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鲈鱼胚胎程序化冷冻保存的研究 被引量：8
1
作者 于过才 陈松林 +2 位作者 孔晓瑜 田永胜 季相山 《海洋水产研究》 CSCD 2004年第1期1-8,共8页
对鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)胚胎的程序降温冷冻保存进行了研究。通过稀释液的筛选实验 ,选择了一种培养效果好的稀释液DS1液。研究了不同发育阶段胚胎对抗冻液的毒性耐受力 ,表明肌肉效应期胚胎的耐受力最强。测定了心跳期胚胎在抗冻... 对鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)胚胎的程序降温冷冻保存进行了研究。通过稀释液的筛选实验 ,选择了一种培养效果好的稀释液DS1液。研究了不同发育阶段胚胎对抗冻液的毒性耐受力 ,表明肌肉效应期胚胎的耐受力最强。测定了心跳期胚胎在抗冻液A1 、A2 、B1 、B2 中的平衡处理时间 ,为进行鲈鱼胚胎冻前平衡提供了参考时间。比较了植冰和不植冰对鲈鱼胚胎冷冻保存结果的影响及不同洗脱方法洗脱胚胎的效果。结果表明 ,在冷冻过程中诱导植冰的胚胎成活率高于未植冰组 ,两步法洗脱效果优于一步法和三步法。用不同降温速率进行了鲈鱼胚胎的超低温冷冻保存实验 ,结果表明 ,采用 1 .5℃ /min的降温速率降温 ,在液氮中冷冻保存 30min的 72粒心跳期胚胎中有 3粒成活 ,成活率为 4.2 %。 展开更多
关键词 鲈鱼 胚胎 程序冷冻
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利用不同冷冻方法建立大鼠胚胎保种库的研究 被引量：5
2
作者 梁成光 崔建英 +1 位作者 薛晓先 旭日干 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期653-656,共4页
采用程序冷冻、玻璃化冷冻和 OPS法对大鼠囊胚进行了冷冻保存 ,探讨了不同冷冻方法对胚胎存活率的影响 ,解冻后存活率分别为 82 .4 % ,76.9% ,85 .7% ;孵化率分别为 4 7.1 % ,4 6.1 % ,5 3 .6% .3种方法所得的囊胚存活率及孵化率均无显... 采用程序冷冻、玻璃化冷冻和 OPS法对大鼠囊胚进行了冷冻保存 ,探讨了不同冷冻方法对胚胎存活率的影响 ,解冻后存活率分别为 82 .4 % ,76.9% ,85 .7% ;孵化率分别为 4 7.1 % ,4 6.1 % ,5 3 .6% .3种方法所得的囊胚存活率及孵化率均无显著差异 ,均可作为对大鼠囊胚进行冷冻保存的有效方法 。 展开更多
关键词 大鼠胚胎 冷冻方法 保种库 胚胎存活率 孵化率 程序冷冻 玻璃化冷冻
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不同冷冻方法对犬精液冷冻效果的影响
3
作者 宫晓东 郜旭 +2 位作者 董岩 亓光斌 徐可 《中国工作犬业》 2024年第2期43-46,共4页
精液冷冻保存是种质资源保存利用的重要方法之一,寻找一种廉价、高效的冷冻方法自精液冷冻技术诞生以来便是人们努力的方向。目前精液冷冻主要有三种方法,即程序冷冻、液氮熏蒸和颗粒冷冻。这三种方法各有利弊,本实验将对三种方法冷冻... 精液冷冻保存是种质资源保存利用的重要方法之一,寻找一种廉价、高效的冷冻方法自精液冷冻技术诞生以来便是人们努力的方向。目前精液冷冻主要有三种方法,即程序冷冻、液氮熏蒸和颗粒冷冻。这三种方法各有利弊,本实验将对三种方法冷冻效果做一个对比,以供选择冷冻方法时作为参考。 展开更多
关键词 冷冻方法 精液冷冻 冷冻效果 种质资源保存 程序冷冻 熏蒸 三种方法 犬
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2种冷冻方法对人早期胚胎冷冻复苏效果比较 被引量：6
4
作者 胡玥玥 王华 +3 位作者 黄晓卉 江成龙 罗清炳 张昌军 《中华实用诊断与治疗杂志》 2009年第11期1073-1075,共3页
