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不同注射剂量9型腺相关病毒载体在小鼠脑和脊髓表达效果分析
1
作者 李鹏辉 刘昊东 +9 位作者 李嘉成 樊奇 王星 李彩琴 杨子程 陈玉洁 海日汗 曹晓娟 张小宇 杜晨光 《动物医学进展》 北大核心 2023年第12期23-28,共6页
腺相关病毒(AAV),尤其是从轴突末端转移到神经元的AAV9型,是研究神经环路和解析大脑功能的有力工具。利用囊泡型谷氨酸神经元(VGlut2)基因敲入小鼠联合脑立体定向注射,通过将AAV9-DIO-ChR2-EGFP病毒注射于VGlut2转基因小鼠的蓝斑核(LC)... 腺相关病毒(AAV),尤其是从轴突末端转移到神经元的AAV9型,是研究神经环路和解析大脑功能的有力工具。利用囊泡型谷氨酸神经元(VGlut2)基因敲入小鼠联合脑立体定向注射,通过将AAV9-DIO-ChR2-EGFP病毒注射于VGlut2转基因小鼠的蓝斑核(LC),探究不同注射剂量对病毒侵染范围和小鼠体重的影响。结果表明,与高注射量(1μL)相比,低注射量(0.5μL)可将AAV9-DIO-ChR2-EGFP限定至蓝斑核(LC)。在AAV9-DIO-ChR2-EGFP注射3周后,侵染范围由LC延伸至初级运动皮质(primary motor cortex,M1)、下丘脑、中缝苍白核(araphe pallidus nucleus,Rpa)和颈髓(cervical spinal cord,CSC)。随后检测了低注射量的AAV9(0.5μL)是否影响小鼠体重,统计结果表明,0.5μL AAV9注射对小鼠体重无影响(P=0.9795)。结果表明,低注射量(0.5μL)可以在一定程度上限制AAV的表达范围,并且脑内注射AAV9不会改变小鼠体重。 展开更多
关键词 腺相关病毒载体 立体定位注射 体重 中枢神经系统
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色钉菇乙酸乙酯提取物对脂多糖损伤的多巴胺能神经元的保护作用 被引量：2
2
作者 胡予 陈晓 +2 位作者 王立安 管振龙 王艳芹 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期621-625,共5页
目的探讨不同剂量的色钉菇乙酸乙酯提取物对帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法以昆明小鼠为实验材料,将脂多糖(LPS)定位注射至黑质内复制PD模型。30只小鼠随机分为假手术对照组、LPS实验对照组、低剂量实验组(LPS+100... 目的探讨不同剂量的色钉菇乙酸乙酯提取物对帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法以昆明小鼠为实验材料,将脂多糖(LPS)定位注射至黑质内复制PD模型。30只小鼠随机分为假手术对照组、LPS实验对照组、低剂量实验组(LPS+100mg/kg)、中剂量实验组(LPS+200mg/kg)和高剂量实验组(LPS+400mg/kg),每组6只。用免疫荧光方法显示多巴胺能神经元和星形胶质细胞,荧光显微镜下观察、计数黑质内的阳性细胞数。结果 LPS实验对照组小鼠的黑质内,多巴胺能神经元数量少于假手术组(P<0.05),且细胞胞体变圆,突起变短;星形胶质细胞胞体增大,多呈激活形态。低剂量实验组与中剂量实验组小鼠黑质内的多巴胺能神经元数量多于LPS实验对照组(P<0.05),星形胶质细胞密度降低;高剂量实验组小鼠黑质内的多巴胺能神经元数量与实验组差异无统计学意义(P>0.05)。结论低剂量与中剂量的色钉菇乙酸乙酯提取物能够抑制星形胶质细胞的激活,对LPS导致的多巴胺能神经元损伤有显著保护作用。 展开更多
关键词 帕金森病 脂多糖 多巴胺能神经元 色钉菇乙酸乙酯提取物 立体定位注射 小鼠
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滴度及注射方式对2型腺相关病毒载体表达效果的影响
3
