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毛木耳漆酶纯化及其部分漆酶特性的研究 被引量:25
1
作者 杨建明 张小敏 +4 位作者 邢增涛 陈明杰 曹晖 谭琦 潘迎捷 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期61-70,共10页
对毛木耳AuriculariapolytrichaAP4的粗酶液进行PAGE电泳后发现含有三种漆酶同工酶,并且通过运用NativeSDS-PAGE获得三种漆酶的分子量大小分别约为:LacA(110kD);LacB(84kD);LacC(65kD)。对漆酶粗酶液通过硫酸铵分级沉淀和离子交换柱层... 对毛木耳AuriculariapolytrichaAP4的粗酶液进行PAGE电泳后发现含有三种漆酶同工酶,并且通过运用NativeSDS-PAGE获得三种漆酶的分子量大小分别约为:LacA(110kD);LacB(84kD);LacC(65kD)。对漆酶粗酶液通过硫酸铵分级沉淀和离子交换柱层析进行纯化,用SDS-PAGE证明获得纯化的单一漆酶LacB。LacB漆酶的反应的最适温度为30℃,最适pH为3.0。此酶氧化ABTS的Km值为6.64×10-mmol/L,金属离子对酶活的影响很大,其中5Ca2+,Mg2+,Zn2+,Na2+,Ag2+对漆酶LacB有明显的激活作用;Co2+,Hg2+,Fe3+,Fe2+,Ba2+等对酶活有明显的抑制作用。LacB和其它真菌漆酶一样具有底物专一性不强的特点,并且LacB对RB亮兰染料有很好的脱色作用。 展开更多
关键词 真菌漆酶 纯化 最适PH 最适温度 酶活 PAGE电泳 SDS-PAGE 离子交换柱层析 抑制作用 激活作用
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红树林放线菌产抗菌活性物质的分离纯化研究 被引量:19
2
作者 廖文彬 鲍时翔 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第6期376-380,共5页
对红树林放线菌产生的抑菌活性物质进行了分离提取 ,采用的方法为有机溶剂萃取法、酸提取法、离子交换柱层析、大孔吸附树脂柱层析等 ,获得了两个具有抑菌活性的组分 ,经HPLC分析两组分均为纯物质 。
关键词 萃取 离子交换柱层析 大孔吸附树脂柱层析
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Biocontrol Efficiency of Bacillus subtilis SL-13 and Characterization of an Antifungal Chitinase 被引量:14
3
作者 刘燕 陶晶 +3 位作者 阎豫君 李彬 李晖 李春 《Chinese Journal of Chemical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2011年第1期128-134,共7页
The seed germination and tomato seedling tests showed that Bacillus subtilis SL-13 could promote the sprouting and seedling growth of tomato.The fresh and dry weight of tomato seedlings increased 42.86%and 18.75%,resp... The seed germination and tomato seedling tests showed that Bacillus subtilis SL-13 could promote the sprouting and seedling growth of tomato.The fresh and dry weight of tomato seedlings increased 42.86%and 18.75%,respectively.The control efficacies of the SL-13 to tomato Rhizoctonia rot were 20.65%and 35.23%in the greenhouse and field,respectively.The growth of the plant-pathogenic fungus Rhizoctonia solani was considerably inhibited in the presence of the strain SL-13 culture supernatant.The main antifungal protein was detected to be chitinase through vitro assay.The