目的:比较载杆玻璃化冷冻法与程序冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果。方法:将接受体外受精-胚胎移植患者剩余的Ⅰ～Ⅲ级胚胎进行程序冷冻或载杆玻璃化冷冻,比较胚胎复苏后的复苏率、优胚率、临床妊娠率、种植率等指标。结果:载杆玻璃... 目的:比较载杆玻璃化冷冻法与程序冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果。方法:将接受体外受精-胚胎移植患者剩余的Ⅰ～Ⅲ级胚胎进行程序冷冻或载杆玻璃化冷冻,比较胚胎复苏后的复苏率、优胚率、临床妊娠率、种植率等指标。结果:载杆玻璃化冷冻复苏66个周期,253个胚胎、存活192个(75.89%),复苏后优胚173个(90.10%),移植66个周期,临床妊娠26个周期(39.39%),种植率19.25%,流产2个周期。程序冷冻复苏105个周期,589个胚胎、存活327个(55.52%),复苏后优胚268个(81.96%),移植105个周期,临床妊娠32个周期(30.47%),种植率15.18%,流产4个周期。载杆玻璃化法冷冻后的胚胎复苏率和优胚率明显高于程序冷冻法(P<0.01,P<0.05),临床妊娠率、种植率略高于程序冷冻法(P>0.05)。结论:载杆玻璃化冷冻法是一种有效的胚胎冷冻方法,其复苏率和复苏后优胚率均明显高于传统的程序冷冻法,可以提高胚胎的有效使用。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 程序冷冻 早期胚胎 体外受精-胚胎移植
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玻璃化法保存异体肌腱移植的组织学研究 被引量：5
5
作者 吴富章 卜海富 +2 位作者 赵刚 蔡靖宇 郭涛 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期1573-1577,共5页
[目的]对玻璃化法与程序冷冻法保存异体肌腱移植后的组织学演变及特性进行观察、分析,以了解其临床应用的可行性及影响因素。[方法]家兔36只,平均分为A组为新鲜自体肌腱移植组,B组为玻璃化法保存异体肌腱移植组,C组为程序冷冻法保存异... [目的]对玻璃化法与程序冷冻法保存异体肌腱移植后的组织学演变及特性进行观察、分析,以了解其临床应用的可行性及影响因素。[方法]家兔36只,平均分为A组为新鲜自体肌腱移植组,B组为玻璃化法保存异体肌腱移植组,C组为程序冷冻法保存异体肌腱移植组,对术前、术后3、8、12周异体肌腱的形态学、组织学演变进行观察。[结果]玻璃化法保存肌腱完整率高于程序冷冻法,差异有显著性。A、B组移植后较C组粘连轻,光泽好。新生血管、腱细胞成熟早,愈合进程快。[结论]玻璃化法较好地保存了肌腱的细胞外结构,玻璃化法保存异体肌腱移植具有接近正常肌腱的组织学特性,其效果优于程序冷冻法。 展开更多
关键词 玻璃化 程序冷冻 肌腱 异体移植
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牛卵泡卵母细胞的体外成熟和冷冻保存 被引量：2
6
作者 许卫华 王子玉 +2 位作者 王锋 偶健 周冬仁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期264-269,共6页
在简化牛卵母细胞体外成熟的基础上,观察了保护剂、平衡温度、预平衡方法、解冻方法以及冷冻方法对牛卵泡卵母细胞冷冻的影响。结果表明:在体外成熟培养液中添加26.2 mmol/L的NaHCO3和对屠宰场卵巢进行选择更能促进牛卵母细胞的体外成熟... 在简化牛卵母细胞体外成熟的基础上,观察了保护剂、平衡温度、预平衡方法、解冻方法以及冷冻方法对牛卵泡卵母细胞冷冻的影响。结果表明:在体外成熟培养液中添加26.2 mmol/L的NaHCO3和对屠宰场卵巢进行选择更能促进牛卵母细胞的体外成熟;无论是程序冷冻还是玻璃化冷冻,乙二醇(EG)与甘油(GLY)相比更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻效果;在程序冷冻中,冷冻液中添加0.1 mol/L蔗糖比添加0.3mol/L的蔗糖更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻;在玻璃化冷冻中,37℃和25℃的平衡温度比4℃更适合牛卵泡卵母细胞的冷冻;在10%、5%、1%的预平衡浓度之间,5%的预平衡浓度即可达到预平衡的效果;在解冻时,多步脱除保护剂更能保护冷冻的卵母细胞;比较了几种最小样本量(minimum size sample,MSS)玻璃化冷冻方法,解冻成熟培养后的成熟率,拉细毛细玻璃管冷冻法为(41.67±3.19)%,极显著高于未拉细毛细玻璃管冷冻法(glassmicropipette,GMP)的(30.19±1.93)%和固体表面冷冻法(solid surface vitrification,SSV)的(28.33±2.89)%(P<0.01)。 展开更多
