码蛋白起始子ATG上游-268bp～-10bp)的3′端接入3个E-box序列,构建成修饰型hTERT(Mod-hTERT)启动子.然后,分别用WT-hTERT和Mod-hTERT启动子去调控增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及荧光素酶报告基因在293FT、HepGⅡ、SGC7901、U2OS、以及原代培养人成纤维细胞(PHF)中表达.结果表明,在Mod-hTERT启动子的各实验组细胞中,能够在端粒酶阳性的293FT、HepGⅡ及SGC7901细胞组中观测到EGFP的表达,而在端粒酶阴性的U2OS及PHF细胞组中没有观测到EGFP的表达;在端粒酶阳性的293FT、HepGⅡ和SGC7901细胞株中,Mod-hTERT启动子调控下的荧光素酶活性要高于WT-hTERT启动子组(P<0.01);而在端粒酶阴性的U2OS细胞组中,Mod-hTERT启动子调控下的荧光素酶活性则低于WT-hTERT启动子组(P<0.01);在PHF细胞组中,Mod-hTERT启动子组与WT-hTERT启动子组的荧光素酶活性差异不显著(P>0.05).研究提示,在3′端增加E-box元件可以提高核心hTERT启动子序列的肿瘤靶向转录活性. 展开更多

关键词 人类端粒酶启动子 E-BOX 荧光素酶 增强型绿色荧光蛋白 肿瘤靶向性

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构建一种受hTERT启动子和miR-145双调控的更为安全的新型溶瘤腺病毒

12

作者 王荣花 韦芳 +2 位作者 李惠明 胡冉 王慧萍 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第35期6801-6806,共6页

目的:构建一种受人端粒酶逆转录酶(h TERT)启动子和mi R-145双调控的更加安全的条件复制型腺病毒。方法:在已构建的h TERT启动子调控早期复制必需基因E1A的条件复制型腺病毒Adzq11基础上,再将四个拷贝的mi R-145的靶序列加入到E1A的3&#... 目的:构建一种受人端粒酶逆转录酶(h TERT)启动子和mi R-145双调控的更加安全的条件复制型腺病毒。方法:在已构建的h TERT启动子调控早期复制必需基因E1A的条件复制型腺病毒Adzq11基础上,再将四个拷贝的mi R-145的靶序列加入到E1A的3'非翻译区,构建新型溶瘤腺病毒Adzq11-145T。应用Real-time PCR测定人非小细胞肺癌细胞A549和人胚肺成纤维细胞HLF中mi R-145的表达量;然后在这两株细胞中,分别转染Adzq11和Adzq11-145T对应的穿梭质粒及感染病毒本身,用Real-time PCR检测E1A表达量以测定调控效果;用病毒空斑单位法检测两种病毒的复制情况;用CCK8检测对A549和HLF细胞的杀伤作用。结果:构建的新型溶瘤腺病毒Adzq11-145T在HLF中复制量明显低于Adzq11,其E1A m RNA水平和杀伤效应也显著降低。而在A549中,Adzq11-145T在E1A表达、病毒复制和溶瘤能力方面较Adzq11均无显著降低。结论:成功构建出一种新的受转录和转录后水平双重调控的条件复制型腺病毒Adzq11-145T,它比仅加入h TERT启动子调控早期复制必需基因E1A的腺病毒Adzq11更加安全。 展开更多

关键词 人端粒酶启动子 安全性 MIR-145 溶瘤腺病毒

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特异性hTERT启动子在肿瘤细胞中启动效率研究 被引量：2

