新生家兔空肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定 被引量：7

1

作者 范斌 余冰 +2 位作者 田刚 张凯 刘汉中 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1570-1578,共9页

本试验旨在建立家兔空肠上皮细胞的体外分离培养方法，为进一步研究外源物质对家兔小肠上皮结构功能的影响及其作用机制提供体外模型。试验以新生新西兰白兔（1~3日龄）空肠为研究对象，利用由链霉蛋白酶E、胶原酶Ⅳ和二硫苏糖醇组成的... 本试验旨在建立家兔空肠上皮细胞的体外分离培养方法，为进一步研究外源物质对家兔小肠上皮结构功能的影响及其作用机制提供体外模型。试验以新生新西兰白兔（1~3日龄）空肠为研究对象，利用由链霉蛋白酶E、胶原酶Ⅳ和二硫苏糖醇组成的混合消化液消化空肠组织，通过2%山梨醇密度梯度离心来富集隐窝细胞团。运用相差消化法和差速贴壁法纯化家兔空肠上皮细胞，并从形态学观察、碱性磷酸酶染色、细胞角蛋白8免疫荧光染色和肠上皮细胞标志物基因表达分析4个方面鉴定家兔空肠上皮细胞。结果表明：应用链霉蛋白酶E、胶原酶Ⅳ和二硫苏糖醇混合消化液可获得大量的细胞团，细胞团12 h贴壁并向周围辐射生长，生长的细胞呈典型的三角形或多角形，5~7 d融合成片，呈单层生长、互不重叠；原代细胞能够进行传代、纯化；经碱性磷酸酶染色和细胞角蛋白8免疫荧光染色均呈阳性；可表达肠上皮细胞标志蛋白（脂肪酸结合蛋白2、肠肽酶、E-钙黏蛋白、紧密连接蛋白-4）的基因。以上结果表明，本试验成功建立了家兔空肠上皮细胞的体外分离培养方法。 展开更多

关键词 新西兰白兔 空肠上皮细胞 原代培养 鉴定

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牛乳铁蛋白对脂多糖体外诱导大鼠空肠上皮细胞炎症的抑制作用及机制 被引量：2

2

作者 孔祥永 郭婧 +2 位作者 杨梅 王瑞娟 封志纯 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期539-542,共4页

目的探讨牛乳铁蛋白（bLF）在体外对大鼠空肠上皮细胞株（IEC-6）细胞增殖和对脂多糖（LPS）诱导的细胞炎性反应的影响及机制。方法体外培养IEC-6细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度bLF时IEC-6细胞的活性，5-溴脱氧尿苷（Brdu... 目的探讨牛乳铁蛋白（bLF）在体外对大鼠空肠上皮细胞株（IEC-6）细胞增殖和对脂多糖（LPS）诱导的细胞炎性反应的影响及机制。方法体外培养IEC-6细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度bLF时IEC-6细胞的活性，5-溴脱氧尿苷（Brdu）标记检测bLF对细胞增殖能力的影响，荧光定量PCR及酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA水平，Western blot检测bLF对LPS诱导的炎症信号通路中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及核因子-κB（NF-κB）水平。结果bLF在体外可促进IEC-6细胞活性和增生能力，并呈浓度依赖效应（F＝3.825、5.861，均P〈0.05），当处理质量浓度为100 mg/L时，IEC-6细胞活性和增殖能力逐渐增强（q＝5.240、3.765，均P〈0.05）。应用100 mg/L质量浓度的bLF预处理IEC-6细胞可明显降低IL-1β、IL-6及TNF-α 的mRNA表达水平（q＝14.28、10.12、16.45，均P〈0.001），并降低IL-6和TNF-α蛋白的表达（q＝15.06、6.74，均P〈0.001）。与单独LPS组相比，应用100 mg/L质量浓度的bLF预处理IEC-6细胞可使MAPK/NF-κB通路的激活水平下降（q＝12.96、18.54，均P〈0.001）。结论bLF在体外可促进大鼠IEC-6细胞活性及增殖能力，并通过抑制MAPK/NF-κB信号通路起到抑制LPS诱导的炎性反应的作用。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白 空肠上皮细胞 增殖 炎症