chitinase was purified with DEAE-Sepharose fast flow ion exchange column chromatography and Sephadex G-75 gel filtration for further characterization.The optimal pH and temperature for the chitinase activity were 7.0 and 50°C,respectively.It was demonstrated that the enzyme was stable at pH 5-9 and 40-60°C.70%of the enzyme activity was retained when incubated at 121°C and 0.11 MPa for 20 min,and the enzyme was not sensitive to protease K and ultraviolet radiation.Thus it is suitable for effective biological control in relatively unstable environment. 展开更多
关键词 Bacillus subtilis GROWTH-PROMOTING diseases control antifungal chitinase purification Rhizoctonia solani
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酸乳中乳酸菌胞外多糖的分离与纯化 被引量:9
4
作者 李全阳 夏文水 +2 位作者 张进山 孙景珠 张军鹏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期139-141,共3页
对酸乳中的乳酸菌胞外多糖采用蛋白酶水解、离心、乙醇沉淀进行初步分离提取,进一步采用三氯乙酸法去除蛋白,再经过透析、超滤、DEAE-SepharoseCL6B离子交换柱层析和SepharoseCL2B凝胶柱层析使多糖得到纯化。最后得到一种纯化样品EPS03-... 对酸乳中的乳酸菌胞外多糖采用蛋白酶水解、离心、乙醇沉淀进行初步分离提取,进一步采用三氯乙酸法去除蛋白,再经过透析、超滤、DEAE-SepharoseCL6B离子交换柱层析和SepharoseCL2B凝胶柱层析使多糖得到纯化。最后得到一种纯化样品EPS03-1gm,通过HPLC和凝胶柱层析鉴定,EPS03-1gm分子大小和所带电荷都表现出较好的均一性,达到了进行化学结构鉴定的纯度要求。 展开更多
关键词 乳酸菌 胞外多糖 离子交换柱层析 凝胶柱层析 HPLC
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海栖热袍菌极端耐热木聚糖酶B的提纯 被引量:8
5
作者 江正强 李里特 +1 位作者 林清 Mohammad Mainul Ahsan 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期32-37,共6页
克隆并在大肠杆菌中表达的海栖热袍菌的 xyn B基因 ,其表达产物木聚糖酶 B的 C 末端带有 6×His标签 ,研究了这种基因重组酶的提纯方法。通过对粗酶提取液的热变性处理 ,Ni NTA亲和柱层析和离子柱层析 ,最终得到了电泳纯的木聚糖酶... 克隆并在大肠杆菌中表达的海栖热袍菌的 xyn B基因 ,其表达产物木聚糖酶 B的 C 末端带有 6×His标签 ,研究了这种基因重组酶的提纯方法。通过对粗酶提取液的热变性处理 ,Ni NTA亲和柱层析和离子柱层析 ,最终得到了电泳纯的木聚糖酶 B,提纯倍数 4 4.4 ,得率 11。SDS PAGE法测定木聚糖酶 B的相对分子质量为 4 2 ku,与理论推算值 4 2 展开更多
关键词 海栖热袍菌 耐热木聚糖酶B 热处理 离子交换柱层析 提纯
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中药土鳖虫溶栓成分的分离纯化研究 被引量:9
6
作者 王淑敏 赵学良 +5 位作者 王本祥 周秋丽 刘忠英 安汝国 刘志强 刘淑莹 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1385-1388,共4页
