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陆地棉异质型ACCase基因的种子特异表达载体构建与遗传转化 被引量:8
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作者 刘正杰 张园 +5 位作者 王彦霞 李朋波 苏莹 张曦 王玉美 华金平 《分子植物育种》 CAS CSCD 2011年第3期270-277,共8页
异质型ACCase催化乙酰CoA形成丙二酰辅酶A是植物脂肪酸合成途径中的第一个关键的步骤,也是限速步骤;植物体内过量表达ACCase能够增加脂肪酸合成的底物,有可能导致植株种子含油量的增加。本实验采用GUS基因瞬时表达检测棉花愈伤组织中种... 异质型ACCase催化乙酰CoA形成丙二酰辅酶A是植物脂肪酸合成途径中的第一个关键的步骤,也是限速步骤;植物体内过量表达ACCase能够增加脂肪酸合成的底物,有可能导致植株种子含油量的增加。本实验采用GUS基因瞬时表达检测棉花愈伤组织中种子特异性表达启动子AGP的活性;利用RT-PCR扩增,克隆了陆地棉异质型ACCase四个亚基编码基因(BCCP1,BC1,CTa2和CTb);利用基因融合等方法,分别构建种子特异表达的过量表达载体p2301MαBCCP1、p2301MαBC1、p2301MαCTa2和p2301MαCACtp-CTb,同时,用这些载体转化拟南芥获得抗性植株,经PCR检测均获得转基因阳性植株,为利用陆地棉异质型ACCase编码基因特异性提高植物种子油份含量等后续研究提供了工作基础。 展开更多
关键词 ACCASE 种子特异启动子 载体构建 遗传转化 陆地棉
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花生种子特异启动子AHSSP1的克隆及功能分析 被引量:6
2
作者 孙全喜 徐洪明 +5 位作者 李春娟 闫彩霞 赵小波 王娟 苑翠玲 单世华 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期460-467,共8页
为丰富花生种子特异启动子资源,本研究利用PCR技术在花生基因组中克隆了种子贮藏蛋白基因PSC32的启动子AHSSP1,利用半定量RT-PCR检测了PSC32基因表达模式,借助NewPLACE在线分析了AHSSP1序列中存在的顺式作用元件,并构建了AHSSP1驱动GUS... 为丰富花生种子特异启动子资源,本研究利用PCR技术在花生基因组中克隆了种子贮藏蛋白基因PSC32的启动子AHSSP1,利用半定量RT-PCR检测了PSC32基因表达模式,借助NewPLACE在线分析了AHSSP1序列中存在的顺式作用元件,并构建了AHSSP1驱动GUS报告基因的表达载体,经农杆菌转化获得转基因拟南芥,经GUS组织化学染色鉴定了该启动子的功能。结果表明,PSC32基因957 bp长的启动子AHSSP1序列具备种子特异表达启动子特有的3个RY REPEAT元件。半定量RT-PCR分析发现,PSC32基因在花生成熟种子中表达,而在饱果成熟期根、茎、叶片、花、入土前的果针、成熟种子的果壳中均不表达。GUS组织化学染色发现,转基因拟南芥成熟种子以及萌发种子的子叶、下胚轴和胚根均能够被染上蓝色;长出真叶后,子叶和下胚轴仍能被染色,而根和真叶不能被染上蓝色;成年期转基因拟南芥的叶片也不能被染上蓝色。而野生型拟南芥整个生长时期均不能被染上蓝色。以上现象说明AHSSP1是一个种子特异启动子。本研究丰富了花生种子特异启动子的资源,对花生籽仁品质改良或以花生籽仁作为"生物反应器"的研究具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 花生 种子特异启动子 转基因拟南芥 GUS组织化学染色
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△~6-脂肪酸脱饱和酶基因种子特异表达载体的构建 被引量:1
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作者 冷虹 李加纳 +2 位作者 陆合 柴友荣 殷家明 《中国农学通报》 CSCD 2006年第4期66-70,共5页