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牛乳铁蛋白促进空肠上皮细胞株IEC-6细胞活性的研究 被引量：1

3

作者 郭婧 孔祥永 《中国医刊》 CAS 2016年第6期85-89,共5页

目的探讨牛乳铁蛋白对大鼠空肠上皮细胞株IEC-6的细胞活性、增殖能力的影响。方法体外培养IEC-6细胞,MTT法检测不同浓度牛乳铁蛋白对IEC-6细胞的活性,Brdu标记检测牛乳铁蛋白对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期。结果牛乳铁... 目的探讨牛乳铁蛋白对大鼠空肠上皮细胞株IEC-6的细胞活性、增殖能力的影响。方法体外培养IEC-6细胞,MTT法检测不同浓度牛乳铁蛋白对IEC-6细胞的活性,Brdu标记检测牛乳铁蛋白对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期。结果牛乳铁蛋白促进IEC-6细胞活性,且呈浓度依赖效应,牛乳铁蛋白处理浓度为100μg/ml时,IEC-6细胞活性显著上调(P<0.05)。牛乳铁蛋白可通过调节细胞周期促进IEC-6细胞增殖,牛乳铁蛋白在100μg/ml时细胞Brdu增殖活性发生显著性上调(P<0.05),在200μg/ml牛乳铁蛋白处理浓度时增殖能力达到顶峰。牛乳铁蛋白可通过调控IEC-6的细胞周期,从G1期向S期转化。结论牛乳铁蛋白可能通过调控细胞周期从G1期向S期转化,从而促进大鼠空肠上皮细胞株IEC-6细胞活性及增殖能力。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白 空肠上皮细胞 增殖

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乳酸锌对猪空肠上皮细胞IPEC-J2增殖及相关调控基因mRNA表达的影响 被引量：10

4

作者 韩国全 余冰 +6 位作者 陈代文 相振田 亓宏伟 陈洪 毛倩 毛湘冰 黄志清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期740-747,共8页

旨在探讨乳酸锌对猪空肠上皮细胞增殖及相关调控基因ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1和ZIP4mRNA表达的影响。用乳酸锌的锌浓度分别为50、100、150、200mg.L-1的培养基培养IPEC-J2细胞,采用比色法测定分析细胞增殖变化;用实时荧光定量RT-PCR方... 旨在探讨乳酸锌对猪空肠上皮细胞增殖及相关调控基因ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1和ZIP4mRNA表达的影响。用乳酸锌的锌浓度分别为50、100、150、200mg.L-1的培养基培养IPEC-J2细胞,采用比色法测定分析细胞增殖变化;用实时荧光定量RT-PCR方法检测ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1及ZIP4mRNA表达,以TBPmRNA的表达水平作为内参对照。在细胞培养前36h,乳酸锌对IPEC-J2细胞基本没有影响,随锌浓度递增细胞增殖幅度升高;乳酸锌处理IPEC-J2细胞后,ZnT2、DMT1、IREG-1及MT1mRNA表达随锌浓度增高而升高,ZIP4mRNA表达则随锌浓度增高而降低。添加乳酸锌可以促进IPEC-J2细胞增殖,上调ZnT2、DMT1、IREG-1、MT1mRNA表达,下调ZIP4mRNA表达。 展开更多

关键词 乳酸锌 猪空肠上皮细胞IPEC-J2 MRNA表达 相关调控基因

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壳寡糖对脂多糖诱导猪空肠上皮细胞氧化损伤的作用 被引量：9

5

作者 肖定福 钟佳 +1 位作者 刘进辉 李文平 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期2090-2095,共6页