关键词 牛 卵母细胞 体外成熟 程序冷冻 玻璃化冷冻
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玻璃化冷冻及程序冷冻对人卵巢组织卵泡活性的影响 被引量：2
7
作者 刘丽英 曲文玉 +3 位作者 蒋丽 张晓丽 刘晓莉 孔刚 《中国临床医学》 2015年第1期33-37,共5页
目的:比较玻璃化冷冻及程序冷冻对人卵巢组织卵泡活性的影响。方法:将15例人卵巢组织20 min内运至实验室,切割成1 mm×5 mm×5 mm大小的卵巢皮质片,随机分为新鲜组、玻璃化冷冻组及程序冷冻组。玻璃化冷冻组及程序冷冻组均采用... 目的:比较玻璃化冷冻及程序冷冻对人卵巢组织卵泡活性的影响。方法:将15例人卵巢组织20 min内运至实验室,切割成1 mm×5 mm×5 mm大小的卵巢皮质片,随机分为新鲜组、玻璃化冷冻组及程序冷冻组。玻璃化冷冻组及程序冷冻组均采用优化的实验方法进行。新鲜及复苏组织体外培养后,在光镜及电镜下分析卵泡的形态正常率,采用激素释放试验及异体移植试验检测冷冻复苏的人卵巢组织的功能,并与新鲜组比较。结果:冷冻复苏组及新鲜对照组卵巢组织皮质内均可见形态正常和异常的始基及初级卵泡,新鲜对照组卵泡形态正常率显著高于玻璃化冷冻组和程序冷冻组(P<0.05);程序冷冻组形态正常率稍高于玻璃化冷冻组(P>0.05)。3组均可见超微结构正常及异常的原始卵泡、初级卵泡。卵巢皮质片体外培养后持续分泌雌二醇和孕酮。新鲜组激素分泌水平高于玻璃化冷冻组和程序冷冻组,但差异无统计学意义(P>0.05)。异体移植试验显示,程序冷冻组较玻璃化冷冻组具有更高的移植物回收数及卵泡密度。结论:由于程序冷冻人卵巢组织卵泡具有较高的发育潜能,因此其较玻璃化冷冻更有应用前景。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 程序冷冻 人卵巢组织 激素释放试验 超微结构 移植
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玻璃化法与程序化法冻融小鼠胚胎复苏及囊胚孵出效果的比较 被引量：1
8
作者 马兰红 蔡霞 +2 位作者 胡泊 赵静 巩晓芸 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第5期519-521,共3页
目的：探讨玻璃化法与程序化法冻融小鼠胚胎复苏及囊胚孵出效果,为玻璃化法应用于人胚奠定基础.方法： 6～8周龄纯净级昆明种小鼠促排卵与雄鼠合笼妊娠后收集2-细胞胚胎,分别采用玻璃化法与程序化法进行冻融及培养,并比较2种方法小鼠胚... 目的：探讨玻璃化法与程序化法冻融小鼠胚胎复苏及囊胚孵出效果,为玻璃化法应用于人胚奠定基础.方法： 6～8周龄纯净级昆明种小鼠促排卵与雄鼠合笼妊娠后收集2-细胞胚胎,分别采用玻璃化法与程序化法进行冻融及培养,并比较2种方法小鼠胚胎的复苏率、囊胚孵出率.结果： 玻璃化法与程序化法的复苏率分别为63.82%（224/351）、62.57%（209/334）,差异无统计学意义（P＞0.05）;玻璃化法与程序化法囊胚孵出率分别为34.2%（120/351）、31.74%（106/334）,差异无统计学意义（ P＞0.05）.结论： 玻璃化技术具有有效、简便、迅速的优点,是冻贮鼠胚最为理想的方法. 展开更多
关键词 小鼠 胚胎 玻璃化冷冻 程序冷冻 复苏率 孵出率
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人卵巢组织程序化冷冻及体外培养对卵泡活性和雌二醇分泌的影响 被引量：1
9
作者 田玄玄 阮祥燕 +2 位作者 Montag Markus Liebenthron Jana Alfred O. Mueck 《首都医科大学学报》 CAS 2013年第4期506-511,共6页