作者 贾俊涛 王昆 +2 位作者 潘登 李强 杜晨光 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期236-239,314,共5页
由于腺相关病毒载体(adeno-associated viral vector,AAV)本身的侵染不具有神经元特异性,其在神经系统相关研究中会存在侵染范围不符合试验要求的情况,因此本试验拟研究不同滴度和注射方式对病毒侵染范围的影响。结果显示,在注射较高滴... 由于腺相关病毒载体(adeno-associated viral vector,AAV)本身的侵染不具有神经元特异性,其在神经系统相关研究中会存在侵染范围不符合试验要求的情况,因此本试验拟研究不同滴度和注射方式对病毒侵染范围的影响。结果显示,在注射较高滴度的AAV2-CMV-EGFP(1.3×10^(11)mg/L)3周后,其侵染范围可由延髓中缝苍白核(raphe pallidus nucleus,RPa)区域延伸至下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)区域;较低滴度(1.3×10^(8)mg/L)结合压力注射的方式可以在一定程度上限制AAV的侵染范围,并且载体携带的EGFP荧光基团在637 nm波段不具有明显的假阳性信号。 展开更多
关键词 腺相关病毒载体 立体定位注射 滴度
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室旁核VGlut2神经元投射通路
4
作者 王星 刘昊东 +7 位作者 李鹏辉 李嘉成 樊奇 闫睿 贺炀 张明 周鑫 杜晨光 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1514-1520,共7页
囊泡型谷氨酸转运蛋白2(VGlut2)作为兴奋性神经递质表达于下丘脑室旁核(PVNVGlut2),调节摄食和能量代谢,对维持机体稳态具有重要作用。但尚不清楚PVNVGlut2神经元上、下游投射网络,阻碍了解析谷氨酸能神经元环路功能。因此,本研究采用... 囊泡型谷氨酸转运蛋白2(VGlut2)作为兴奋性神经递质表达于下丘脑室旁核(PVNVGlut2),调节摄食和能量代谢,对维持机体稳态具有重要作用。但尚不清楚PVNVGlut2神经元上、下游投射网络,阻碍了解析谷氨酸能神经元环路功能。因此,本研究采用脑立体定位注射技术,将顺行和逆行示踪病毒注射到VGlut2小鼠的PVN,寻找PVNVGlut2神经元的输入和输出核团。顺行示踪结果表明,PVNVGlut2神经元投射到下游内侧杏仁核(MeAD)和弓状核(ARC)。逆行示踪结果表明,PVNVGlut2接受前置核(Pr)、桥脑网状被盖核(RtTg)、舌下神经核(12N)输入。此外,在PVN发现VGlut2与神经元型一氧化氮合酶(nNOS)神经元共表达。通过病毒追踪工具解析PVNVGlut2神经元的解剖学网络,为后续研究剖析PVNVGlut2功能调控奠定基础。 展开更多
关键词 下丘脑室旁核 谷氨酸能神经元 神经投射 能量代谢 脑立体定位注射 小鼠
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大脑前额皮层Nrg1基因敲低对小鼠精神分裂症样行为形成的影响 被引量：1
5
作者 丛启杰 曾荣森 +1 位作者 刘耘溪 孙竞 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2022年第3期213-218,共6页
目的:研究成年小鼠大脑前额皮层神经调节素1(neuregulin 1,Nrg1)基因敲低对精神分裂症样行为的影响及其潜在机制。方法:取成年雄性C57BL/6小鼠45只,基于旷场实验将小鼠分为3组:正常对照组,阴性对照组和Nrg1-siRNA组,每组15只。采用脑立... 目的:研究成年小鼠大脑前额皮层神经调节素1(neuregulin 1,Nrg1)基因敲低对精神分裂症样行为的影响及其潜在机制。方法:取成年雄性C57BL/6小鼠45只,基于旷场实验将小鼠分为3组:正常对照组,阴性对照组和Nrg1-siRNA组,每组15只。采用脑立体定位对阴性对照组和Nrg1-siRNA组小鼠前额皮层两侧部位分别注射2μL阴性对照siRNA和Nrg1-siRNA,正常对照组注射2μL PBS。