以napA基因序列设计引物,以甘蓝型油菜中油821基因组总DNA为模板,通过PCR扩增,克隆了种子特异表达napin启动子。序列分析表明,试验得到扩增片段长1148bp,含有其它napin启动子序列共有的高度保守序列。将扩增序列与真菌匍枝根霉Δ6-脂肪... 以napA基因序列设计引物,以甘蓝型油菜中油821基因组总DNA为模板,通过PCR扩增,克隆了种子特异表达napin启动子。序列分析表明,试验得到扩增片段长1148bp,含有其它napin启动子序列共有的高度保守序列。将扩增序列与真菌匍枝根霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因RnD6D连接,构建了RnD6D的种子特异表达载体pCNR,为获得高产γ-亚麻酸的转基因油菜奠定了基础。 展开更多
关键词 油菜 种子特异启动子 △^6-脂肪酸脱氢酶基因 植物表达载体
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绿豆种子8S球蛋白基因启动子的克隆及分析 被引量:3
4
作者 徐超 杨悦宁 +5 位作者 王吟 张梦晗 谢伟红 杨维东 刘洁生 李宏业 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期242-247,共6页
根据绿豆种子8S球蛋白α′亚基基因的末端序列设计3个特异反向引物.以绿豆基因组DNA为模板,采用基因组步移法,获得了8S球蛋白α′亚基基因起始密码子上游784 bp的DNA片段,通过序列测定和生物信息学分析,发现该序列含有启动子核心区以及... 根据绿豆种子8S球蛋白α′亚基基因的末端序列设计3个特异反向引物.以绿豆基因组DNA为模板,采用基因组步移法,获得了8S球蛋白α′亚基基因起始密码子上游784 bp的DNA片段,通过序列测定和生物信息学分析,发现该序列含有启动子核心区以及大量的种子特异表达相关的顺式作用元件,表明此序列为种子特异启动子序列.通过PCR方法在启动子3′端加上翻译增强序列TMV-omega序列,构建了植物双元表达载体pBI-8SGα-′o-mega-gus,并成功将其转化进入农杆菌. 展开更多
关键词 绿豆8S球蛋白 种子特异启动子 基因组步移
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热激转录因子AtHsfA9在转基因烟草中的功能分析
5
作者 高艳霞 贾凤娟 +1 位作者 吴炳江 杨国栋 《泰山医学院学报》 CAS 2013年第8期565-568,共4页
目的研究拟南芥热激转录因子AtHsfA9在转基因烟草中的抗高温能力。方法从拟南芥基因组中克隆了热激转录因子AtHsfA9,利用种子特异启动子At2S3构建了超表达载体At2S3::AtHsfA9并转化烟草,得到转基因烟草纯合株系。对野生型拟南芥进行45... 目的研究拟南芥热激转录因子AtHsfA9在转基因烟草中的抗高温能力。方法从拟南芥基因组中克隆了热激转录因子AtHsfA9,利用种子特异启动子At2S3构建了超表达载体At2S3::AtHsfA9并转化烟草,得到转基因烟草纯合株系。对野生型拟南芥进行45℃热激处理,对比未作处理的野生型(WT)拟南芥,观察热激转录因子AtHsfA9的表达量。同时对转基因烟草进行45℃胁迫处理,对照野生型烟草观察其根长变化。结果对野生型拟南芥进行45℃热激处理0.5h,1h,2h,3h,4h和5h后,热激转录因子AtHsfA9的表达量与未作处理的WT相比分别上升了4.5,6.2,15.0,34.6,27.0和10.4倍,说明热激转录因子AtHsfA9响应高温胁迫。对转基因烟草进行45℃胁迫处理12h,结果显示,与WT相比,经过热激处理的At2S3::AtHsfA9转基因株系的根长差异要小。结论热激转录因子AtHsfA9在转基因烟草中具有提高作物的抗高温能力。 展开更多
关键词 热激转录因 AtHsfA9 高温胁迫 种子特异启动子 At2S3
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种子特异启动子At2S3驱动热激转录因子AtHsfA6a提高烟草热抗性
6
作者 高艳霞 郭骞欢 +3 位作者 李敏 贾凤娟 颜康 郑成超 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期220-224,共5页
