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竞争化学发光酶免疫测定技术检测盐酸克伦特罗 被引量:3
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作者 王毅谦 陆慧媛 +4 位作者 袁芳 徐恒 方云涛 沈伟健 于洋 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第11期4518-4524,共7页
目的:建立一种检测盐酸克伦特罗(clenbuterol, CLB)的竞争化学发光酶免疫测定法(chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA)。方法基于CLB的竞争酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA),通过优化反应... 目的:建立一种检测盐酸克伦特罗(clenbuterol, CLB)的竞争化学发光酶免疫测定法(chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA)。方法基于CLB的竞争酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA),通过优化反应温度、反应时间和缓冲体系pH建立了CLB的CLEIA测定法。用CLB小鼠中毒模型评价CLEIA检测法对实际样本的检测效果,并将CLEIA与LC-MS法的相关性进行了比较。结果 CLEIA法测定CLB的检测范围为0.0433~42.5363μg/L,检测限为0.0178μg/L,变异系数小于10%,回收率为95%~110%,对莱克多巴胺和沙丁胺醇仅有极低的交叉反应性。所建立的 CLEIA 法与 LC-MS 法在检测实际样本时具有较高的相关性。结论本研究建立的CLEIA法操作简便,检测限、灵敏度、准确度、特异性均符合检测要求,可用于实际样品的检测。 展开更多
关键词 竞争化学发光免疫测定法 竞争免疫吸附测定法 盐酸克伦特罗
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二氟沙星残留检测的Ci-ELISA方法建立 被引量:3
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作者 潘孝成 祁克宗 +1 位作者 朱良强 赵瑞宏 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第10期127-129,共3页
以合成的二氟沙星(DIF)人工抗原为基础,制备出了高效价抗DIF血清(1:2^9×10^4),并建立了DIF间接竞争酶联免疫吸附测定法(Ci—ELISA法)。标准曲线的线性回归方程为y=-0.223x-I-0.9631(r=0.9929),中值(I50)=119.21n... 以合成的二氟沙星(DIF)人工抗原为基础,制备出了高效价抗DIF血清(1:2^9×10^4),并建立了DIF间接竞争酶联免疫吸附测定法(Ci—ELISA法)。标准曲线的线性回归方程为y=-0.223x-I-0.9631(r=0.9929),中值(I50)=119.21ng/ml,最低检测(LOD)=1.14ng/ml,线性范围为1.14~10000ng/ml,方法的平均批内变异系数(CV)为4.83%,平均批间CV为10.69%。DIF以浓度15~10000ng/ml在鸡肉中添加时,回收率为81.24%~90.64%,变异系数为8.18%~11.75%。 展开更多
关键词 二氟沙星 间接竞争免疫吸附测定法 残留 鸡肉
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灵芝酸A多克隆抗体制备及酶联免疫吸附测定法的建立 被引量:4
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作者 袁耀武 田益玲 +2 位作者 李升云 杨心怡 马晓飞 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第16期332-337,共6页
以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示:多克隆抗体中... 以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示:多克隆抗体中存在靶向偶联抗原3个区域的独特型抗体,总效价为1∶78 125,其中抗灵芝酸A特异性抗体效价为1∶3 125。间接竞争酶联免疫吸附测定法的灵芝酸A检出限为0.3μg/L,半数抑制浓度为4.0μg/L,线性范围在0.6~27.3μg/L之间。样品测定批间变异系数低于10%,样品加标回收率在82.9%~118.6%之间,对22份灵芝粉剂产品的测定结果显示不同品牌产品中灵芝酸A含量的差异极显著,该法测定结果与高效液相色谱法的测定结果相比,相关系数为0.972。结果表明,间接竞争酶联免疫吸附法测定灵芝酸A可行,该方法能够为灵芝保健品市场中相关产品的质量监控提供一种辅助方案。 展开更多
关键词 灵芝酸A 多克隆抗体 间接竞争免疫吸附测定法
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蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量:4
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作者 刘河冰 秦誉 +1 位作者 邢维维 马立才 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第5期294-301,共8页