采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测小鼠前额皮层Nrg1 mRNA和NRG1蛋白表达,通过前脉冲抑制实验、旷场实验和高架十字迷宫实验评价前额皮层Nrg1基因敲低对小鼠行为的影响,采用蛋白免疫印迹法检测小鼠前额皮层囊泡γ-氨基丁酸转运体(vesicular GABA transporter,VGAT)和囊泡谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,VGLUT1)蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,Nrg1-siRNA组小鼠前额皮层Nrg1 mRNA和NRGI蛋白表达水平显著降低(P均<0.01)。行为学结果显示,与正常对照组相比,Nrg1-siRNA组小鼠前脉冲抑制率显著降低(P<0.05),自发性运动的总距离和平均速度显著增加(P均<0.01),进入开放臂的次数百分比和时间百分比显著减少(P均<0.01);蛋白免疫印迹结果显示,与正常对照组相比,Nrg1-siRNA组小鼠前额皮层VGLUT1/VGAT蛋白表达比值显著增加(P<0.01)。结论:大脑前额皮层Nrg1基因敲低可导致小鼠出现以前脉冲抑制损伤、自发活动量增加以及焦虑为特征的精神分裂症样行为,其机制可能与抑制性和兴奋性神经递质转运蛋白平衡失调有关。 展开更多
关键词 神经调节素1 精神分裂症 小鼠 前额皮层 脑立体定位注射
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Bafilomycin A1对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用及其机制
6
作者 殷乐依 王志坚 《生物医学》 CAS 2022年第2期97-102,共6页
目的:探讨洛霉素A(Bafilomycin A1, Baf A1)对脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion-reperfusion, MCAO/R)小鼠的保护作用及机制。方法:Atg7f/f-Mx1-Cre小鼠15只,随机分为:假手术组(C)、模型组(M)、氟西汀组(M + F)、Baf... 目的:探讨洛霉素A(Bafilomycin A1, Baf A1)对脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion-reperfusion, MCAO/R)小鼠的保护作用及机制。方法:Atg7f/f-Mx1-Cre小鼠15只,随机分为:假手术组(C)、模型组(M)、氟西汀组(M + F)、Baf A1组(M + B)和ATG7敲除组(M + ATG7 KO)。M + B组术前24小时给与脑立体定位注射,M + F组给与氟西汀灌胃连续14 d;其他组均于术前14天开始给予等体积生理盐水。缺血2小时再灌注24 h后,对各组小鼠进行神经行为学评分、脑含水量测定和脑梗死面积检测,Western blotting检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达。结果:与C组相比,M组神经行为评分、脑含水量、脑梗死面积、自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达显著增加,M + F组、M + B组和M + ATG7 KO组逆转以上结果,差异具有统计学意义。结论:Baf A1通过降低前期和后期细胞自噬水平实现对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用。 展开更多
关键词 洛霉素A1 脑立体定位注射 脑缺血再灌注损伤(MCAO/R) ATG7 细胞自噬
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慢病毒介导的shRNA对大鼠脑纹状体GCDH蛋白的沉默效应研究
7
作者 付溪 高洪杰 +3 位作者 娄丽萍 高金枝 张文迪 罗小平 《神经损伤与功能重建》 2014年第1期6-10,共5页
