纳米Cu^2＋／TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的灭活效应 被引量：2

1

作者 姜建芳 崔海信 +2 位作者 杨涛 蔡鸿昌 吴东来 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1403-1406,共4页

利用病毒滴度测定和MDCK细胞电镜观察法,初步探讨了在365nm的黑光灯(UV)照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的光催化灭活效应,并分别考察了UV强度、UV照射时间以及H9N2病毒量对H9N2病毒光催化灭活效应的影响。实验结果表明,... 利用病毒滴度测定和MDCK细胞电镜观察法,初步探讨了在365nm的黑光灯(UV)照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的光催化灭活效应,并分别考察了UV强度、UV照射时间以及H9N2病毒量对H9N2病毒光催化灭活效应的影响。实验结果表明,在365nm黑光灯的照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对H9N2病毒具有显著的灭活效应,在UV强度为0.5mW/cm2、UV照射时间为2.5h、病毒量为0.1ml时,H9N2病毒的灭活率达到了100%。研究结果表明,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜在抑制禽流感(H9N2)病毒在环境媒介中的扩散与传播方面有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 Cu^2+/TiO2 禽流感病毒(h9n2) 光催化 灭活效应

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NDV La Sota株与H_9N_2亚型AIV血凝谱的比较研究 被引量：2

2

作者 郁川 程相朝 +5 位作者 吴庭才 李银聚 张春杰 王学强 张旭 冯运巩 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第12期128-131,共4页

为进一步研究NDV与AIV的生物学特性,为二者的鉴别诊断提供科学的依据,应用微量血凝(HA)试验比较观察NDV(La Sota)与AIV(H9N2)对鸡等17种动物红细胞的血凝谱。结果显示:NDV(La Sota)与AIV(H9N2)均可凝集鸡、鸭、鸽、鹌鹑、麻雀、喜鹊、... 为进一步研究NDV与AIV的生物学特性,为二者的鉴别诊断提供科学的依据,应用微量血凝(HA)试验比较观察NDV(La Sota)与AIV(H9N2)对鸡等17种动物红细胞的血凝谱。结果显示:NDV(La Sota)与AIV(H9N2)均可凝集鸡、鸭、鸽、鹌鹑、麻雀、喜鹊、赤颈鸫、三趾鹬、鹰鸮、长耳鸮、羊、小白鼠和人(O型)的红细胞,均不凝集兔的红细胞,但对牛、犬、猪红细胞的血凝特性有明显的差异。NDV(La Sota)可凝集这3种动物的红细胞且凝集效价均较高,而AIV(H9N2)对其则不具有凝集作用。表明NDV(La Sota)与AIV(H9N2)对不同动物红细胞血凝谱具有一定的差异性,特别是对不同哺乳动物红细胞的血凝性差异明显。 展开更多

关键词 新城疫病毒(La Sota) 禽流感病毒(h9n2) 血凝谱 血凝解脱

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湖北省首例人感染高致病性禽流感病例的流行病学调查 被引量：9

3

作者 官旭华 张险峰 +7 位作者 张瑜 刘公平 袁方玉 霍细香 邢学森 彭延 向妮娟 余宏杰 《中国热带医学》 CAS 2007年第10期1783-1785,1885,共4页

目的通过对1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的调查分析,为科学防控提供依据。方法采用病例流行病学调查方法,调查病例发病经过、可能的感染来源、传播途径及暴露因素等,医学观察患者的密切接触者,同时对患者进行临床诊治、实验室检... 目的通过对1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的调查分析,为科学防控提供依据。方法采用病例流行病学调查方法,调查病例发病经过、可能的感染来源、传播途径及暴露因素等,医学观察患者的密切接触者,同时对患者进行临床诊治、实验室检测。结果确诊1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1),经救治无效死亡。患者无明确病死禽接触史,有健康禽接触史。实验室检测鼻分泌物和下呼吸道灌洗物均分离出禽流感病毒H5N1,下呼吸道灌洗物禽流感病毒H5N1核酸阳性。患者的密切接触者中均未发现异常临床表现。结论存在感染来源不明的人禽流感病例,需加强不明原因肺炎监测和进一步研究人禽流感有关危险因素。 展开更多