特异启动子指导外源基因在某一特定时空表达,避免个体多余营养的浪费,在作物品质及逆境适应性改良中具有重要应用潜力.采用种子特异启动子联合抗性基因的方法,对拟南芥种子特异启动子At2S3和热激转录因子At Hsf A6a进行克隆,构建p BI12... 特异启动子指导外源基因在某一特定时空表达,避免个体多余营养的浪费,在作物品质及逆境适应性改良中具有重要应用潜力.采用种子特异启动子联合抗性基因的方法,对拟南芥种子特异启动子At2S3和热激转录因子At Hsf A6a进行克隆,构建p BI121双元表达载体(p At2S3::At Hsf A6a),利用农杆菌菌株转化烟草,获得转基因烟草稳定株系,并进行种子抗高温胁迫萌发实验.结果显示:At Hsf A6a表达量随高温胁迫持续而不断积累,45℃高温处理后,热激转录因子At Hsf A6a的表达量最高上调28倍.转基因烟草株系(L2,L3)与野生型烟草(WT)相比,在45℃高温处理12 h、18 h和24 h后,最终萌发率分别为100%、98%和80%,98%、94%和76%以及97%、92%和70%.根长实验表明转基因株系L2和L3的根长为未处理时的74%和60%,而WT根长为未处理时的52%.上述结果说明超表达烟草株系的萌发和根系生长较之WT对热激处理更不敏感,呈现出更高的抗性;可为种子特异启动子加抗性基因的组合提高转基因植株抗胁迫能力提供直接实验证据,为基因工程育种提供种子特异启动子和抗胁迫新策略. 展开更多
关键词 热激转录因 种子特异启动子 高温抗性 转基因烟草
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水稻种子中特异表达IPT基因植物载体的构建
7
作者 王鸣刚 赵宏 +1 位作者 张红心 陈亮 《中国食品工业》 2011年第3期58-59,共2页
以水稻品种9311为材料,PCR扩增种子中特异表达的PG—5α基因启动子,并将此启动子与pCAMBIA 1300相连接,成功地构建了pCAMBIA1300-pPG5α-IPT-Nos植物表达载体,为改善水稻品质,提高水稻产量奠定基础。
关键词 水稻 种子特异启动子 IPT基因 植物表达载体
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油菜种子特异启动子Napin控制外源EGFP基因在芥菜中的表达 被引量:3
8
作者 邹敏 唐佳佳 宋洪元 《中国蔬菜》 北大核心 2012年第07X期18-22,共5页
为研究油菜种子特异启动子Napin在芥菜中的表达特性,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,将其置于来自油菜的Napin启动子下游,并经根癌农杆菌介导转入芥菜。对转基因芥菜种子及其T1代幼苗的EGFP检测表明:随着转基因植株的种子逐... 为研究油菜种子特异启动子Napin在芥菜中的表达特性,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,将其置于来自油菜的Napin启动子下游,并经根癌农杆菌介导转入芥菜。对转基因芥菜种子及其T1代幼苗的EGFP检测表明:随着转基因植株的种子逐渐发育成熟,EGFP基因在种皮、子叶、胚根中的表达强度逐渐增强;在转基因种子发芽过程中,幼苗根、子叶、下胚轴中EGFP的表达逐渐降低,直至不能检出绿色荧光。结果表明Napin启动子驱动的外源基因表达在芥菜中表现出较为严格的种子表达特异性。 展开更多
关键词 油菜种子特异启动子Napin 绿色荧光蛋白基因 转基因芥菜
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大豆种子特异性启动子的克隆及序列分析 被引量:10
9
作者 财音青格乐 李明春 +2 位作者 蔡易 陶然 邢来君 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期11-17,共7页
通过PCR技术从大豆品种吉林 4 3基因组DNA中分离到大豆β 伴球蛋白α 亚基基因启动子片段 (BCSP4 89) ,对此片段采用TAILPCR技术进一步延伸 ,获得了启动子片段BCSP6 6 6。序列分析表明 ,在启动子片段BCSP6 6 6中含有多种种子特异性启动... 通过PCR技术从大豆品种吉林 4 3基因组DNA中分离到大豆β 伴球蛋白α 亚基基因启动子片段 (BCSP4 89) ,对此片段采用TAILPCR技术进一步延伸 ,获得了启动子片段BCSP6 6 6。序列分析表明 ,在启动子片段BCSP6 6 6中含有多种种子特异性启动子所特有的序列元件 ,如A T富含序列元件、RY重复序列元件、AGCCCA序列元件、TACACAT序列元件、ACGT序列元件、E盒等。据此推测该启动子片段具有种子特异性启动子活性。以该片段构建种子特异性表达载体pBI12 1 6 6 6 ,以FloralDip方法转化拟南芥 ,转基因拟南芥中的GUS酶荧光光度分析和组织化学检测均表明 ,GUS基因在启动子片段BCSP6 6 6调控下获得了种子特异性表达。 展开更多