本试验旨在通过脂多糖(LPS)诱导猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)来建立氧化应激模型,探讨壳寡糖(COS)的抗氧化作用效果。采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS和COS对IPEC-J2作用12、24、48 h后细胞增殖活性的变化;选择适宜浓度LPS(1.0μg/m L)和COS(200μ... 本试验旨在通过脂多糖(LPS)诱导猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)来建立氧化应激模型,探讨壳寡糖(COS)的抗氧化作用效果。采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS和COS对IPEC-J2作用12、24、48 h后细胞增殖活性的变化;选择适宜浓度LPS(1.0μg/m L)和COS(200μg/m L)作用于IPEC-J2,分为对照组、LPS组、COS组、LPS+COS组。采用Western Blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)的含量。结果表明:1.0μg/m L的LPS对IPEC-J2作用24 h,细胞增殖的抑制率为41.6%,为造模的最适浓度和作用时间;COS在一定浓度范围内对IPEC-J2有增殖作用,其浓度为200μg/m L时效果最佳,作用时间为24 h时,细胞增殖率达到126.3%。LPS+COS组较对照组的SOD、CAT活性和M DA含量差异不显著(P>0.05),Nrf2和HO-1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);LPS+COS组较LPS组的Nrf2蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),HO-1有升高趋势,但差异不显著(P>0.05),SOD、CAT活性显著升高(P<0.05),M DA含量显著降低(P<0.05)。由此可见,LPS诱导IPEC-J2氧化应激,而COS可进一步促进Nrf2和HO-1蛋白的高表达,并提高抗氧化酶的活性,降低氧化产物含量,从而增强细胞对氧化应激的抵抗力,起到保护作用。 展开更多

关键词 壳寡糖 脂多糖 猪空肠上皮细胞 氧化应激 抗氧化作用

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谷氨酰胺对呕吐毒素诱导IPEC-J2细胞凋亡和炎症的影响 被引量：5

6

作者 李若楠 康瑞芬 +3 位作者 沈丹 戴鹏远 唐倩 李春梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期740-747,共8页

[目的]本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型,探讨谷氨酰胺(Gln)对呕吐毒素(DON)诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症的影响。[方法]通过MTT方法测定细胞活力来选择适宜的Gln浓度,以不添加Gln和DON的细胞为空白对照组,试验组分别为0.75 mmol&... [目的]本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型,探讨谷氨酰胺(Gln)对呕吐毒素(DON)诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症的影响。[方法]通过MTT方法测定细胞活力来选择适宜的Gln浓度,以不添加Gln和DON的细胞为空白对照组,试验组分别为0.75 mmol·L^-1 Gln组,2.0μg·mL^-1 DON组和2.0μg·mL^-1 DON+0.75 mmol·L^-1 Gln组,处理24 h后测定各组细胞凋亡率、活性氧自由基(ROS)及细胞凋亡和炎症相关基因和蛋白的表达水平。[结果]与对照组相比,DON处理24 h细胞凋亡比例和ROS含量(ROS荧光密度/细胞总数)显著升高(P<0.01);与DON组相比,DON+Gln组显著降低细胞的凋亡比例和ROS含量(P<0.01)。与对照组相比,DON组上调IPEC-J2细胞白细胞介素1β(IL^-1β)、白细胞介素6(IL-6)、环氧合酶2(COX-2)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)炎症相关基因和Caspase-3及Caspase-8凋亡相关基因的表达水平;与DON组相比,DON+Gln组下调IPEC-J2细胞IL^-1β、COX-2、Caspase-3、Caspase-8、BAK和Bcl-2基因的表达水平。蛋白免疫荧光结果显示,与对照组相比,DON组上调IPEC-J2细胞Caspase-3,核转录因子κB(NF-κB)和磷酸化核转录因子κB(phospho-NF-κB)蛋白的表达,而添加Gln后(DON+Gln组)下调了相关蛋白的表达。[结论]Gln通过清除DON诱导的IPEC-J2细胞中过量的ROS及调节炎症和凋亡相关基因及蛋白的表达量来缓解由DON引起的肠道上皮细胞损伤。 展开更多

关键词 谷氨酰胺 呕吐毒素 猪空肠上皮细胞 炎症 凋亡

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维生素A对大豆7S球蛋白致仔猪肠上皮细胞屏障功能损伤的影响 被引量：4

7

作者 杨菊 邓俊良 +3 位作者 夏江英 宋天浩 庞莲凤 任志华 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第11期2026-2033,共8页