13

作者 李玮 谭建 +1 位作者 吴蓓 李宁 《生物医学工程与临床》 CAS 2010年第3期252-256,共5页

目的证明人端粒酶亚单位(hTERT)启动子可以引导目的基因在肿瘤细胞中表达。方法先使用RT-PCR检测各细胞系中hTERT mRNA的表达,再使用PCR方法扩增hTERT启动子基因的不同长度片段,并构建重组质粒,使用BglⅡ和HindⅢ双酶切鉴定重组质粒并... 目的证明人端粒酶亚单位(hTERT)启动子可以引导目的基因在肿瘤细胞中表达。方法先使用RT-PCR检测各细胞系中hTERT mRNA的表达,再使用PCR方法扩增hTERT启动子基因的不同长度片段,并构建重组质粒,使用BglⅡ和HindⅢ双酶切鉴定重组质粒并测序。最后使用Dual-Glo Luciferase Assay System激发荧光检测各细胞系中重组质粒中hTERT启动子的启动效率。结果 pGL3-204、pGL3-378、pGL3-1375重组质粒中的hTERT启动子序列与预期一致,质粒构建成功。hTERT启动子引导荧光基因的重组质粒在H460中启动效率最强可以达到SV40启动子的80%,而在FRO、U251中启动效率可以达到SV40启动子的30%左右。hTERT全长启动子序列的启动效率在ARO细胞系中比pGL3-204、pGL3-378中的启动子片段启动效率强,而在FRO、H460和U251细胞系中pGL3-204中的启动子片段启动效率最强。结论 hTERT启动子引导荧光基因的重组质粒,可以实现只在肿瘤细胞系中表达,但在正常细胞中不表达的效果。 展开更多

关键词 人端粒酶亚单位启动子 肿瘤 重组质粒

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双病毒共感染的人脐带间充质干细胞多重靶向肝癌细胞的治疗体系的建立 被引量：1

14

作者 杨圆圆 卢杨 +3 位作者 张晓龙 张晴 李真真 张砚君 《生物医学工程与临床》 CAS 2016年第5期450-457,共8页

目的基于间充质干细胞(MSC)向肿瘤部位归巢的能力,利用E1A基因修饰的人脐带间充质干细胞(HUMSC)包装出携带人端粒酶逆转录启动子(hTERTp),以驱动抑癌基因的腺病毒,并感染HepG2肝癌细胞系。方法利用组织块贴壁法从脐带Wharton’s jelly(... 目的基于间充质干细胞(MSC)向肿瘤部位归巢的能力,利用E1A基因修饰的人脐带间充质干细胞(HUMSC)包装出携带人端粒酶逆转录启动子(hTERTp),以驱动抑癌基因的腺病毒,并感染HepG2肝癌细胞系。方法利用组织块贴壁法从脐带Wharton’s jelly(WJ)分离培养HUMSC。以pGL3-basic、pCDH1-MSC1-EF1-Ds Red、pAd-Track等载体为基础,用聚合酶链反应(PCR)、overlap PCR、酶切、连接等技术构建pGL3-hTERTp报告基因载体、pLentiR.E1A慢病毒表达载体、pAd-hTERTp腺病毒表达载体,经测序验证其正确性。利用双荧光素酶的方法鉴定hTERTp的特异性。利用实时定量PCR的方法分别检测MSC.pLentiR+pAd-Track(共转染腺病毒及对照慢病毒的MSC)和MSC.pLentiR.E1A+pAdTrack中不同时间点的病毒相对拷贝数,用电子显微镜观察HUMSC中病毒颗粒的产生。流式细胞术检测由双病毒共感染的HUMSC包装出的腺病毒对HepG2细胞系的感染效率。Transwell方法研究双病毒感染对HUMSC向HepG2细胞趋化的影响。结果成功从脐带WJ组织中分离培养HUMSC。成功构建载体pGL3-hTERTp、pLentiR.E1A、pAd-hTERTp。双荧光素酶方法证明hTERTp在不同肿瘤细胞中具有较高的转录活性,而在正常细胞中转录活性极低。Ad-Track及LentiR.E1A共同感染HUMSC后,随着腺病毒早期复制基因E1A逐渐表达,Ad-Track启动复制程序,最终将MSC裂解并释放具有感染能力的病毒颗粒,进一步感染HepG2细胞。感染双病毒的HUMSC与对照组一致在LentiR.E1A感染后32 h内可以穿过Transwell小室,向培养HepG2细胞的下室迁移。结论经过E1A修饰的HUMSC可包装出携带hTERTp肿瘤特异启动子的复制缺陷型腺病毒,并进一步感染肿瘤细胞的多重靶向治疗系统,为肿瘤的靶向基因治疗提供了新思路。 展开更多

关键词 脐带间充质干细胞 E1A 腺病毒 慢病毒 人端粒酶逆转录启动子(hTERTp) 载体 肿瘤细胞

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