目的探讨程序化冷冻保存及组织体外培养对人卵巢皮质内卵泡活性和雌二醇分泌的影响。方法取手术切除的人卵巢皮质组织,修剪成1 cm3大小组织块,采用抽签法随机分为新鲜组、程序冷冻组、新鲜培养组、冻融后培养组。应用程序化冷冻法冻存... 目的探讨程序化冷冻保存及组织体外培养对人卵巢皮质内卵泡活性和雌二醇分泌的影响。方法取手术切除的人卵巢皮质组织,修剪成1 cm3大小组织块,采用抽签法随机分为新鲜组、程序冷冻组、新鲜培养组、冻融后培养组。应用程序化冷冻法冻存卵巢组织,冷冻前后分别对卵巢组织进行体外培养,电化学发光免疫分析法检测上清液中雌二醇水平。冷冻前后及培养前后分别用Clacein AM进行卵泡荧光染色,各级卵泡计数。结果①冷冻前后各级卵泡数量及构成比差异无统计学意义(P>0.05);②新鲜组织和冻融组织体外培养都具有持续分泌E2的功能,开始培养阶段冻融组织分泌的雌二醇水平偏低(P<0.05),之后组间上清液雌二醇水平差异无统计学意义(P>0.05);③体外培养前后始基卵泡和初级卵泡数量及其构成比差异无统计学意义(P>0.05);体外培养后次级卵泡数量及构成比增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论程序冷冻法可以较好地保存人卵巢皮质内的窦前卵泡,不影响体外培养的卵巢组织的雌二醇分泌。卵巢组织体外培养情况下,次级卵泡的生长优于始基卵泡和初级卵泡的生长。 展开更多
关键词 卵巢组织 程序冷冻 体外培养
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不同冷冻方法对牛体外受精胚胎冷冻效果的影响
10
作者 佟桂芝 王洪宝 +2 位作者 丁丽艳 李同豹 韩永胜 《当代畜牧》 2006年第7期35-37,共3页
通过采用程序降温法(试验1:分步法10%甘油;试验2:直接法1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖)和玻璃化法(试验3:20%甘油+0.3M蔗糖+0.3M木糖+3%聚乙二醇+20%乙二醇)对牛体外受精胚胎进行冷冻保存及解冻后进行孵化培养试验,用囊胚孵化率对各方法... 通过采用程序降温法(试验1:分步法10%甘油;试验2:直接法1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖)和玻璃化法(试验3:20%甘油+0.3M蔗糖+0.3M木糖+3%聚乙二醇+20%乙二醇)对牛体外受精胚胎进行冷冻保存及解冻后进行孵化培养试验,用囊胚孵化率对各方法进行了比较。结果表明,10%甘油组、1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖组及玻璃化组胚胎存活率分别为85%、82.5%、90%;囊胚孵化率分别为50%、55%和80%(P<0.05)。体外受精胚用玻璃化法保存显著优于程序降温法,可获得较高的胚胎存活率(90%)和囊胚孵化率(80%)。 展开更多
关键词 牛 体外受精 胚胎 程序冷冻 玻璃化保存 孵化
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慢速程序冷冻对透明带显微操作后人类胚胎冻存率及发育的影响 被引量：12
11
作者 舒益民 庄广伦 +2 位作者 徐艳文 方丛 张敏芳 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第5期352-355,共4页
【目的】探讨慢速程序冷冻对透明带显微操作后胚胎冻存率及继续发育的影响。【方法】将 96个Ⅱ级以上人类多精受精胚胎随机分为单纯透明带打孔组 (n =2 4) ,胚胎活检组 (n =40 )及对照组 (n =32 )。为模拟临床种植前诊断活检后胚胎冷冻... 【目的】探讨慢速程序冷冻对透明带显微操作后胚胎冻存率及继续发育的影响。【方法】将 96个Ⅱ级以上人类多精受精胚胎随机分为单纯透明带打孔组 (n =2 4) ,胚胎活检组 (n =40 )及对照组 (n =32 )。为模拟临床种植前诊断活检后胚胎冷冻过程 ,将透明带显微操作后胚胎继续培养 6～ 10h再进行慢速程序冷冻 ,观察各组胚胎冷冻解冻后的冻存率及胚胎继续发育能力。【结果】活检及透明带打孔后冻融胚胎中发生裂解的卵裂球多位于透明带破口附近。活检组胚胎完整率、胚胎存活率及卵裂球存活率分别为 10 % ,2 5 0 %和 2 9 0 % ,较对照组 (4 3 7% ,6 6 0 %和 6 2 4% )明显降低 (P <0 0 1)。虽然单纯透明带打孔组冷冻后胚胎完整率及胚胎存活率与活检组无明显差异 ,但卵裂球存活率较胚胎活检组高 (分别为 40 9%和 2 9 0 % ) (P<0 0 1) ,以上各组存活胚胎继续发育率差异无显著性 (P>0 0 5 )。【结论】以丙二醇和蔗糖为冷冻保护剂的人类分裂期胚胎慢速冷冻程序并不适用于化学法透明带打孔活检胚胎的冷冻保存 。 展开更多