关键词 种子特异启动子 序列元件 TAIL PCR
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大豆种子特异性启动子的克隆及功能分析 被引量:18
10
作者 付永平 周海涛 王丕武 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第12期105-111,118,共8页
【目的】从大豆中克隆得到β-伴球蛋白α亚基基因的启动子序列7αP,并对其进行功能分析。【方法】利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离β-伴球蛋白α亚基基因启动子序列7αP,将其与GUS基因融合,构建种子特异性表达载体p7αP-GUS,通过根癌... 【目的】从大豆中克隆得到β-伴球蛋白α亚基基因的启动子序列7αP,并对其进行功能分析。【方法】利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离β-伴球蛋白α亚基基因启动子序列7αP,将其与GUS基因融合,构建种子特异性表达载体p7αP-GUS,通过根癌农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89,对再生植株进行PCR、Southern blot检测和GUS组织化学分析。【结果】序列分析表明,7αP长度为1 382 bp,其中含有多种种子特异性启动子的序列元件,如RY重复序列元件、E-box、SEF1-motif、SEF4-motif(、CA)n、Dc3启动子结合因子和ACGT序列元件及一些诱导物应答元件。转基因植株的PCR和Southern blot结果显示,成功地获得了转基因阳性植株;GUS活性检测表明,仅能在种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶等其他组织中均未检测到GUS活性。【结论】大豆β-伴球蛋白α亚基基因上游1 382 bp片段具有种子特异性启动子功能,7αP为种子特异性启动子。 展开更多
关键词 大豆 种子特异启动子 功能分析 GUS染色 烟草
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棉花种子特异表达的LEA启动子克隆及功能验证 被引量:9
11
作者 刘峰 汪小东 +1 位作者 赵彦鹏 孙杰 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期310-317,共8页
以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,... 以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,如E-box、ABRE元件、A-box等。与已报道的棉花品种Coker 201的LEA基因D34的5'端上游调控序列1212bp相比,两者具有97%的一致性。拟南芥遗传转化的功能分析结果表明,所克隆的序列能驱动GUS基因在种子中特异表达,且GUS主要在转基因植物的种子发育后期表达;其表达强度要弱于组成型的CaMV35S启动子。研究结果不仅有助于进一步深入认识棉花LEA基因功能及其表达调控规律,也为植物遗传转化提供组织特异性的启动子。 展开更多
关键词 棉花 种子特异启动子 胚胎发育晚期丰富蛋白
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种子特异性启动子研究进展 被引量:6
12
作者 刘晓娜 付畅 黄永芬 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2007年第2期218-225,共8页
植物的种子,尤其是油料和谷类作物的种子与人类的生产生活关系非常密切,因此,也成为植物基因工程中进行改良的重要目标材料。转化的外源基因在植物受体组织中能否正确、高效并按照人们的意愿特异地表达是人们非常关注的问题。启动子驱... 植物的种子,尤其是油料和谷类作物的种子与人类的生产生活关系非常密切,因此,也成为植物基因工程中进行改良的重要目标材料。转化的外源基因在植物受体组织中能否正确、高效并按照人们的意愿特异地表达是人们非常关注的问题。启动子驱使外源基因在受体植株中启动转录是外源基因能够表达的必要条件。目前人们所广泛研究的种子特异性启动子基本上属于Ⅱ类启动子,它可以驱使外源基因在植物的种子中特异表达,按照人们的意愿改进植物代谢途径,提高种子中营养物质含量等。种子特异性启动子的结构符合Ⅱ类启动子的特点,具有基本启动子、起始子和上游元件。它区别于其它类型启动子的一个显著特点是上游存在一些特异的调控元件与调控种子特异性基因的特异表达有关。本文综述了高等植物种子特异性启动子的结构及其在植物基因工程中的最新研究进展。对这类启动子的结构和功能元件的了解,有助于人们更加深入地理解高等植物基因表达调控机制,提高人们对植物种子发育过程及有机物在种子中积累机制的认识,而且可以为植物基因工程中生物反应器的研究提供有应用价值的启动子元件。 展开更多