对土鳖虫水浸醇沉提取物2号样品进行了离子交换柱层析,得组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。实验结果表明,组分Ⅲ的溶栓活性明显高于组分Ⅰ和组分Ⅱ,其蛋白质含量为88.9%,分子量约为38,018,效价为313 UK/mg,比活力为352 UK/mg蛋白。将组分Ⅲ再进行凝胶过... 对土鳖虫水浸醇沉提取物2号样品进行了离子交换柱层析,得组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。实验结果表明,组分Ⅲ的溶栓活性明显高于组分Ⅰ和组分Ⅱ,其蛋白质含量为88.9%,分子量约为38,018,效价为313 UK/mg,比活力为352 UK/mg蛋白。将组分Ⅲ再进行凝胶过滤柱层析,得组分Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ。组分Ⅵ的生物活性高于组分Ⅳ和组分Ⅴ,蛋白质含量为89.3%,电泳呈现两条带,分子量约为34,623和39,811,效价为77 UK/mg,比活力为86 UK/mg蛋白。将组分Ⅵ进行反相高效液相色谱柱层析,收集保留时间为17 m in的洗脱峰,得到土鳖虫纯蛋白质,呈白色絮状,极易溶于水。再一次用反相高效液相色谱检查其纯度,保留时间为17.073 m in,无杂质峰。纤溶活性实验结果表明,组分Ⅵ既有直接降解纤维蛋白的作用,同时也有纤溶酶原激活剂样作用。 展开更多
关键词 土鳖虫 溶栓成分 分离纯化 溶栓活性 反相高效液相色谱 离子交换柱层析 蛋白质含量 纤溶酶原激活剂 成分 中药
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圆斑蝰蛇泰国亚种(Vipera russe lli siamensis)蛇毒凝血因子激活剂的纯化及部分特性研究 被引量:9
7
作者 杨丽娟 刘广芬 王晴川 《福建医科大学学报》 2002年第3期242-246,共5页
目的 从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒中分离纯化凝血 因子 (F )激活剂并研究其部分特性。 方法 采用离子交换柱层析和凝胶过滤等方法进行分离纯化 ,以血液凝固时间及发色底物 (S- 2 2 2 2 )进行活性鉴定和温度、p H值、蛋白酶抑制剂对活性... 目的 从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒中分离纯化凝血 因子 (F )激活剂并研究其部分特性。 方法 采用离子交换柱层析和凝胶过滤等方法进行分离纯化 ,以血液凝固时间及发色底物 (S- 2 2 2 2 )进行活性鉴定和温度、p H值、蛋白酶抑制剂对活性的影响 ,SDS- PAGE进行分子量、等电点及纯度测定 ,苯酚 -硫酸法及间苯二酚 -盐酸法测定糖含量。 结果 所得促凝组分 1 能特异性地活化牛 F ,从而水解 S- 2 2 2 2酰胺键。SDS- PAGE呈现单一蛋白带 ,分子量为 6 1.1± 1.5 k D(还原 ) ,6 0 .4± 1.9k D(非还原 )。等电点为 p H=8.0 0± 0 .0 6。含中性己糖 12 .4 %±0 .5 % ,唾液酸 0 .12 %± 0 .0 2 %。在 5 0℃以下稳定 ,最适 p H为 7.0~ 8.2。可被金属蛋白酶抑制剂 EDTA- Na2 完全抑制 ,二硫苏糖醇 (DTT)及 L -半胱氨酸部分抑制 ,不受胰蛋白酶抑制剂抑肽酶抑制。 结论 从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒分离纯化的 F 激活剂是一种碱性糖蛋白 ,属于 Ca2 + 依赖性的金属蛋白酶。 展开更多
关键词 圆斑蝰蛇 泰国亚种 凝血X因子激活剂 钙调蛋白 离子交换柱层析 凝胶过滤 金属蛋白酶
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桔梗多糖的分离纯化与含量测定 被引量:11
8
作者 贾林 陆金健 +3 位作者 卢德赵 施佳杰 周文雅 沃兴德 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第17期83-86,共4页
利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过DEAE-Sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行... 利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过DEAE-Sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行纯化鉴定。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝染色法测定纯化后各组分的糖和蛋白质含量。试验结果表明,从桔梗粗多糖PPS80中分离得到2个均一性组分PPS80-I和PPS80-Ⅱ,糖含量分别为90.32%和86.75%,蛋白质含量分别为0.48%和1.96%。该试验首次采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析结合Sephadex G-75凝胶柱层析有效分离纯化出桔梗多糖均一性组分,为桔梗多糖的进一步研究提供基础。 展开更多
