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小果甜柿遗传转化体系建立及其抗冻性遗传改良的初步研究
1
作者 邱梅逸 陈文兴 +3 位作者 徐莉清 郭大勇 张青林 罗正荣 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1678-1687,共10页
【目的】建立小果甜柿(Diospyros kaki Thunb.‘Xiaoguo Tianshi’)叶片再生和优化其遗传转化体系,以期通过分子育种技术获得抗冻性强的砧木新种质。【方法】以小果甜柿叶盘为外植体,首先通过不同生长素(IAA)质量浓度和细胞分裂素(ZT,T... 【目的】建立小果甜柿(Diospyros kaki Thunb.‘Xiaoguo Tianshi’)叶片再生和优化其遗传转化体系,以期通过分子育种技术获得抗冻性强的砧木新种质。【方法】以小果甜柿叶盘为外植体,首先通过不同生长素(IAA)质量浓度和细胞分裂素(ZT,TDZ)配比探讨对其愈伤诱导和不定芽再生的影响;进而探讨其叶片对不同抗生素质量浓度组合的敏感性;此外,利用根癌农杆菌介导的叶盘稳定遗传转化体系,进一步探讨超表达君迁子(D.lotus L.)抗寒基因DlCBF1对小果甜柿叶盘再生植株抗冻性的影响。【结果】叶圆片在MS(1/2N)+ZT 2.0 mg·L^(-1)+TDZ 2.0 mg·L^(-1)培养基中愈伤形成率最高(64.71%);将愈伤组织接种到MS(1/2N)+ZT 2.0 mg·L^(-1)+IAA 0.1mg·L^(-1)生芽培养基中,不定芽再生率和不定芽数分别为31.11%和2.37个。头孢霉素质量浓度为400 mg·L^(-1)时可抑制农杆菌生长,且叶片愈伤形成率低(9.84%);卡那霉素对叶片再生影响大,在质量浓度为20 mg·L^(-1)时其愈伤诱导率为11.57%。小果甜柿叶片稳定超表达君迁子DlCBF1基因,获得再生植株73株,其中阳性植株5株,荧光定量结果分析,阳性植株#1和#47中DlCBF1基因表达量分别为野生型的13倍和11倍。经过-4℃低温处理8 h后,超表达株系与野生型株系相比,叶片受伤害程度更小,光合作用效率变化不明显,电导率低,H_(2)O_(2)和O_(2)^(-)在组织中的积累少,阳性株系表现出比野生型株系更强的抗冻性。【结论】在优化小果甜柿叶片外植体再生和稳定遗传转化体系的基础上,通过在小果甜柿叶片中超表达君迁子DlCBF1基因,获得6.85%转基因阳性再生植株,稳定超表达DlCBF1基因可显著增强小果甜柿再生植株的抗冻性。研究结果为培育抗冻性强的柿砧木新种质提供了科学依据。 展开更多
关键词 小果甜柿 稳定遗传转化 CBF 抗冻性
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农杆菌介导大豆遗传转化新技术的建立及优化 被引量：1
2
作者 石淼 韩晗 +6 位作者 陈玥 刘涵玉 林姝含 丁晓月 闵菲 金太成 杨丽萍 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第16期5295-5300,共6页
农杆菌介导的植物稳定遗传转化在提高作物产量、质量及其抗逆性的分子育种中起到至关重要的作用。转基因大豆育种的遗传转化主要通过组织培养的方法获得。由于组织培养法具有实验周期长、容易污染和转化效率低的局限性,本研究在大豆(Gly... 农杆菌介导的植物稳定遗传转化在提高作物产量、质量及其抗逆性的分子育种中起到至关重要的作用。转基因大豆育种的遗传转化主要通过组织培养的方法获得。由于组织培养法具有实验周期长、容易污染和转化效率低的局限性,本研究在大豆(Glycine max(Linn.)Merr.)中建立并优化了一种新的快速、高效的稳定遗传转化体系,即农杆菌介导的发芽种子真空侵染法。本研究利用这种新体系完成了β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)在大豆(Glycine max(Linn.)Merr.)品种‘沈农9号’中的表达;同时,还完成了农杆菌菌液浓度和真空侵染条件的优化。当真空侵染压强为0.08 MPa,农杆菌重悬液浓度OD_(600)为2.0时,稳定遗传转化效率达到10%。GUS化学组织染色检测结果表明,转基因T_(1)代中获得16个GUS转基因大豆植株。半定量RT-PCR结果表明,在T_(2)代转基因植株中GUS基因获得了稳定表达。本研究建立的体系具有快速、操作简单和遗传转化效率较高的优势,为大豆稳定遗传转化研究提供了新的技术方法。 展开更多