以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_(A))对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障... 以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_(A))对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障功能损伤的影响。结果显示:5.0 mg·mL^(-1)大豆7S球蛋白导致IPEC-J2活力、TEER与ZO-1、Claudin-1、Occludin的mRNA表达量极显著(P<0.01)降低,而荧光素钠渗透率和细胞培养液中碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、二胺氧化酶(DAO)、肠型脂肪酸结合蛋白1(IFABP1)的含量极显著(P<0.01)升高;添加0.1和1μmol·L^(-1)V_(A)极显著提高了细胞活力(P<0.01),0.1~10μmol·L^(-1)V_(A)显著(P<0.05)缓解了大豆7S球蛋白导致的TEER、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白mRNA表达的变化;10000μmol·L^(-1)V_(A)反而加剧了这些影响。总体上,0.1~10μmol·L^(-1)V_(A)能通过保护细胞活力和细胞完整性、影响紧密连接蛋白的mRNA表达对大豆7S球蛋白导致的IPEC-J2细胞屏障功能损伤发挥保护作用,而10000μmol·L^(-1)V_(A)反而加重了这种损伤。 展开更多

关键词 大豆7S球蛋白 维生素A 仔猪空肠上皮细胞 通透性 紧密连接蛋白

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人参皂苷Rg1、Re对感染LPS猪空肠上皮细胞IPEC-J2的保护作用

8

作者 杜林 张莉 +5 位作者 胡卫东 马琪 杜红旭 李俊 甘玲 毕师诚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1256-1267,共12页

基于网络药理学和体外试验,共同探讨人参皂苷Rg1和Re对感染LPS猪空肠上皮细胞IPEC-J2的保护作用。采用网络药理学获取并筛选Rg1、Re缓解肠道屏障损伤的交集靶点,并采用分子对接技术验证网络药理学的预测结果。本试验分组为Control、LPS... 基于网络药理学和体外试验,共同探讨人参皂苷Rg1和Re对感染LPS猪空肠上皮细胞IPEC-J2的保护作用。采用网络药理学获取并筛选Rg1、Re缓解肠道屏障损伤的交集靶点,并采用分子对接技术验证网络药理学的预测结果。本试验分组为Control、LPS、Rg1和Re组。观察不同浓度Rg1、Re对IPEC-J2细胞存活率、凋亡率、TEER值、FD4通透性和炎性因子的影响,同时采用荧光定量PCR检测不同浓度Rg1、Re对凋亡相关基因mRNA表达水平的影响。网络药理学结果显示,Rg1、Re预防肠道屏障损伤主要涉及PI3K-Akt、MAPK信号通路等过程。分子对接结果显示,Rg1与所有交集靶点结合能均小于0,而人参皂苷Re仅与SRC靶点的结合能小于0。体外试验显示不同浓度的Rg1、Re预处理均会不同程度地提高LPS处理的IPEC-J2的存活率、TEER值,减少细胞凋亡、FD4通透性降低、炎性因子TNF-α的分泌,表明Re、Rg1可有效降低LPS处理对IPEC-J2细胞的影响。Rg1显著上调MAPK8、MAPK10、HRAS,显著下调MAP2K1、PIK3CG、IL-2、SRC的mRNA表达水平;Re显著上调MAPK8、MAPK10、HRAS、PIK3R1、BCL2基因的mRNA表达水平。这些结果提示,人参皂苷Rg1、Re和含有Rg1、Re的人参皂苷产品在预防仔猪肠道屏障损伤方面值得进一步研究。 展开更多

关键词 人参皂苷 猪空肠上皮细胞 网络药理学

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ROS积聚在黄曲霉毒素B_(1)诱导仔猪空肠上皮细胞凋亡中的作用

9

作者 张曼 王艳慧 +5 位作者 李寒笑 刘恩赐 李庆豪 于瑞 罗琴 金鑫 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3857-3866,共10页