关键词 植物基因工程 种子特异启动子 结构
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豆荚特异性启动子Pmsg的克隆及抗大豆食心虫植物表达载体的构建 被引量:6
13
作者 吴书音 郭玉双 +4 位作者 柏锡 李杰 才华 李勇 朱延明 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第3期58-63,共6页
植物基因工程载体构建时,一般采用组成型启动子,因涉及转基因食品安全性问题,在社会上引起争议。采用组织特异性启动子代替组成型启动子,既可调控下游基因的表达又能解决转基因食品安全性问题。采用同源克隆方法从栽培大豆绥农14中克隆... 植物基因工程载体构建时,一般采用组成型启动子,因涉及转基因食品安全性问题,在社会上引起争议。采用组织特异性启动子代替组成型启动子,既可调控下游基因的表达又能解决转基因食品安全性问题。采用同源克隆方法从栽培大豆绥农14中克隆了2 278 bp的豆荚特异性启动子Pmsg,与GenBank上的大豆msg基因启动子序列相似性为99%。构建了由启动子Pmsg调控经人工改造、具有抗大豆食心虫功能的基因(Cry1Iem)的表达载体pBMBt,以及由种子特异性启动子PGy2调控Cry1Iem基因的表达载体pBGBt,为抗大豆食心虫基因工程研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 抗大豆食心虫 豆荚特异启动子克隆 种子特异启动子 Cryllem基因 组织特异性植物表达栽体
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油菜种子特异表达启动子pNapB和pFAE1的结构与功能比较研究 被引量:7
14
作者 肖娜 武玉花 +2 位作者 肖玲 吴刚 卢长明 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-9,共9页
启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油821中分离到油菜基因NapB和FAE1的上游启动子序列pNapB和pFAE1,其中pNapB长1136bp,pFAE1长1420bp。两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达... 启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油821中分离到油菜基因NapB和FAE1的上游启动子序列pNapB和pFAE1,其中pNapB长1136bp,pFAE1长1420bp。两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达启动子的顺式作用元件,包括RY重复、G-box和E-box等,但两种启动子顺式作用元件的序列分布不同。将pNapB和pFAE1两个启动子分别与报告基因GUS融合并通过农杆菌介导法导入烟草,得到大量转基因烟草植株。对T1代转基因烟草进行组织化学分析,比较了不同启动子的组织表达特异性。结果表明,两种启动子都只在种子中起作用,属于典型的种子特异性表达启动子,但是它们作用的时间和空间分布以及作用强度明显不同。pNapB启动子比pFAE1作用开始的时间早,持续时间长,在早期作用比pFAE1强,但pFAE1启动子在种子发育中期启动速度快,成熟种子的GUS染色深度在两种启动子间差别不大。 展开更多
关键词 种子特异表达启动子 pNapB pFAE1 遗传转化 GUS 转基因烟草
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大豆硬脂酸-ACP脱饱和酶基因启动子的克隆及其表达活性分析 被引量:6
15