关键词 透明带 显微操作 活检 慢速程序冷冻 胚胎 冻存率 发育
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程序冷冻法、液氮蒸汽法冷冻人类精子的效果比较 被引量：11
12
作者 李玉山 王全先 +2 位作者 高学敏 杨险峰 胡耀龙 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第9期1814-1815,共2页
目的:比较程序冷冻法和液氮蒸汽法冷冻保存人类精子的效果。方法:用同一批次GYC型冷冻保护剂,分别应用程序冷冻法和液氮蒸汽法对68份精液标本进行冷冻保存,并比较其冷冻复苏率。结果:应用程序冷冻法冷冻的精液标本,其复苏后前向运动精子... 目的:比较程序冷冻法和液氮蒸汽法冷冻保存人类精子的效果。方法:用同一批次GYC型冷冻保护剂,分别应用程序冷冻法和液氮蒸汽法对68份精液标本进行冷冻保存,并比较其冷冻复苏率。结果:应用程序冷冻法冷冻的精液标本,其复苏后前向运动精子(a+b级)的冷冻复苏率为66.7%±8.1%,应用液氮蒸汽法冷冻的精液标本,其复苏后前向运动精子(a+b级)的冷冻复苏率为63.9%±7.9%,两组相比无显著差异(P>0.05)。结论:采用程序冷冻法和液氮蒸汽法冷冻人类精子,二者冷冻复苏率无显著差异,两种方法均可以用于人类精子库冷冻保存精液标本。 展开更多
关键词 精液保存 冷冻精子 程序冷冻法 液氮蒸汽法
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液氮蒸汽法、程序冷冻法冷冻精子复苏后活动能力比较 被引量：9
13
作者 许成岩 胡京美 陈子江 《山东医药》 CAS 北大核心 2007年第21期9-10,共2页
目的比较液氮蒸汽法和程序冷冻法冷冻保存的人类精子复苏后的活动能力。方法在同一种冷冻保护剂作用下,分别采用液氮蒸汽法和程序冷冻法对79份精液标本进行冷冻,比较复苏后精子的活动力。结果液氮蒸汽法冷冻的标本复苏后前向活动精子百... 目的比较液氮蒸汽法和程序冷冻法冷冻保存的人类精子复苏后的活动能力。方法在同一种冷冻保护剂作用下,分别采用液氮蒸汽法和程序冷冻法对79份精液标本进行冷冻,比较复苏后精子的活动力。结果液氮蒸汽法冷冻的标本复苏后前向活动精子百分率和总活动率分别为43.2%±7.7%、52.2%±9.6%,用程序冷冻法冷冻者分别为44.2%±3.5%、52.9%±4.9%,两组相比,P均>0.05;但与冷冻前的58.2%±5.6%、65.6%±5.7%相比均明显下降,P均<0.05。结论采用液氮蒸汽法和程序冷冻法冷冻的人类精子复苏后活动能力相似,两种方法均可以用于常规的精子冷冻。 展开更多
关键词 精液保存 冷冻精子 液氮蒸汽法 程序冷冻法
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不同方法冷冻保存人类精子效果的研究
14
作者 王艳玲 何红梅 +2 位作者 孙丽 刘林燕 左奎 《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》 2023年第5期62-66,共5页
探讨人类精液冷冻前不同的处理方法、不同冷冻载体以及不同冷冻方法这三个因素对人类精子冷冻复苏效果的影响。方法:选取在曲靖市妇幼保健院就诊的男科患者,将符合纳入标准的30份精液标本作为研究对象,冷冻前分别进行洗涤离心处理和梯... 探讨人类精液冷冻前不同的处理方法、不同冷冻载体以及不同冷冻方法这三个因素对人类精子冷冻复苏效果的影响。方法:选取在曲靖市妇幼保健院就诊的男科患者,将符合纳入标准的30份精液标本作为研究对象,冷冻前分别进行洗涤离心处理和梯度离心处理,原液做对照,再分别采用1.8ml、0.5ml、0.25ml冷冻载体、分别采用程序化降温仪和液氮蒸汽熏蒸法冷冻。比较精液复苏后精子活力以及复苏率。结果:原液组、洗涤离心组和梯度离心处理组精液使用0.25ml冷冻载体并且采用液氮熏蒸法冷冻组复苏效果最差(P<0.05);三组不同来源的精液使用0.25ml冷冻载体并且采用程序化法冷冻组复苏效果最好(P<0.05);三组不同来源的精液使用1.8ml和0.5ml冷冻载体并且使用液氮熏蒸法冷冻效果相当(P>0.05)。无论是熏蒸法还是程序化降温仪冷冻法,精液原液组冷冻复苏效果优于洗涤离心组和梯度离心组(P<0.05),精液洗涤离心组和梯度离心组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:精液冷冻前进行精液优化处理对精子复苏效果有影响,不同的冷冻方法对精液复苏效果影响尚小,不同冷冻载体应选择适合的冷冻方法,实际工作中应根据精液质量和来源选择不同的冷冻方法和载体。 展开更多