关键词 大豆 稳定遗传转化 发芽种子真空侵染法 β-葡萄糖苷酸酶
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利用CRISPR/Cas9技术靶向编辑青花菜BoZDS
3
作者 黄文莉 李香香 +8 位作者 周炆婷 罗莎 姚维嘉 马杰 张芬 沈钰森 顾宏辉 王建升 孙勃 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期80-87,共8页
胡萝卜素脱氢酶(ζ-carotene desaturase,ZDS)是类胡萝卜素合成的限速酶。本试验以青花菜多代自交系‘ZN09’为试材,以BoZDS为目标基因,在其第1个外显子上选取2个靶位点,分别构建CRISPR/Cas9载体进行稳定遗传转化。1号靶位点转化效率为0... 胡萝卜素脱氢酶(ζ-carotene desaturase,ZDS)是类胡萝卜素合成的限速酶。本试验以青花菜多代自交系‘ZN09’为试材,以BoZDS为目标基因,在其第1个外显子上选取2个靶位点,分别构建CRISPR/Cas9载体进行稳定遗传转化。1号靶位点转化效率为0.80%,突变率为15.79%,共获得3株突变体,均为杂合突变;2号靶位点转化效率为0.84%,突变率为36.84%,共获得7株突变体,其中纯合突变2株,杂合突变2株,嵌合突变3株。突变体均出现白化或斑驳表型,突变体L*值和a*值均显著高于野生型植株,b*值均下降。本试验建立了青花菜CRISPR/Cas9基因编辑稳定遗传体系,并对BoZDS基因进行有效编辑,研究结果为利用基因编辑技术进行青花菜基因功能研究与优异性状材料创制提供了技术支撑。 展开更多
关键词 青花菜 CRISPR/Cas9 基因编辑 稳定遗传转化 ζ-胡萝卜素脱氢酶(ZDS)
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利用植物悬浮培养细胞进行蛋白质快速定位分析的方法 被引量：4
4
作者 赵蒙晴 高野哲夫 柳参奎 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期389-393,共5页
稳定遗传表达分析是一种植物中常用的整体解析基因的方式。有多种转化方式可供选择,也可根据所需要的获得的转基因植物材料选择受体材料。但是由于稳定遗传转化周期较长且大部分材料不适合于进行荧光观察,所以在一些基因的研究中逐渐被... 稳定遗传表达分析是一种植物中常用的整体解析基因的方式。有多种转化方式可供选择,也可根据所需要的获得的转基因植物材料选择受体材料。但是由于稳定遗传转化周期较长且大部分材料不适合于进行荧光观察,所以在一些基因的研究中逐渐被瞬时表达分析系统。虽然瞬时表达分析用时短,但是转化效率受到多方面的限制,转化材料无法保存。目前由于植物悬浮培养细胞材料均一,增殖迅速并且可以满足大批量研究需求逐渐成为植物研究中的热点材料。以此同时,在亚细胞定位方面,悬浮培养细胞还是良好的应用材料。采用农杆菌介导法进行植物悬浮培养细胞的转化中方法较为成熟,但是获得纯净的转基因细胞系的转化周期较长。在本研究中针对上述问题我们建立了一种转化时间短,转化效率高的植物悬浮培养细胞稳定遗传转化体系。同时将这个体系应用到基因的亚细胞定位当中进行蛋白质快速定位分析。 展开更多
关键词 悬浮培养细胞 稳定遗传转化 高效 快速 GFP 亚细胞定位
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