目的：利用已成功构建的慢病毒载体，检测慢病毒介导的GCDH基因沉默对大鼠脑纹状体GCDH蛋白表达下调的能力。方法：30只健康雄性刚断乳34周SD大鼠随机分为绿色荧光蛋白（GFP）对照病毒注射组（对照组）和GCDH慢病毒注射组（GCDH组）各1... 目的：利用已成功构建的慢病毒载体，检测慢病毒介导的GCDH基因沉默对大鼠脑纹状体GCDH蛋白表达下调的能力。方法：30只健康雄性刚断乳34周SD大鼠随机分为绿色荧光蛋白（GFP）对照病毒注射组（对照组）和GCDH慢病毒注射组（GCDH组）各15只。各组分别在脑立体定位仪下定位纹状体组织后单侧给予GFP对照病毒2耻L和GCDH慢病毒原液2灿。注射后14d及1、3月，分别处死大鼠，并取注射区域的脑纹状体组织蛋白质通过Westemblot及石蜡切片免疫组化法检测大鼠纹状体GCDH蛋白表达水平，同时测定肝。肾功能、血清有机酸及Rotarod行为学。结果：GCDH慢病毒注射14d及l、3月后，GCDH组可检测到注射区域GCDH蛋白在脑纹状体区域表达有明显降低，同对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），2组肝肾功能、血清有机酸及行为学未发现明显差异。结论：成功注射GCDH慢病毒到刚断乳34周SD大鼠脑纹状体，并在注射后不同时间均检测到GCDH蛋白的表达稳定下调。 展开更多
关键词 GCDH 慢病毒载体 脑立体定位注射 纹状体
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脑肽精对阿尔茨海默病模型大鼠脑中能量代谢的影响 被引量：1
8
作者 安玉会 孟庆瑞 +2 位作者 张维娟 李怀洲 章萍 《河南医学研究》 CAS 2003年第3期205-208,共4页
目的 :观察脑肽精 (brainpeptidecrystal,BPC)对阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdiseaseAD)大鼠脑中能量代谢的影响。方法 :雄性SD大鼠 84只 ,随机分成 7组 ,每组 12只。Ⅰ组为正常对照组 ,Ⅱ组为AD模型组 ,Ⅲ组为AD模型 +生理盐水组 ,Ⅳ组... 目的 :观察脑肽精 (brainpeptidecrystal,BPC)对阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdiseaseAD)大鼠脑中能量代谢的影响。方法 :雄性SD大鼠 84只 ,随机分成 7组 ,每组 12只。Ⅰ组为正常对照组 ,Ⅱ组为AD模型组 ,Ⅲ组为AD模型 +生理盐水组 ,Ⅳ组为AD模型 +脑复康 0 3g/kg治疗组 ,Ⅴ组为AD模型 +BPC15mg/kg治疗组 ,Ⅵ组为AD模型 +BPC 3 0mg/kg治疗组 ,Ⅶ组为AD模型 +BPC 60mg/kg治疗组。采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术 ,用IBO损毁大鼠双侧nbM。手术后BPC连续灌胃共 2 0天 ,每天 1次 ,每次 2ml。灌胃期满后即将大鼠断头处死 ,并立即在冰盘中开颅取脑做组织匀浆 ,取其上清液各项生化指标。结果 :①与正常组比较 ,模型组脑中的Na+ K+ ATP酶显著下降 (P <0 0 5 ) ,乳酸 (LD )显著升高 (P <0 0 5 ) ,乳酸脱氢酶(LDH)显著降低 (P <0 0 5 )。②与模型组比较 ,生理盐水组脑中的Na+ K+ ATP酶、LD、LDH均无明显改变(P >0 0 5 )。③与模型组比较 ,除BPC低浓度组脑中LDH无明显改变外 (P >0 0 5 ) ,脑复康组及BPC各浓度组的脑中Na+ K+ ATP酶、LDH均显著升高 (P <0 0 5 ) ,LD显著降低 (P <0 0 1)。结论 :BPC能够增加脑中Na+ K+ ATP酶和LDH含量 。 展开更多
关键词 脑肽精 阿尔茨海默病 大鼠 能量代谢 立体定位微量注射技术 乳酸 乳酸脱氢酶
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