【目的】探究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))诱导细胞内活性氧(ROS)的产生对猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡的影响,为AFB_(1)致病机制提供理论依据。【方法】用0、20、40、60、80和100μg/mL AFB_(1)刺激细胞12 h,使用CCK-8试... 【目的】探究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))诱导细胞内活性氧(ROS)的产生对猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡的影响,为AFB_(1)致病机制提供理论依据。【方法】用0、20、40、60、80和100μg/mL AFB_(1)刺激细胞12 h,使用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,以确定AFB_(1)对IPEC-J2细胞的毒性作用;使用0、10、20、30μg/mL AFB_(1)刺激细胞后采用ROS免疫荧光分析法检测细胞内ROS产生情况;使用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测细胞内凋亡通路相关的关键因子mRNA和蛋白表达情况,并采用ROS抑制剂N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)处理细胞后检测AFB_(1)对细胞内凋亡因子表达的影响情况。【结果】0~20μg/mL AFB_(1)对细胞活性无显著影响(P>0.05),但随着AFB_(1)浓度升高,与空白对照组相比,IPEC-J2细胞活性显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01)。ROS免疫荧光分析结果显示,ROS含量与AFB_(1)浓度呈高度依赖性,且随着AFB_(1)浓度的升高,与空白对照组相比,细胞内ROS含量显著或极显著增加(P<0.05;P<0.01)。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,当AFB_(1)浓度为20μg/mL时Caspase-3 mRNA和蛋白表达量均显著高于空白对照组(P<0.05);当AFB_(1)浓度为30μg/mL时Caspase-3和Bax/Bcl-2 mRNA和蛋白表达量显著高于空白对照组(P<0.05),而Bax和Bcl-2蛋白表达量显著低于空白对照组(P<0.05);与AFB_(1)单独处理组相比,使用ROS抑制剂NAC预处理细胞后加入AFB_(1),凋亡因子呈现出不同程度的显著下降趋势(P<0.05)。【结论】AFB_(1)可促进IPEC-J2细胞凋亡因子Bax、Bcl-2和Caspase-3的上调,并且这一过程与细胞内ROS的积累有关。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B_(1) 活性氧 细胞凋亡 猪空肠上皮细胞

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苏氨酸对体外培养感染伪狂犬病毒猪空肠上皮细胞免疫相关基因表达的影响 被引量：4

10

作者 韩国全 余冰 +4 位作者 陈代文 相振田 陈渝 陈洪 毛倩 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期487-496,共10页

本研究旨在探讨苏氨酸对体外培养感染伪狂犬病毒(PRV)猪空肠上皮细胞免疫相关基因表达的影响。试验选用IPEC-J2细胞为细胞模型,分为4个处理,对照组为未经PRV感染、苏氨酸浓度53.45 mg/L,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为试验组,均经PRV感染,苏氨酸浓度分... 本研究旨在探讨苏氨酸对体外培养感染伪狂犬病毒(PRV)猪空肠上皮细胞免疫相关基因表达的影响。试验选用IPEC-J2细胞为细胞模型,分为4个处理,对照组为未经PRV感染、苏氨酸浓度53.45 mg/L,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为试验组,均经PRV感染,苏氨酸浓度分别为53.45、106.90、160.35 mg/L,每组3个重复,每个重复4孔。37℃、5%CO2培养后1、6、12、24 h每组取1个重复采集细胞,用实时荧光定量PCR方法检测白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达量。结果表明:1)PRV感染极显著降低了IL-1βmRNA表达量(P=0.001),苏氨酸水平(P=0.830)、时间与苏氨酸水平交互作用(P=0.249)的影响均不显著;2)PRV感染对IL-6 mRNA表达量影响不显著(P=0.162),随苏氨酸水平升高,IL-6 mRNA表达量极显著地先升高后降低(P=0.002),时间与苏氨酸水平交互作用的影响显著(P=0.012);3)PRV感染极显著提高了IL-15 mRNA表达量(P=0.000),提高苏氨酸水平极显著提高了IL-15 mRNA表达量(P=0.000),时间与苏氨酸水平交互作用的影响亦极显著(P=0.000);4)PRV感染极显著提高了TNF-αmRNA表达量(P=0.000),苏氨酸水平(P=0.113)、时间与苏氨酸水平交互作用(P=0.195)的影响均不显著;5)PRV感染极显著提高了TGF-β1 mRNA表达量(P=0.000),时间与苏氨酸水平交互作用的影响显著(P=0.015),苏氨酸水平的影响不显著(P=0.055)。结果提示,补充苏氨酸对感染PRV的IPEC-J2细胞先天性免疫功能具有分子表达水平的调控作用,总体上能够抑制IL-1β、TNF-α、TGF-β1基因表达,加强IL-6、IL-15基因表达,但影响具有时间效应。 展开更多