目的:旨在建立一种检测蘑菇中鹅膏毒肽(Amanitin,AMA)的间接竞争酶联免疫吸附方法(Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。方法:通过EDC/NHS在α-鹅膏毒肽的羧基位置引入6-氨基己酸得到半抗原,并进一步与... 目的:旨在建立一种检测蘑菇中鹅膏毒肽(Amanitin,AMA)的间接竞争酶联免疫吸附方法(Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。方法:通过EDC/NHS在α-鹅膏毒肽的羧基位置引入6-氨基己酸得到半抗原,并进一步与不同的载体蛋白偶联制备免疫原和包被原。之后,利用免疫原免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。基于所获得的抗体,并通过对包被原和抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标二抗工作浓度和孵育时间等条件的优化,建立了蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA检测方法,最后对所建立方法的灵敏度、添加回收率、批内及批间变异等参数进行了评价。结果:合成的半抗原分子量为1033.12,经MALDI-TOF鉴定免疫原的偶联比约为10.03。基于杂交瘤技术制备、筛选出鼠单克隆抗体13H4的IC50为1.91μg/L。基于所获得单克隆抗体,所建立蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA方法的检出限为0.88μg/kg,添加回收率为85.66%~113.05%,批内变异系数为5.35%~9.54%,批间变异系数小于15%。结论:本研究所建立的ic-ELISA方法准确度、精密度、灵敏度较高、性能稳定,为突发毒蘑菇中毒事件的毒原分析提供了一种简便、可靠的快速检测方法。 展开更多
关键词 蘑菇 鹅膏毒肽 间接竞争免疫吸附测定法
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基于纳米抗体建立icELISA检测乳制品中黄曲霉毒素M1
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作者 刘海媛 刘颖达 +2 位作者 Tuyatsetseg Jambal 吉日木图 伊丽 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期46-52,62,共8页
纳米抗体(nanobody,Nb)具有稳定性高、特异性强、易于表达等优势,已经成为小分子免疫分析的重要工具。为了监测乳制品中黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的污染情况,以先前从双峰驼AFM1免疫文库中淘选得到的抗AFM1型纳米抗体M6为研究对... 纳米抗体(nanobody,Nb)具有稳定性高、特异性强、易于表达等优势,已经成为小分子免疫分析的重要工具。为了监测乳制品中黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的污染情况,以先前从双峰驼AFM1免疫文库中淘选得到的抗AFM1型纳米抗体M6为研究对象,评估其理化性质并建立间接竞争酶联免疫吸附测定法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。优化反应体系中封闭方法、甲醇溶液、pH值和离子强度等参数后,建立竞争抑制标准曲线,并进行方法学验证特异性和准确性。结果表明,Nb-M6具有良好的亲和力和热稳定性;Nb-icELISA的检测限(limit of detection,LOD)为0.111 ng/mL,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为1.498 ng/mL,乳制品加标回收率为89.8%~104.1%,与高效液相色谱法的检测结果趋于一致。该方法操作简单、便捷,可应用于乳制品中AFM1的初步批量筛查。 展开更多
关键词 纳米抗体 间接竞争免疫吸附测定法 黄曲霉毒素M1 乳制品
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手持拉曼光谱仪在抗体类药物鉴别中的应用研究 被引量:1
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作者 段茂芹 于传飞 +2 位作者 付志浩 梅玉婷 王兰 《中国药事》 CAS 2023年第10期1160-1171,共12页
目的:基于主成分分析(PCA)算法的Trutools模式,利用手持拉曼光谱仪建立快速鉴别抗体类药物的方法。方法:通过选取抗PD-1抗体、抗VEGF抗体、抗Her-2抗体,采集拉曼光谱数据,建立数据模型,分别对3种抗体进行鉴别。选择其中一种抗PD-1抗体,... 目的:基于主成分分析(PCA)算法的Trutools模式,利用手持拉曼光谱仪建立快速鉴别抗体类药物的方法。方法:通过选取抗PD-1抗体、抗VEGF抗体、抗Her-2抗体,采集拉曼光谱数据,建立数据模型,分别对3种抗体进行鉴别。选择其中一种抗PD-1抗体,采用加热和光照两种条件对其进行加速降解处理,利用手持拉曼光谱仪对加速降解的抗体进行检测,研究所建方法能否检出加速降解的抗体。并通过分子排阻色谱(SEC-HPLC)、离子交换色谱(IEC-HPLC)及竞争结合酶联免疫吸附测定(ELISA)法对加速降解的抗体进行检测,与拉曼光谱检测结果进行比较。结果:通过建立的拉曼光谱数据模型可以鉴别3种不同类型的抗体,且拉曼光谱可以鉴别加速降解后的抗PD-1抗体。结论:手持拉曼光谱仪可以用来快速鉴别抗体类药物。本研究首次将手持拉曼光谱仪引入到抗体药物大分子检测中,为抗体类药物的现场快速鉴别及打假工作提供了新的工具与方法。 展开更多
关键词 主成分分析(PCA)算法 拉曼光谱 抗体 分子排阻色谱 离子交换色谱 竞争结合免疫吸附测定法 鉴别
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