关键词 精子冷冻 冷冻载体 程序冷冻法 液氮熏蒸法
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添加胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠对牛体外胚胎生产、低温保存及常规冷冻效果的影响 被引量：1
15
作者 张浩波 赵善江 +7 位作者 王欢 徐茜 冯志强 王婉洁 巩建飞 庞云渭 杜卫华 朱化彬 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4077-4084,共8页
【目的】探究添加胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠(insulin-transferrin-sodium selenite,ITS)对牛体外胚胎生产、4℃低温保存及常规程序冷冻效果的影响,以期应用ITS提高牛体外胚胎的生产及保存效果。【方法】对屠宰场卵巢来源的牛卵母细胞进... 【目的】探究添加胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠(insulin-transferrin-sodium selenite,ITS)对牛体外胚胎生产、4℃低温保存及常规程序冷冻效果的影响,以期应用ITS提高牛体外胚胎的生产及保存效果。【方法】对屠宰场卵巢来源的牛卵母细胞进行体外受精,①研究在胚胎体外培养后期液M2中添加ITS对囊胚率的影响,试验分为M2中添加ITS组(M2+ITS)和M2中未添加ITS的对照组(M2-control);②研究在M2中添加ITS后进一步在前期培养液M1中添加ITS对早期胚胎发育的影响,试验分为M1和M2中均添加ITS组(M1+M2+ITS)和仅M2中添加ITS的对照组(M1-control);③在三气培养条件下对ITS改善胚胎发育的效果进行评估,试验分为添加ITS组(ITS)和未添加ITS的对照组(control),以上各组均统计卵裂率、7 d囊胚率及总囊胚率;④将获得的7 d牛囊胚在添加ITS的M2保存液(Hypo-ITS组)中低温保存(4℃)24 h后复苏培养,或者在添加ITS(Cryo-ITS组)的冷冻保存液中常规程序冷冻解冻后培养,以低温保存液中未添加ITS(Hypo-control组)和冷冻液中未添加ITS(Cryo-control组)为对照,统计胚胎的存活率和孵化率。【结果】与对照组相比,M2+ITS和M1+M2+ITS组的7 d囊胚率均显著提高(P<0.05);三气培养条件下,ITS组7 d囊胚率显著提高(P<0.05)。Hypo-ITS组4℃低温保存复苏的牛胚胎存活率与对照组差异不显著(P>0.05),但孵化率显著高于对照组(P<0.05);Cryo-ITS组的常规程序冷冻解冻的牛胚胎存活率及孵化率与对照组均无显著差异(P>0.05)。【结论】ITS可作为添加剂及低温保护剂用于提高牛体外胚胎生产及低温保存效果,但在常规程序化冷冻液中添加ITS对牛体外胚胎常规程序冷冻效果的提升并不明显。 展开更多
关键词 牛体外胚胎 胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠(ITS) 低温保存 常规程序冷冻
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不同冷冻方案保存人类卵巢组织的活性比较 被引量：4
16
作者 李云秀 孙莹璞 +1 位作者 唐莉 马艳萍 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第53期9125-9131,共7页
