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NF1和p-ERK1/2蛋白在苯并芘联合脂多糖诱导的小鼠肺癌中的表达 被引量：2
1
作者 邵华 张怡 +2 位作者 黄丽 高敏 冯斐斐 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2019年第6期835-839,共5页
目的:探讨神经纤维瘤蛋白1(NF1.和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2.在苯并芘[(B(a)P)]联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺癌中的表达。方法:SPF级C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、B(a)p组、LPS组和B(a)p+LPS组。B(a)p+LPS组小鼠经气管滴... 目的:探讨神经纤维瘤蛋白1(NF1.和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2.在苯并芘[(B(a)P)]联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺癌中的表达。方法:SPF级C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、B(a)p组、LPS组和B(a)p+LPS组。B(a)p+LPS组小鼠经气管滴注50μL溶于三辛酸甘油酯中的B(a)p(1 mg/只),每周1次,连续4周后停止,此时计为第0周;于第3周经气管滴注50μL溶于生理盐水中的LPS(2.5μg/只),每3周1次,连续给予5次。B(a)p组和LPS组小鼠分别按相应的方式进行染毒,对照组小鼠经肺灌注等体积的三辛酸甘油酯和生理盐水。正常饲养至30周解剖观察小鼠肺癌发生情况,免疫组化法检测小鼠肺组织中NF1和p-ERK1/2蛋白的表达。结果:对照组和LPS组小鼠肺部未见肿瘤;与B(a)p组相比,B(a)p+LPS组小鼠的肿瘤形成率升高,平均肿瘤形成数增加(P<0.05)。与对照组相比,B(a)p+LPS组、B(a)p组肺癌组织中NF1蛋白表达降低,p-ERK 1/2蛋白表达升高(P<0.05);NF1与p-ERK1/2蛋白在B(a)P+LPS组相关系数为-0.771(P=0.015)。结论:LPS能够促进B(a)p诱导的小鼠肺癌发生,且NF1和p-ERK1/2参与了炎性相关肺癌的发生。 展开更多
关键词 神经纤维瘤蛋白1 细胞外信号调节激酶1/2 肺癌 小鼠
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神经纤维瘤蛋白1在胆囊癌中的机制研究
2
作者 张凌宵 金朝晖 +4 位作者 崔旭雅 邱世梅 董平 黄旲 刘颖斌 《中华消化外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期941-948,共8页
目的探讨神经纤维瘤蛋白1(NF1)在胆囊癌中的机制。方法采用实验研究方法。培养人胆囊癌细胞系GBC‑SD、NOZ、SGC996、EH‑GB1、ZJU0428,人胚肾细胞系293T,人宫颈癌细胞系HELA;构建免疫共沉淀实验所需的重组质粒mRFP‑YAP1^(FL)‑FLAG和eGFP‑... 目的探讨神经纤维瘤蛋白1(NF1)在胆囊癌中的机制。方法采用实验研究方法。培养人胆囊癌细胞系GBC‑SD、NOZ、SGC996、EH‑GB1、ZJU0428,人胚肾细胞系293T,人宫颈癌细胞系HELA;构建免疫共沉淀实验所需的重组质粒mRFP‑YAP1^(FL)‑FLAG和eGFP‑MYC‑NF1^(2650~2750)‑HA,体外纯化Yes相关蛋白1(YAP1)截断体蛋白和NF1融合蛋白。分别采用等温滴定量热实验、GST pull‑down实验、免疫共沉淀实验、免疫荧光和激光共聚焦检测NF1与YAP1的体内外相互作用,采用蛋白质免疫印迹法检测不同胆囊癌细胞系中NF1蛋白的表达水平。观察指标:(1)NF1与YAP1的体外相互作用。(2)NF1与YAP1的细胞内相互作用。(3)不同人胆囊癌细胞系中NF1蛋白的表达水平。结合解离常数由ITC200等温滴定量热仪自带软件输出,以x±s表示。计数资料以绝对值表示。结果(1)NF1与YAP1的体外相互作用。①等温滴定量热实验结果显示:PPQY肽段滴定体外纯化YAP1的第1个WW1结构域蛋白存在相互作用,结合解离常数为(0.42±0.06)mmol/L;PPQY肽段滴定体外纯化YAP1的162~275蛋白区段存在相互作用,结合解离常数为(0.69±0.14)mmol/L。②GST pull‑down实验结果显示:相对于GST蛋白和His‑Sumo‑YAP1 WW1反应体系,在GST‑PPQY融合蛋白与His‑Sumo‑YAP1^(WW1)反应体系的蛋白泳道中可以观察到目的蛋白His‑Sumo‑YAP1^(WW1);相对于GST蛋白和His‑Sumo‑YAP1^(WW2)反应体系,在GST‑PPQY融合蛋白与His‑Sumo‑YAP1^(WW2)反应体系的蛋白泳道中可以观察到目的蛋白His‑Sumo‑YAP1^(WW2)。(2)NF1与YAP1的细胞内相互作用。①免疫共沉淀实验结果显示:在使用FLAG凝胶珠孵育共转染mRFP‑YAP1 FL‑FLAG和eGFP‑MYC‑NF12650~2750‑HA的细胞裂解液中,观察到NF1蛋白的免疫印迹。②免疫荧光和激光共聚焦检测结果显示:在人胆囊癌细胞系NOZ的原位荧光中,YAP1和NF1荧光明显,主要定位于细胞质中。在人胆囊癌细胞系SGC 展开更多
关键词 胆道肿瘤 神经纤维瘤蛋白1 Yes相关蛋白1 机制 研究
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