作者 张庆林 赵艳 +5 位作者 李晓薇 翟莹 张艳 王英 李景文 王庆钰 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1205-1211,共7页
以吉豆2号基因组为模板,通过TAILPCR方法,扩增得到大豆硬脂酸-ACP脱饱和酶基因启动子片段SACPD-Cp。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列中含有多种典型的种子特异性表达序列元件。将SACPD-Cp片段取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子... 以吉豆2号基因组为模板,通过TAILPCR方法,扩增得到大豆硬脂酸-ACP脱饱和酶基因启动子片段SACPD-Cp。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列中含有多种典型的种子特异性表达序列元件。将SACPD-Cp片段取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-SACPD-Cp,通过农杆菌介导法在大豆组织中进行瞬时表达,GUS组织化学染色和荧光定量研究其表达特性。结果表明,SACPD-Cp驱动GUS基因在种子中的表达活性是CaMV35S启动子的93.01%;SACPD-Cp启动子与现已知启动子无同源性,仅在大豆种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶组织中均未检测到GUS活性,证实SACPD-Cp是一个新的种子特异性启动子。 展开更多
关键词 大豆 硬脂酸-ACP脱饱和酶基因 序列分析 种子特异启动子 瞬时表达
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种子特异性启动子的研究进展 被引量:5
16
作者 李吉涛 郭建春 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第4期1382-1385,共4页
启动子是基因表达的重要顺式调控元件。对植物基因启动子的核心结构与功能、种子特异性启动子的结构特点、植物基因启动子克隆的方法、已经克隆的种子特异启动子及存在的问题进行了综述,并对该领域的发展趋势进行了展望。
关键词 种子特异启动子 结构 克隆方法
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大豆种子特异性启动子研究进展 被引量:5
17
作者 赵艳 刘晓鑫 +3 位作者 张庆林 王英 李景文 王庆钰 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期151-156,共6页
种子中的营养成分是植物基因工程改良的重要目标,种子特异性启动子能够调控外源基因在种子中专一性表达,利用高效特异性强的种子特异性启动子可以按照人们的意愿改进及提高种子中营养物质含量。因此,明确大豆中种子特异启动子的调控机... 种子中的营养成分是植物基因工程改良的重要目标,种子特异性启动子能够调控外源基因在种子中专一性表达,利用高效特异性强的种子特异性启动子可以按照人们的意愿改进及提高种子中营养物质含量。因此,明确大豆中种子特异启动子的调控机制及获得更多大豆种子特异性启动子对大豆改良研究及应用具有巨大的推动作用,该文综述了种子特异性启动子顺式作用元件、相关转录因子的特点及大豆中种子特异性启动子在植物基因工程中研究应用的最新进展。 展开更多
关键词 大豆 种子特异启动子 顺式作用元件 转录因
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大豆BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体的构建 被引量:5
18
作者 付永平 张君 +2 位作者 王丕武 周海涛 曲静 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第1期83-89,96,共8页