背景:卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案。目的:探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响。方法:采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液... 背景:卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案。目的:探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响。方法:采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液氮直投法对20例人类卵巢组织进行冷冻保存,复苏后采用细胞存活/死亡荧光分析法计数有活性的细胞,体外培养测定培养液雌二醇浓度及各级卵泡计数,判断3种不同冷冻方案对人类卵巢组织活性的影响。结果与结论:不同冷冻方案冻融后卵巢组织块的活性卵泡率均低于新鲜卵巢组(P<0.05),二甲基亚砜组最低,液氮直投法组与慢速程序冷冻法组差异无显著性意义。体外培养各冷冻组分泌的雌二醇水平比较,第4天时二甲基亚砜组低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组(P<0.05),至第8天时各冷冻组雌二醇水平与新鲜卵巢组一致。培养14 d组织学观察,各组卵巢组织内生长期卵泡比例增多,始基卵泡仍然占最主要的。新鲜卵巢组织正常卵泡的总数高于冷冻组(P<0.05),二甲基亚砜组的正常卵泡数低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组(P<0.05)。提示冷冻保存对卵巢组织卵泡有一定的损伤,但仍能保存大部分始基卵泡的活性,经体外培养后可进一步发育并具有分泌功能,在3种冷冻方案中,慢速程序冷冻法和液氮直投法的冷冻效果优于二甲基亚砜玻璃化冷冻法,液氮直投法操作简便,冷冻效果稳定。 展开更多
关键词 器官移植 组织移植 人卵巢组织 程序冷冻法 玻璃化冷冻 细胞存活 死亡分析 体外培养 卵泡活性 省级基金
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不同冷冻方法对胎儿卵巢组织早期卵泡的影响 被引量：1
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作者 王国平 王燕蓉 +2 位作者 梁雪云 崔岫 孙静 《宁夏医学院学报》 2008年第5期553-555,F0002,共4页
目的观察不同冷冻方法对胎儿卵巢组织早期卵泡的影响。方法分别采用程序冷冻法(PFG)、快速冷冻法(RFG)、玻璃化冷冻法(VG)冻存胎儿卵巢组织,解冻后进行光镜、电镜观察。结果光、电镜组织形态学观察发现冻后各组卵泡结构均存在一定程度... 目的观察不同冷冻方法对胎儿卵巢组织早期卵泡的影响。方法分别采用程序冷冻法(PFG)、快速冷冻法(RFG)、玻璃化冷冻法(VG)冻存胎儿卵巢组织,解冻后进行光镜、电镜观察。结果光、电镜组织形态学观察发现冻后各组卵泡结构均存在一定程度的冷冻损伤。冷冻后的胎儿卵巢内形态正常的卵泡数明显下降,在2 mm×2 mm×1 mm的卵巢皮质内,形态正常的卵泡数在PFG、RFG、VG及新鲜对照组(FCG)中分别为(992.3±618.2)个、(542.8±202.5)个、(1604.8±964.0)个和(1888.2±645.3)个。RFG卵泡数显著低于FEG与VG(P<0.05),但与PFG间差异无统计学意义(P>0.05)。结论三种冷冻方法均可有效冻存胎儿卵巢组织,其中玻璃化法对卵巢内早期卵泡的损伤最小,单位体积内保存的卵泡数最多。 展开更多
关键词 程序冷冻法 快速冷冻法 玻璃化冷冻法 早期卵泡 损伤
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程序冷冻法冷冻精子进行IVF-ET的临床结局分析 被引量：1
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作者 杨铭 王勇 段金良 《中国性科学》 2016年第6期108-111,共4页
目的:探讨程序冷冻法冷冻精子在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的临床结局及安全性。方法:回顾分析在本中心进行IVF-ET治疗的不孕夫妇的372个周期,分为4个组:用程序冷冻法冷冻精子行常规IVF共76个周期(A组),程序冷冻法冷冻精子行ICSI共92... 目的:探讨程序冷冻法冷冻精子在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的临床结局及安全性。方法:回顾分析在本中心进行IVF-ET治疗的不孕夫妇的372个周期,分为4个组:用程序冷冻法冷冻精子行常规IVF共76个周期(A组),程序冷冻法冷冻精子行ICSI共92个周期(B组),同期新鲜精液行常规IVF周期97例(C组),新鲜精液行ICSI周期107例(D组),分别比较A组与C组、B组与D组的正常受精率、异常受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率、种植率、流产率、多胎率和畸形率。