关键词 多糖 离子交换柱层析 凝胶层析 DEAE-Sepharose FF SEPHADEX G-75
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鸡SIgA的纯化及兔抗鸡SIgA抗体的制备 被引量:8
9
作者 周华波 房慧伶 +2 位作者 李红蕾 吴欣欣 王晓丽 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2006年第4期290-293,共4页
采用改良硫酸铵盐析法从鸡胆汁中分离鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA).Macro-prep High Q阴离子交换柱层析提纯,经二次过柱后获得的鸡SIgA浓度达22mg/mL。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明,重链分子质量为63~64ku,轻链为26~28ku,J链... 采用改良硫酸铵盐析法从鸡胆汁中分离鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA).Macro-prep High Q阴离子交换柱层析提纯,经二次过柱后获得的鸡SIgA浓度达22mg/mL。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明,重链分子质量为63~64ku,轻链为26~28ku,J链约16ku。用纯化的鸡SIgA免疫兔,所得的抗血清经双向琼脂扩散,证明兔抗鸡SIgA血清效价达1:128。 展开更多
关键词 分泌型免疫球蛋白A 离子交换柱层析 提纯 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
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猪凝血酶的分离纯化和部分性质研究 被引量:10
10
作者 马中良 史永昶 +2 位作者 姜涌明 李艳利 赵国俊 《江苏农学院学报》 CSCD 1998年第4期89-92,共4页
以猪血为材料,采用等电点沉淀和724树脂离子交换柱层析分离提纯,得凝血酶原,经CaCl2激活后,通过DEAE-纤维素离子交换柱层析,获得比活为1200IU/mg的凝血酶制剂,其收率为32.1%。研究发现,NaCl浓度... 以猪血为材料,采用等电点沉淀和724树脂离子交换柱层析分离提纯,得凝血酶原,经CaCl2激活后,通过DEAE-纤维素离子交换柱层析,获得比活为1200IU/mg的凝血酶制剂,其收率为32.1%。研究发现,NaCl浓度对猪凝血酶活力有较大的影响,加1mol/LNaCl于凝血酶溶液中,室温(25℃)放置3h后,活力丧失50%。猪凝血酶的最适温度和最适pH分别是37℃和pH7.0。猪凝血酶在pH7.0、40℃下放置27h,活力丧失84%。通过SephadexG-100凝胶层析,测出猪凝血酶的分子量为30kd。 展开更多
关键词 猪凝血酶 纯化 激活 离子交换柱层析
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富士苹果中膜结合态多酚氧化酶分离纯化方法 被引量:8
11
作者 刘芳 甘芝霖 +2 位作者 赵金红 温馨 倪元颖 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期193-197,246,共6页
以烟台红富士为原料,研究膜结合态多酚氧化酶(m PPO)的分离纯化条件,采用非离子型去污剂结合热诱导方法粗提,硫酸铵分级沉淀,DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析方法对m PPO进行纯化,并对其进行串联质谱(LC-MS/MS)分析鉴定。... 以烟台红富士为原料,研究膜结合态多酚氧化酶(m PPO)的分离纯化条件,采用非离子型去污剂结合热诱导方法粗提,硫酸铵分级沉淀,DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析方法对m PPO进行纯化,并对其进行串联质谱(LC-MS/MS)分析鉴定。结果表明m PPO提取纯化最佳条件为:超声提取10 min,50%~80%饱和度硫酸铵沉淀,0.1 mol/L Na Cl梯度洗脱。纯化后的m PPO纯度提高了64.30倍,比活力高达387 032.97 U/mg。纯化后的m PPO经SDS-PAGE和Native-PAGE分析均为单一蛋白带,且为亚基分子量67 k Da的二聚体。经串联质谱分析及蛋白数据库鉴定此纯化蛋白为多酚氧化酶。 展开更多
关键词 富士苹果 多酚氧化酶 分离纯化 膜结合态 离子交换柱层析 串联质谱