【目的】构建具有大豆蛋白酶抑制剂BBi基因反向重复结构的ihpRNA种子特异性表达载体,并将其转入根癌农杆菌中,为大豆品质改良奠定基础。【方法】采用PCR技术克隆大豆蛋白酶抑制剂BBi基因的正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和... 【目的】构建具有大豆蛋白酶抑制剂BBi基因反向重复结构的ihpRNA种子特异性表达载体,并将其转入根癌农杆菌中,为大豆品质改良奠定基础。【方法】采用PCR技术克隆大豆蛋白酶抑制剂BBi基因的正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GFP基因片段,分别连入克隆载体pMD18-T Vector中。然后根据植物中ihpRNA原理,以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,将组成RNAi载体的4个目的片段分别连入其中,然后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。【结果】PCR扩增得到组成RNAi载体的4个目的片段,分别构建成重组克隆载体和ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS,并转化得到含有p7αP-GFP-BBiS的农杆菌EHA101和EHA105。【结论】成功构建了具有BBi基因反向重复结构的ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS,BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入到农杆菌中。 展开更多
关键词 大豆 蛋白酶抑制剂BBi基因 ihpRNA表达载体 种子特异启动子
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种子特异表达启动子的克隆分析及其植物表达载体的构建 被引量:3
19
作者 朱亚兰 姚伟 +5 位作者 窦建华 乐超银 何正权 陈发菊 梁宏伟 梁薇 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第2期6-10,共5页
根据GenBank已公布的种子特异性的Oleosin蛋白基因启动子序列设计合成引物,利用PCR技术从油菜总基因组DNA中扩增出Oleosin基因启动子序列(SOP),将该序列克隆到pGM-T载体中,经鉴定获得pGM-T-SOP重组载体。测序和序列分析表明,该启动子序... 根据GenBank已公布的种子特异性的Oleosin蛋白基因启动子序列设计合成引物,利用PCR技术从油菜总基因组DNA中扩增出Oleosin基因启动子序列(SOP),将该序列克隆到pGM-T载体中,经鉴定获得pGM-T-SOP重组载体。测序和序列分析表明,该启动子序列由899 bp核苷酸组成,其核苷酸序列与GenBank中的Oleosin基因启动子序列同源性高达95.6%。分别用限制性内切酶HindⅢ和BamH I双酶切重组质粒pGMT-SOP和双元植物表达载体pBI121,分别回收pGMT-SOP重组质粒中的SOP小片段和pBI121植物表达载体中去掉CaMV35S组成型启动子的大片段,经连接、转化和鉴定,获得由SOP驱动报告基因GUS的新型植物表达载体pBI121-SOP,为外源基因在油菜种子中的定位表达研究奠定基础。 展开更多
关键词 种子特异表达启动子 克隆 油菜
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棉花种子特异性启动子的克隆及序列分析 被引量:4
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作者 周佳佳 孙觅真 +5 位作者 张素青 伊海法 邢会贤 王丽媛 宋宪亮 孙学振 《山东农业科学》 2014年第6期6-10,共5页
启动子是基因表达的重要顺式调控元件,在基因工程中,种子特异性启动子可以调控外源基因在种子中特异表达,提高表达效率,增强转基因的效果。本试验根据棉花LEA蛋白D34基因序列设计引物,以海岛棉基因组DNA为模板,通过touch down PCR技术,... 启动子是基因表达的重要顺式调控元件,在基因工程中,种子特异性启动子可以调控外源基因在种子中特异表达,提高表达效率,增强转基因的效果。本试验根据棉花LEA蛋白D34基因序列设计引物,以海岛棉基因组DNA为模板,通过touch down PCR技术,获得D34基因的种子特异性启动子片段。测序结果表明该片段长1 384 bp,与已发表的D34基因序列相似度为94.87%。该片段除了含有启动子的基本元件TATA框、CAAT框外,还含有种子特异性启动子元件E-box、G-box、B-box、AACA基序等。此外,对其顺式元件做了生物学功能分析。 展开更多
关键词 棉花 种子特异启动子 序列分析
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