关键词 人感染高致病性禽流感病毒(h5n1) 流行病学 防控

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一例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的流行病学调查 被引量：9

4

作者 王勇 何益新 +6 位作者 李群 吴家兵 韩从明 李贤相 赵武 熊传龙 王平 《疾病监测》 CAS 2006年第3期117-119,122,共4页

目的通过对1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的调查分析,为制定人禽流感预防控制措施提供科学依据。方法采用流行病学调查、临床检查、血清学检查和 RT-PCR、 Real-time PCR 法进行分析和诊断。结果发现1例人感染高致病性禽流感病毒(H... 目的通过对1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)的调查分析,为制定人禽流感预防控制措施提供科学依据。方法采用流行病学调查、临床检查、血清学检查和 RT-PCR、 Real-time PCR 法进行分析和诊断。结果发现1例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1),经救治无效因呼吸衰竭死亡。患者有明确的病、死禽接触史。采用隔离治疗、个人防护、医学观察、消毒等措施,疫情得到控制,未出现二代病例。结论需加强禽流感疫情监测,采取综合防控措施,预防疫情再次发生。 展开更多

关键词 人感染高致病性禽流感病毒(h5n1) 流行病学调查 综合防控措施

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禽流感病毒抗原超滤浓缩重要参数的动态变化 被引量：2

5

作者 张彦杰 李爱芬 《中国兽药杂志》 2007年第10期16-17,共2页

采用世界先进的切向流超滤浓缩技术,对禽流感病毒(H9N2亚型)超滤浓缩成倍体积,测定血凝价HA和半数感染量EID50。结果HA成倍增加,废液HA呈阴性,病毒回收率达100%;受宿主鸡胚系统的影响,EID50与病毒量之间不是简单的直线关系,但病毒的活... 采用世界先进的切向流超滤浓缩技术,对禽流感病毒(H9N2亚型)超滤浓缩成倍体积,测定血凝价HA和半数感染量EID50。结果HA成倍增加,废液HA呈阴性,病毒回收率达100%;受宿主鸡胚系统的影响,EID50与病毒量之间不是简单的直线关系,但病毒的活性不受影响。结果表明,所用超滤系统适用于禽流感病毒抗原的浓缩。 展开更多

关键词 禽流感病毒(h9n2亚型)抗原 超滤浓缩 血凝价 半数感染量

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H9N2亚型禽流感病毒PA基因的克隆与序列分析 被引量：1

6

作者 易华山 侯顺利 +5 位作者 胡永浩 独军政 刘萍 王光华 高闪电 常惠芸 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第3期12-16,共5页

对甘肃H9N2亚型的A/Chicken/GanSu/2/99(A/CK/GS/2/99)株PA基因进行了克隆、测序及分子进化分析.结果表明:该病毒PA基因开放阅读框由2 151个碱基组成,编码716个氨基酸;其与A/Quail/HongKong/NT28/99(H9N2)株和A/Duck/HongKong/Y280/97(H... 对甘肃H9N2亚型的A/Chicken/GanSu/2/99(A/CK/GS/2/99)株PA基因进行了克隆、测序及分子进化分析.结果表明:该病毒PA基因开放阅读框由2 151个碱基组成,编码716个氨基酸;其与A/Quail/HongKong/NT28/99(H9N2)株和A/Duck/HongKong/Y280/97(H9N2)株的核苷酸同源性分别为98.4%和98.5%,氨基酸同源性分别为98.7%和98.7%;与A/HongKong/156/97(H5N1)和A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的核苷酸同源性分别为89.0%和87.8%,氨基酸同源性分别为为93.9%和94.3%. 展开更多