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蝾螺(Turbo cornutus Solander)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究 被引量:5
12
作者 林建城 陈清西 +1 位作者 李少伟 赵红 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期697-701,共5页
以蝾螺内脏为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、SephadexG 200分子筛柱层析和两次DEAE SephadexA 50离子交换柱层析纯化,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯的N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶酶制剂.纯酶的比活力为1448U·mg-1.酶的紫外特征吸... 以蝾螺内脏为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、SephadexG 200分子筛柱层析和两次DEAE SephadexA 50离子交换柱层析纯化,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯的N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶酶制剂.纯酶的比活力为1448U·mg-1.酶的紫外特征吸收峰在275nm处,内源荧光发射峰在340nm处.以对 硝基苯 N 乙酰 β D 氨基葡萄糖为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学,结果表明:酶的最适pH为4.5,最适温度为45℃.该酶在pH3.5~6.0区域较稳定,而在pH>7能很快失活;在40℃以下处理30min,酶活力保持稳定,高于40℃,酶稳定性较差,很快失活.酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为3.13mmol·L-1,最大反应速度Vm为17.68μmol·L-1·min-1. 展开更多
关键词 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 初步研究 离子交换柱层析 特征吸收峰 分离纯化 内脏 底物 米氏常数 内源荧光 最适PH
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香菇子实体中单核苷类成分研究 被引量:7
13
作者 唐庆九 王淑蕾 +4 位作者 王晨光 刘艳芳 张忠 周帅 梁敬钰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期283-286,共4页
以离子交换柱层析为主要手段从香菇子实体的水提物中分离得到6个单核苷类化合物,经EI-MS、~1H-NMR和^(13)C-NMR鉴定分析,这6个化合物分别是:尿苷、尿嘧啶、鸟苷、香菇嘌呤、腺苷和腺嘌呤,其中腺嘌呤为首次从香菇中分离得到,香菇嘌呤的... 以离子交换柱层析为主要手段从香菇子实体的水提物中分离得到6个单核苷类化合物,经EI-MS、~1H-NMR和^(13)C-NMR鉴定分析,这6个化合物分别是:尿苷、尿嘧啶、鸟苷、香菇嘌呤、腺苷和腺嘌呤,其中腺嘌呤为首次从香菇中分离得到,香菇嘌呤的核磁数据首次得到全面归属。 展开更多
关键词 香菇 单核苷类化合物 离子交换柱层析 腺嘌呤 香菇嘌呤
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大蓟多糖提取分离及含量测定 被引量:6
14
作者 吴彦 魏和平 《光谱实验室》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期98-101,共4页
用水提-醇沉法从大蓟中提取多糖,脱脂、去蛋白,经冷冻干燥后得到粗多糖。通过苯酚-硫酸法测定糖的含量,粗多糖得率为6.5%。再采用DEAE-纤维素离子交换柱层析进一步分离纯化,得到5个次级组分DJ1,DJ2,DJ3,DJ4和DJ5。其中得率最高的是DJ2组... 用水提-醇沉法从大蓟中提取多糖,脱脂、去蛋白,经冷冻干燥后得到粗多糖。通过苯酚-硫酸法测定糖的含量,粗多糖得率为6.5%。再采用DEAE-纤维素离子交换柱层析进一步分离纯化,得到5个次级组分DJ1,DJ2,DJ3,DJ4和DJ5。其中得率最高的是DJ2组分,为8.06‰。 展开更多
关键词 大蓟 多糖 提取 分离 离子交换柱层析
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白腐菌Phanerochaete sordida YK-624产锰过氧化物酶的生产及初步纯化 被引量:4
15