关键词 苏氨酸 猪空肠上皮细胞 伪狂犬病毒 免疫相关基因

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T-2毒素激活活性氧/核转录因子-κB信号通路诱导猪空肠上皮细胞发生炎性反应 被引量：4

11

作者 康瑞芬 王猛 +2 位作者 沈家鲲 金晓明 李春梅 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期474-483,共10页

本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型细胞,探讨T-2毒素诱导IPEC-J2炎性反应的影响及相关作用机制。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定细胞活力,选择适宜的T-2毒素和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)浓度。试验分为4个组,分别为对照组、NAC组(4.... 本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型细胞,探讨T-2毒素诱导IPEC-J2炎性反应的影响及相关作用机制。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定细胞活力,选择适宜的T-2毒素和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)浓度。试验分为4个组,分别为对照组、NAC组(4.0 mmol/L NAC)、T-2组(4.0 ng/mL T-2毒素)和T-2+NAC组(4.0 ng/mL T-2毒素+4.0 mmol/L NAC),处理12 h后测定各组IPEC-J2中丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、活性氧(ROS)水平、细胞炎症相关基因和核转录因子-κB(NF-κB)的相对表达量。结果表明:1)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中CAT、T-SOD活性极显著降低(P<0.01),IPEC-J2中MDA含量和ROS水平极显著升高(P<0.01)。与T-2组相比,T-2+NAC组IPEC-J2中CAT和T-SOD活性极显著升高(P<0.01),IPEC-J2中MDA含量和ROS水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。2)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(P<0.05)、白细胞介素-6(IL-6)(P<0.01)、白细胞介素-10(IL-10)(P>0.05)的mRNA相对表达量升高。3)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中NF-κB蛋白相对表达量极显著升高(P<0.01)。与T-2组相比,T-2+NAC组IPEC-J2中NF-κB蛋白相对表达量极显著降低(P<0.01)。由此可见,T-2毒素通过诱导IPEC-J2产生过量的ROS,促进炎症相关基因及NF-κB蛋白的表达,导致IPEC-J2发生炎性反应。 展开更多

关键词 T-2毒素 猪空肠上皮细胞 活性氧 炎性反应

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对IPEC-J2细胞增殖、凋亡和屏障功能的影响及其自噬机制 被引量：3

12

作者 萧晟 刘丹丹 +1 位作者 甘芳 黄克和 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期746-751,共6页

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L-1)DON处... [目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L-1)DON处理IPEC-J2细胞24h后,采用MTT、Hoechst33258、Westernblot、Millipore-ERS和IFA法检测DON对IPEC-J2细胞增殖、凋亡、屏障功能和自噬水平的影响;在4μmol·L^-1DON处理组添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)来提高细胞的自噬水平,用上述方法检测Rapa对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度为4、8和16μmol·L^-1时,细胞活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)下降。4和8μmol·L^-1DON处理凋亡细胞数量和凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3表达显著增加(P<0.01),细胞跨膜电阻(TEER)值和紧密连接蛋白Occludin表达显著下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Atg5表达显著下降(P<0.05)。添加Rapa可以显著缓解DON引起的细胞毒性、凋亡和屏障功能障碍。[结论]DON通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。 展开更多

关键词 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 仔猪空肠上皮细胞 细胞凋亡 紧密连接 细胞自噬

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重组人白介素-11对脂多糖致新生大鼠空肠上皮细胞系-6损伤的影响 被引量：3

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作者 蔡娜 封志纯 王瑞娟 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期529-533,共5页