关键词 禽流感病毒(h9n2株) PA基因 克隆 序列分析

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荆防败毒口服液抗病毒作用的研究

7

作者 康二勇 郭群 赵锁花 《畜牧兽医科技信息》 2010年第6期26-27,共2页

根据中国兽药典荆防败毒散的组方,经现代中药提取技术配制而成荆防败毒口服液,分别用低剂量(0.25mL/L)、中剂量(0.5mL/L)和高剂量(0.75mL/L)对低致病性禽流感病毒(H9N2亚型)攻毒后具有明显临床症状的三组试验鸡群连续口服用药5d,阳性对... 根据中国兽药典荆防败毒散的组方,经现代中药提取技术配制而成荆防败毒口服液,分别用低剂量(0.25mL/L)、中剂量(0.5mL/L)和高剂量(0.75mL/L)对低致病性禽流感病毒(H9N2亚型)攻毒后具有明显临床症状的三组试验鸡群连续口服用药5d,阳性对照组和阴性对照组不用药。结果表明中等剂量和高剂量组对病鸡有显著的治愈作用,由此证实,荆防败毒口服液对低致病性禽流感具有一定的抗病毒作用。 展开更多

关键词 荆防败毒散 荆防败毒口服液 禽流感病毒(h9n2亚型) 抗病毒作用

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浙江省人禽流感病毒Zhejiang／16／2006株的基因特性分析

8

作者 卢亦愚 严菊英 +6 位作者 徐昌平 茅海燕 冯燕 陈寅 李榛 李敏红 史雯 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期351-355,共5页

目的分析浙江省首例报道的人禽流感H5N1病毒株A／Zhejiang／16／2006的基因特性与系统进化关系。方法对A/zhejiang/16／2006病毒株的全序列8个基因片段作序列测定，并与国内外相关病毒株进行同源性与系统进化比较。结果A／Zhejiang／16... 目的分析浙江省首例报道的人禽流感H5N1病毒株A／Zhejiang／16／2006的基因特性与系统进化关系。方法对A/zhejiang/16／2006病毒株的全序列8个基因片段作序列测定，并与国内外相关病毒株进行同源性与系统进化比较。结果A／Zhejiang／16／2006的HA序列，与周边国家和地区的H5N1病毒株之间存在11个氨基酸的差异，但这些差异并未影响到相关糖基化位点的稳定；在NA区，1997年以后的毒株均缺少第49～68位的20个氨基酸。总体上中国大陆近年H5N1毒株的8个基因片段与周边国家和地区毒株相比形成另一个分支，并与1996—1997年香港及广东的H5N1毒株之间存在较大差异，但有个别毒株的基因片段在系统进化树上远离当前的毒株而更接近1997年的病毒株。结论A／Zhejiang／16／2006与中国大陆近年的病毒株自成一个体系，与周边国家和地区的H5N1病毒株之间存在一定差异。 展开更多

关键词 人禽流感病毒(h5n1) 基因特性 A/浙江/16/2006

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国外家禽快讯

9

《养禽与禽病防治》 北大核心 2005年第7期44-45,共2页

关键词 肉质 生肉 熟肉 微量元素 维生素B 番鸭 禽流感病毒株h5n7 肠炎沙门氏杆菌Ⅰ型菌毛 紫花苜蓿 蛋鸡 饲料

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金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2作用研究 被引量：2

10

作者 张美义 何家靖 +7 位作者 杨子峰 杨兆丽 杨家庆 詹利之 曾庆慕 冯丽玲 李国桥 朱宇同 《广州中医药大学学报》 CAS 2019年第7期1064-1068,共5页

【目的】探讨金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2的作用。【方法】分别以甲型H3N2流感病毒与禽流感病毒H9N2感染小鼠为模型,以小鼠肺指数及肺指数抑制率为评价指标,考察金翘片抗甲型H3N2流感病毒及抗禽流感病毒H9N2的作用,... 【目的】探讨金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2的作用。【方法】分别以甲型H3N2流感病毒与禽流感病毒H9N2感染小鼠为模型,以小鼠肺指数及肺指数抑制率为评价指标,考察金翘片抗甲型H3N2流感病毒及抗禽流感病毒H9N2的作用,并观察金翘片的解热、镇痛、抗炎作用。【结果】金翘片具有明显的抑制甲型H3N2流感病毒致肺病变作用(P <0.05或P <0.01),抑制率随剂量增大而增大,呈量效关系;同时也对禽流感病毒H9N2感染鼠肺病变表现出明显的抑制作用(P<0.01)。并具有显著的解热、镇痛、抗炎作用。【结论】金翘片在体内具有显著的抗甲型H3N2流感病毒、抗禽流感病毒H9N2及解热、镇痛、抗炎作用。 展开更多