作者 谢慧芳 近藤隆一郎 李忠正 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 2003年第4期22-26,共5页
 利用白腐菌PhanerochaetesordidaYK 624(ATCC90872),采用Kirk液体培养基在富氧条件下进行振动培养,可得到锰过氧化物酶(MnP)活性较高和漆酶活性微量的酶液。该酶液通过超滤、透析、二乙氨基乙基琼脂糖凝胶(DEAE sepharoseCL 6B,phar...  利用白腐菌PhanerochaetesordidaYK 624(ATCC90872),采用Kirk液体培养基在富氧条件下进行振动培养,可得到锰过氧化物酶(MnP)活性较高和漆酶活性微量的酶液。该酶液通过超滤、透析、二乙氨基乙基琼脂糖凝胶(DEAE sepharoseCL 6B,pharmacia)离子交换柱层析的方法进行初步纯化后,得到比活性很高(1941.54IU/mg)的MnP酶液。漆酶活性和MnP活性比值的变化、SDS PAGE凝胶电泳试验和406nm附近的吸光值变化均表明,经离子交换柱层析后的YK1部分是主要的MnP,电泳试验同时表明纯化后的主要MnP的分子质量约为43kDa。经超滤、透析、离子交换柱层析纯化后得到的酶液YK1可用于进一步地研究及应用。 展开更多
关键词 白腐菌 锰过氧化物酶 纯化 液体培养 离子交换柱层析 木质素 生物降解 YK-624菌株
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有机溶剂对棉铃虫N-乙酰氨基葡糖苷酶活力的影响 被引量:5
16
作者 黄小红 陈清西 +1 位作者 王君 关雄 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第1期78-81,共4页
以棉铃虫为材料,经 (NH4 )2SO4 分级沉淀、SephadexG 200分子筛凝胶过滤柱层析和DEAE 32离子交换柱层析分离纯化,获得棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶酶制剂.研究几种有机溶剂对棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶 (EC3. 2. 1. 14)的活力与构象的影响.... 以棉铃虫为材料,经 (NH4 )2SO4 分级沉淀、SephadexG 200分子筛凝胶过滤柱层析和DEAE 32离子交换柱层析分离纯化,获得棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶酶制剂.研究几种有机溶剂对棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶 (EC3. 2. 1. 14)的活力与构象的影响.结果表明:甲醇、乙醇和乙二醇对酶有先扬后抑的作用,正丙醇和丙三醇对酶有失活作用.低含量的丙酮 (体积分数为 12. 5% )对酶有可逆失活作用,随着丙酮含量的提高,其酶促反应的动力学参数也随之改变,Vmax值降低,Kmapp值不变.在 278nm波长激发下,天然酶内源荧光在 339nm处有特征的荧光发射,其强度随着丙酮含量的上升而减弱,荧光发射峰也逐渐蓝移.这表明丙酮改变了酶的构象. 展开更多
关键词 葡糖苷 改变 含量 离子交换柱层析 影响 有机溶剂 天然 丙酮 氨基 甲醇
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工程菌酯酶B1的纯化及性质研究
17
作者 薛庆节 闫艳春 +3 位作者 姜红霞 刘萍萍 解秀萍 张洁 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第1期39-43,共5页
工程菌酯酶B1降解酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseCL 6B离子交换柱层析、SephadexG 1 5 0凝胶过滤 ,得到了分离纯化 ,SDS PAGE鉴定为单一组分。经 1 2 .5 %SDS PAGE法测得分子量约为 5 6KD ,提纯倍数为33.3,收率为 1 7.9%,比活力为... 工程菌酯酶B1降解酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseCL 6B离子交换柱层析、SephadexG 1 5 0凝胶过滤 ,得到了分离纯化 ,SDS PAGE鉴定为单一组分。经 1 2 .5 %SDS PAGE法测得分子量约为 5 6KD ,提纯倍数为33.3,收率为 1 7.9%,比活力为 74 .7U/mg。该酶的最佳作用条件是 37℃ ,pH =7.0 ,该酶作用于α 乙酸萘酯的Km为1 .35× 1 0 -3 mM ,Vmax为 2 .7× 1 0 4μ/ml。酶在pH6~ 9范围内较稳定 ,重金属Cu2 + 对该酶具有明显的促进作用 ,而SDS对酶具有抑制作用 ,对有机磷农药对硫磷 (1 6 0 5 )的降解率在 90min内达 91 .5 %。 展开更多