目的 探讨重组人白介素-11（rhIL-11）对新生大鼠空肠上皮细胞系-6（IEC-6）增殖和凋亡的影响。方法 通过脂多糖（LPS）作用于正常IEC-6细胞，建立NEC体外模型，为LPS处理组；IL-11治疗组在LPS作用后给予100 ng/mL rhIL-11处理；空白对... 目的 探讨重组人白介素-11（rhIL-11）对新生大鼠空肠上皮细胞系-6（IEC-6）增殖和凋亡的影响。方法 通过脂多糖（LPS）作用于正常IEC-6细胞，建立NEC体外模型，为LPS处理组；IL-11治疗组在LPS作用后给予100 ng/mL rhIL-11处理；空白对照组在实验过程中加入等剂量的生理盐水替代。采用MTT比色法选择LPS作用的最佳浓度（5~200 μg/mL）及最佳时间（1~24 h）；MTT 比色法检测rhIL-11 加入后3、6、9和12 h各组细胞的增殖活力；流式细胞术检测各组的细胞凋亡率和坏死率。结果 LPS可降低IEC-6细胞的增殖活力，且根据不同浓度LPS作用于IEC-6细胞不同时间结果，LPS的最佳作用浓度为100 μg/mL，最佳作用时间为3 h。100 ng/mL rhIL-11作用于LPS 处理过的细胞9 h后，IL-11治疗组细胞增殖活力较LPS组显著提高（P〈0．05），与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；且IL-11治疗组的总凋亡和坏死率较LPS处理组降低（P〈0．01），但仍高于空白对照组（P〈0．05）。结论rhlL-11可促进由LPS致IEC-6细胞损伤后的细胞增殖，有助于IEC-6细胞增殖活力的恢复，降低凋亡和坏死率，提示rhIL-11对LPS致IEC-6细胞损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 坏死性小肠结肠炎 重组人白介素-11 脂多糖 空肠上皮细胞系-6

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鼠李糖乳杆菌对感染人轮状病毒乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用 被引量：4

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作者 张振 王晓梅 +3 位作者 汤建桥 高源 王宝香 郑义 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期67-71,共5页

目的观察鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)对感染人轮状病毒(human rotavirus,HRV)乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用。方法将60只昆明种乳鼠均分为4组:灌服HRV作为感染组;灌服HRV前和后灌服LGG作为预处理组和治疗组;正常对... 目的观察鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)对感染人轮状病毒(human rotavirus,HRV)乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用。方法将60只昆明种乳鼠均分为4组:灌服HRV作为感染组;灌服HRV前和后灌服LGG作为预处理组和治疗组;正常对照组灌服细胞培养液。从第4天开始,连续5d观察各组乳鼠的临床症状,每天2次检测乳鼠大便HRV抗原。在实验的第9天随机处死每组中的8只乳鼠,取出空肠段苏木精-伊红染色,利用Image-Pro Plus 5.1图像软件分析各组乳鼠空肠黏膜厚度、绒毛高度和隐窝深度。利用光学显微镜和透射电子显微镜观察乳鼠空肠黏膜上皮细胞的病理变化。结果至第9天,对照组乳鼠无腹泻、无死亡。HRV感染组、预处理组、治疗组乳鼠腹泻率和死亡率分别为100.00%、46.67%,13.33%、0%,26.66%、6.67%。对照组、HRV感染组、预处理组、治疗组乳鼠空肠黏膜隐窝深度分别为(35.2±2.4)、(45.9±3.6)、(35.8±5.6)和(38.9±2.9)μm,HRV感染组明显高于其它3组(均P<0.01)。病理检测发现HRV感染组乳鼠空肠黏膜上皮细胞出现广泛的空泡样变性,而预处理组和治疗组乳鼠空肠黏膜上皮细胞空泡样变性的情况均有减少。预处理组与治疗组相比,前者对乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护效果更好。结论 LGG对感染HRV的乳鼠空肠黏膜上皮细胞有一定的保护作用,感染前灌服LGG的保护效果好于感染后灌服。 展开更多

关键词 人轮状病毒 鼠李糖乳杆菌 乳鼠 空肠黏膜上皮细胞

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