关键词 金翘片 甲型h3n2流感病毒 禽流感病毒h9n2 疾病模型 动物 小鼠 大鼠

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深圳市不同人群和鸡群感染禽流感病毒H9N2亚型状况研究 被引量：3

11

作者 何建凡 程小雯 +2 位作者 吕星 吴春利 逯建华 《中国热带医学》 CAS 2005年第6期1171-1172,1194,共3页

目的分析禽流感病毒H9N2亚型毒株在深圳市不同人群和鸡群中的感染状况。方法采用常规的鸡胚双腔法分离流感病毒;采用红细胞凝集抑制试验(HI)和中和试验测定流感病毒抗体。结果从深圳市农贸市场300只鸡只样本中分离到27株H9N2亚型流感病... 目的分析禽流感病毒H9N2亚型毒株在深圳市不同人群和鸡群中的感染状况。方法采用常规的鸡胚双腔法分离流感病毒;采用红细胞凝集抑制试验(HI)和中和试验测定流感病毒抗体。结果从深圳市农贸市场300只鸡只样本中分离到27株H9N2亚型流感病毒,其抗体阳性率为7%,但未能从人群中分离到H9N2亚型流感病毒。人群血清中其抗体阳性率与职业高度相关,与鸡只密切接触的人群明显高于非密切接触的人群。结论禽流感病毒H9N2亚型对人群和鸡群均易感,可通过近距离的密切接触传播;推测人所感染的H9N2可能主要来源于鸡只等家禽。 展开更多

关键词 人群 鸡只 禽流感病毒h9n2亚型 抗体

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禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达 被引量：2

12

作者 张烨 于在江 +5 位作者 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期33-38,共6页

目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法:在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表... 目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法:在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMETA上,构建了重组表达质粒pMETA/HA(52～1545bp),pMETA/NA(121～1254bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果:重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2HA、NA基因序列,为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒h9n2 血凝素 神经氨酸酶 真核酵母表达

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禽流感病毒H9N2河北分离株HA和NA基因的遗传进化分析 被引量：2

13

作者 田勇 郑雪花 张瑞华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期74-77,共4页

为了从分子水平上研究禽流感病毒H9N2河北分离株及其与经典H9N2参考毒株基因的相应序列的同源性和遗传进化关系,试验选用2008年分离自河北省张家口市某鸡场的蛋鸡H9N2,采用RT-PCR分别扩增分离株HA和NA基因片段cDNA,并对所得序列进行同... 为了从分子水平上研究禽流感病毒H9N2河北分离株及其与经典H9N2参考毒株基因的相应序列的同源性和遗传进化关系,试验选用2008年分离自河北省张家口市某鸡场的蛋鸡H9N2,采用RT-PCR分别扩增分离株HA和NA基因片段cDNA,并对所得序列进行同源性比较和遗传进化分析。结果表明:与经典参考毒株A/Duck/HongKong/G1/97、A/Duck/HongKong/Y439/97、A/Duck/HongKong/Y280/97和A/Chicken/Beijing/1/94之间核苷酸、氨基酸同源性分别为89.7%～97.2%、88.5%～96%和91.0%～95.8%、89.8%～96.0%。禽流感病毒H9N2河北分离株属于欧亚谱系中的类Y280-like分支,与中国最早的分离株A/Chicken/Beijing/1/94相距较远。说明禽流感病毒H9亚型随着流行时间而发生了遗传分化。 展开更多