结果:与新鲜精液IVFET组相比较,程序冷冻法冷冻精子常规IVF组及ICSI组的正常受精率、异常受精率、卵裂率、妊娠率、种植率、流产率、多胎率和畸形率等方面差异无统计学意义(P>0.05);但冷冻精子行ICSI组与新鲜精子行ICSI比较,优质胚胎率低且有统计学意义(P<0.05)。结论:用程序冷冻法冷冻精子助孕可以获得与新鲜精子相似的结局,是一种较为安全可靠的精液保存方法,可用于IVF-ET术前精液冷冻保存。 展开更多
关键词 程序冷冻法 精子冷冻 体外受精-胚胎移植
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三种冷冻方法对胎儿卵巢组织凋亡相关蛋白表达的Bcl-2、Bax、Caspase影响
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作者 王国平 李倩倩 王燕蓉 《中国医药指南》 2019年第26期1-1,3,共2页
目的观察三种冷冻方法对胎儿卵巢组织卵泡凋亡蛋白的影响。方法分别采用程序冻存法(PFG)、快速冻存法(RFG)、玻璃化冻存法(VG)冻存胎儿卵巢组织,解冻后采用免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果各冷冻组卵... 目的观察三种冷冻方法对胎儿卵巢组织卵泡凋亡蛋白的影响。方法分别采用程序冻存法(PFG)、快速冻存法(RFG)、玻璃化冻存法(VG)冻存胎儿卵巢组织,解冻后采用免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果各冷冻组卵泡Bcl-2蛋白阳性表达率下降,与新鲜组相比差异显著(P<0.05);Bax蛋白阳性表达率上升,PFG、VG组Bax蛋白阳性表达与新鲜组(FCG)差别不显著(P>0.05);RFG显著高于FCG、PFG、VG(P<0.001)。冷冻后,Caspase-3蛋白阳性表达率上升,PFG、RFG显著高于FCG(P<0.05),VG与FCG差别不显著(P>0.05)。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织。 展开更多
关键词 程序冷冻法 快速冷冻法 玻璃化冷冻法 卵泡 凋亡蛋白
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脱水时间及植冰温度对冷冻羊卵巢组织卵泡活性的影响
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作者 刘丽英 曲文玉 +3 位作者 回艳涛 张晓丽 刘晓莉 孔刚 《中国妇幼保健》 CAS 2015年第27期4698-4701,共4页
目的检测不同脱水时间及植冰温度对慢速程序冷冻羊卵巢组织卵泡活性的影响。方法羊卵巢组织制备成1 mm×5 mm×5 mm的卵巢皮质片,应用不同的脱水时间(20、40及60 min)及植冰温度(-5℃、-7℃和-9℃)进行慢速程序冷冻,采用中性红... 目的检测不同脱水时间及植冰温度对慢速程序冷冻羊卵巢组织卵泡活性的影响。方法羊卵巢组织制备成1 mm×5 mm×5 mm的卵巢皮质片,应用不同的脱水时间(20、40及60 min)及植冰温度(-5℃、-7℃和-9℃)进行慢速程序冷冻,采用中性红染色评价卵泡活力,组织学检测原始卵泡形态正常率,异体移植检测卵泡的存活情况。结果对照组卵泡存活率均高于各实验组(P<0.05)。Ⅱc与Ⅲc组卵泡活力均高于其余各实验组(P<0.05)。Ⅰc组卵泡存活率高于Ⅰa组及Ⅰb组,但差异无统计学意义(P>0.05)。对照组形态正常原始卵泡比例高于各实验组(P<0.05);Ⅱc组与Ⅲc组形态正常原始卵泡比例高于其余各实验组(P<0.05)。Ⅰc组形态正常原始卵泡比例高于Ⅰa组及Ⅰb组,但差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅱc组的移植物回收数及卵泡密度高于其余各实验组。结论 40 min脱水时间、-9℃植冰温度是最适宜的羊卵巢组织慢速程序冷冻方案。 展开更多
关键词 中性红染色 慢速程序冷冻 植冰温度 脱水时间 羊卵巢组织
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