关键词 离子交换柱层析 药对 KD 抑制作用 纯化 SDS-PAGE法 有机磷农药 酯酶 降解率 作用条件
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重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性 被引量:4
18
作者 潘建华 彭颖 +1 位作者 郑昭暻 吕建新 《细胞生物学杂志》 CSCD 2006年第5期711-716,共6页
融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复... 融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复洗涤后,利用离子交换柱层析对包涵体进行柱上复性,结果表明离子交换层析柱上复性不仅能够获得可溶性的EGF-IL-18融合蛋白,而且产物同时得到纯化,纯度大于90%。复性的EGF-IL-18经分子筛进一步纯化后,体外实验证明具有促进人外周血单个核细胞(PBMC)IFN-g基因表达的能力。该方法简单、高效,为进一步开展EGF-IL-18的动物实验及其大量纯化制备打下基础。 展开更多
关键词 EGF-IL-18融合蛋白 包涵体 离子交换柱层析 上复性
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重阳木花粉过敏原的分离、纯化和鉴定 被引量:4
19
作者 姚敏 刘志刚 +1 位作者 孟光 孔小丽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第9期1036-1039,共4页
目的对重阳木花粉变应原蛋白进行分离、纯化和鉴定。方法采用Coca s液提取重阳木花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离粗提液蛋白质组分,并测定其分子质量;收集过敏患者血清,用Western blot法鉴定其变应... 目的对重阳木花粉变应原蛋白进行分离、纯化和鉴定。方法采用Coca s液提取重阳木花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离粗提液蛋白质组分,并测定其分子质量;收集过敏患者血清,用Western blot法鉴定其变应原成分;通过离子交换层析对重阳木花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果分离得到重阳木花粉18条蛋白带,其中分子质量为12和14 ku的是重阳木花粉的特异性变应原,通过离子交换柱层析方法纯化得到其相应的纯化蛋白。结论对重阳木花粉变应原进行了初步的分离、纯化和鉴定,为临床重阳木花粉过敏疾病的诊断和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 重阳木花粉 变应原 离子交换柱层析
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瘦肉型猪(PIC344)精液酸性磷酸酶部分性质研究 被引量:2
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作者 黄新河 冯兴 +5 位作者 刘鑫 李佳 张勇侠 国锦琳 肖舸 刘克武 《四川动物》 CSCD 北大核心 2005年第1期17-21,26,共6页
   用纱网滤掉瘦肉型猪 (PIC344) 新鲜精液中胶状物得原精液, 该原精液经硫酸铵分段盐析、DEAE Sepharose F F 离子交换柱层析、Sephacryl S 200 凝胶过滤后分离纯化到酸性磷酸酶 (Acid Phosphatase, 简称ACPase)。纯化倍数为22 78, ...    用纱网滤掉瘦肉型猪 (PIC344) 新鲜精液中胶状物得原精液, 该原精液经硫酸铵分段盐析、DEAE Sepharose F F 离子交换柱层析、Sephacryl S 200 凝胶过滤后分离纯化到酸性磷酸酶 (Acid Phosphatase, 简称ACPase)。纯化倍数为22 78, 酶液比活力为15 26U/mg蛋白。纯化酶液经非还原性SDS PAGE检测, 呈现单一蛋白着色带。测得该酶相对分子质量为52 3kD, 等电点为5 1, 米氏常数 (Km 值) 为3 08×10-3mol/L。测得该酶最适pH为3 6, 最适温度为52℃。ACPase在pH 3 5~6 0范围内稳定, 在40℃以下稳定, 50℃保温30min后酶活仍能保持59 2%。 展开更多
关键词 部分性 新鲜精液 酸性磷酸酶 离子交换柱层析 g蛋白 纯化 凝胶过滤 瘦肉型猪 纱网 胶状物
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