关键词 禽流感病毒h9n2 hA基因 nA基因 进化分析

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中草药添加剂对禽流感病毒H9 N2感染肉鸡的保护试验

14

作者 许家荣 丁桂莲 +5 位作者 崔盼娣 林海燕 徐彦文 王淑彩 李玉峰 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2006年第10期43-45,共3页

为了了解中草药添加剂“克侵灵”对禽流感(AIV)病毒H9N2感染肉鸡的保护效果,将1日龄AA鸡320羽随机分成不感染对照组、感染对照组、疫苗对照组、西药对照组、0.1%“克侵灵”组、0.2%“克侵灵”组、0.1%“克侵灵”+疫苗组、0.2%“克侵灵”... 为了了解中草药添加剂“克侵灵”对禽流感(AIV)病毒H9N2感染肉鸡的保护效果,将1日龄AA鸡320羽随机分成不感染对照组、感染对照组、疫苗对照组、西药对照组、0.1%“克侵灵”组、0.2%“克侵灵”组、0.1%“克侵灵”+疫苗组、0.2%“克侵灵”+疫苗组。结果表明:“克侵灵”能阻止AIV H9N2的水平传播,提高鸡抵抗AIV H9N2攻击的能力,并能显著增加鸡的的体重。 展开更多

关键词 中草药添加剂 肉鸡 禽流感病毒h9n2 免疫能力 生产性能

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禽流感病毒H5N1的重组酶介导检测方法学研究 被引量：1

15

作者 陈淑丹 廖静 +5 位作者 王玲 罗鹏 郭利川 郑伟 吴忠华 应清界 《中国口岸科学技术》 2021年第3期4-9,共6页

采用逆转录-重组酶介导核酸扩增技术(Reverse Transcription Recombinase-aided amplification,RT-RAA)建立检测禽流感病毒H5N1的快速方法。根据禽流感病毒H5N1保守序列设计引物及探针,将H5N1 RNA逆转录为cDNA,然后以cDNA作模板,扩增检... 采用逆转录-重组酶介导核酸扩增技术(Reverse Transcription Recombinase-aided amplification,RT-RAA)建立检测禽流感病毒H5N1的快速方法。根据禽流感病毒H5N1保守序列设计引物及探针,将H5N1 RNA逆转录为cDNA,然后以cDNA作模板,扩增检测病毒核酸序列。本研究构建了带有H5N1核酸序列的质粒,以此为模板检测不同浓度的质粒,分析该方法的灵敏度,对已知样本进行检测来验证方法的特异性。设计的H5N1特异性引物和探针,能在39℃恒温下,10~30 min可有效扩增出相应病毒的核酸,与其他流感病毒无交叉反应;对质粒的检测灵敏度可达10拷贝。建立的RT-RAA检测禽流感病毒H5N1方法灵敏度和特异性均较高,且该方法操作简单,适用于禽流感病毒H5N1的快速检测。 展开更多

关键词 禽流感病毒h5n1 逆转录-重组酶介导核酸扩增技术(RT-RAA) 分子检测

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抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在中国仓鼠卵巢细胞中的表达 被引量：1

16

作者 李存 张宝中 +10 位作者 安小平 米志强 刘大斌 姜焕焕 潘博 王盛 陈斌 黄芬 王娟 王晓娜 童贻刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期219-225,共7页

分泌型IgA(SIgA)在机体的粘膜免疫中具有重要作用,在外分泌道中比单体IgA和IgG抗体具有更好的抗感染活性。为了表达抗禽流感病毒H5N1人-鼠嵌合分泌型IgA抗体,首先以本室先前构建的稳定表达IgA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系为基础,共转... 分泌型IgA(SIgA)在机体的粘膜免疫中具有重要作用,在外分泌道中比单体IgA和IgG抗体具有更好的抗感染活性。为了表达抗禽流感病毒H5N1人-鼠嵌合分泌型IgA抗体,首先以本室先前构建的稳定表达IgA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系为基础,共转染分泌片和J链表达质粒,然后用抗生素Zeocin选择阳性克隆细胞,利用倍比稀释的方法筛选分泌SIgA的单克隆细胞,通过Western blotting分析培养上清中SIgA的表达情况。结果表明,在CHO细胞中成功表达了SIgA抗体,上述研究为研制分泌型IgA抗体制剂奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒h5n1 WESTERn BLOTTInG SIgA抗体

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禽流感病毒分离鉴定及其NA基因克隆分析 被引量：1

17

作者 金洪涛 夏志平 +2 位作者 王泽 连海 孙艳永 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第4期16-19,共4页

将疑似禽流感病死鸡病料组织研磨液接种SPF鸡胚分离病毒,尿囊分离毒经电镜观察后,应用特异性RT-PCR方法和血凝及血凝抑制试验进行分型检测,同时对核蛋白全长基因进行扩增测序分析。通过血凝及血凝抑制试验初步证实分离的禽流感病毒为H5... 将疑似禽流感病死鸡病料组织研磨液接种SPF鸡胚分离病毒,尿囊分离毒经电镜观察后,应用特异性RT-PCR方法和血凝及血凝抑制试验进行分型检测,同时对核蛋白全长基因进行扩增测序分析。通过血凝及血凝抑制试验初步证实分离的禽流感病毒为H5亚型,然后对分离株HA基因和NA基因进行RT-PCR分析,确定该分离株禽流感病毒为H5N1亚型。通过NA全基因扩增测序、Blast分析显示该分离株NA基因序列与已发表的毒株基因序列(EU429747)同源性为97%,但基因3′端发生明显变异。 展开更多

关键词 禽流感病毒h5n1 分离 鉴定 nA基因 hA基因

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中医对禽流感病毒H_5N_1变异的独特认知模式值得研究 被引量：1

18

作者 苏云放 《中医研究》 2006年第10期1-4,共4页

关键词 禽流感病毒h5n1 认知模式

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禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶因在大肠杆菌中的表达

19

作者 张烨 于在江 +5 位作者 辛丽 陈永坤 唐启慧 陈禹保 陈清轩 舒跃龙 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期881-887,共7页

克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重... 克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短)、pET32a(+)/NA(截短)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2 HA、NA基因序列。为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒h9n2 血凝素 神经氨酸酶 克隆表达

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禽流感病毒H5N1血凝素基因适应性进化过程中的关键位点突变规律研究

20

作者 彭小川 靳远 +5 位作者 胡明达 周江林 周静 岳俊杰 任洪广 梁龙 《生物技术通讯》 CAS 2019年第1期1-9,共9页

目的:寻找导致禽流感病毒H5N1血凝素(HA)适应性进化的关键突变,建立氨基酸突变评价体系,对突变作用进行评估,印证它们与病毒适应性进化的关联性。方法:计算株频率和枝频率,寻找标记分枝,向根结点回溯寻找HA进化路径上的氨基酸突变。计... 目的:寻找导致禽流感病毒H5N1血凝素(HA)适应性进化的关键突变,建立氨基酸突变评价体系,对突变作用进行评估,印证它们与病毒适应性进化的关联性。方法:计算株频率和枝频率,寻找标记分枝,向根结点回溯寻找HA进化路径上的氨基酸突变。计算各突变位点氨基酸的频率变化、有效变换及高频次突变,基于以上几个因素建立突变评价体系。结果:建立了大规模自动化寻找突变的方法,计算得到HA进化过程中的氨基酸突变435个,通过氨基酸频率图表分析这些突变可以很好地反映病毒适应性进化过程,其中79个突变是有效变换,发生的位点为正选择位点,且多数位点落在HA抗原表位上;29个突变是高频次突变,其中多数也为有效变换,因而与病毒适应性进化密切相关。结论:大规模自动化寻找突变的方法可靠,建立的突变评价体系准确性高,找到的关键突变及位点对实验有很好的指导意义。 展开更多

关键词 禽流感病毒h5n1 血凝素 适应性进化 关键突变 氨基酸频率 有效变换 高频次突变

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