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人脐血间充质干细胞体外扩增和向神经元样细胞定向诱导分化的研究 被引量:75
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作者 侯玲玲 曹华 +4 位作者 魏国荣 白慈贤 张涌 吴祖泽 裴雪涛 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期415-419,共5页
目的 探讨人脐血间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)的体外分离、纯化、扩增和向神经元样细胞的定向诱导分化条件。方法 无菌条件下采集正常人脐血 ,肝素抗凝 ,用相对密度为1.0 77的淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞 ,进而获得... 目的 探讨人脐血间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)的体外分离、纯化、扩增和向神经元样细胞的定向诱导分化条件。方法 无菌条件下采集正常人脐血 ,肝素抗凝 ,用相对密度为1.0 77的淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞 ,进而获得MSC。用MesencultTM 培养基进行纯化和扩增培养。用流式细胞仪检测MSC的表面标志。取扩增 2 ,5 ,8代的MSC分别向神经元样细胞诱导 ,免疫组化和组化法检测神经元样细胞特异性标志和结构。结果 脐血MSC每扩增一代 ,细胞数量增加约 2~ 3倍。 6 .6× 10 5个人脐血原代MSC在体外扩增 10代后获得 9.9× 10 8个细胞 ,扩增约 1.5× 10 3倍。流式细胞仪检测结果显示 ,脐血MSC不表达CD34 、CD1 1a和CD1 1b,强表达CD2 9,弱表达CD71 ,与骨髓MSC表面抗原特性一致。诱导后的细胞平均有 70 %左右呈现典型的神经元样表型 ,免疫组化法检测发现不同代数的MSC诱导后均表达神经丝蛋白 (neurofilament,NF)和神经元特异性烯醇化酶 (neuron specificenolase ,NSE) ;组织化学法检测可看到神经元特有结构尼氏体。结论 脐血MSC在体外有较强的扩增能力 ,能够向非间充质类细胞分化。 展开更多
关键词 流式细胞 细胞替代治疗 基因治疗 脐血 间充质干细胞 体外扩增 神经元细胞 定向诱导分化
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三七总皂甙诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:57
2
作者 撒亚莲 李海标 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期409-410,437,共3页
【目的】用三七总皂甙 (totalPanaxnotoginsengsaponins)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchy malstemcell,rMSC)分化为神经元样细胞。【方法】用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、... 【目的】用三七总皂甙 (totalPanaxnotoginsengsaponins)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchy malstemcell,rMSC)分化为神经元样细胞。【方法】用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化 ,选用第 5代后的间质干细胞进行诱导分化。用 10 μg/LbFGF预诱导 2 4h ,更换成含三七总皂甙的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组化SABC法鉴定神经丝蛋白 (NF M )、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白 (nestin)、微管联合蛋白 2 (MAP 2 )、生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。【结果】第5代间质干细胞形态达到均一 ,呈梭形。用三七总皂甙诱导 30min到 5h ,间质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起 ,形似神经细胞。免疫组化显示NF M、NSE、MAP 2、GAP 4 3、nestin表达阳性 ,而GFAP阴性。【结论】三七总皂甙可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 三七总皂甙 骨髓间质干细胞 分化 神经元细胞
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天麻诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究 被引量:31
3
作者 董晓先 刘金保 +1 位作者 董燕湘 肖庆忠 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期51-54,共4页
目的 :探讨天麻对体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的影响。方法 :通过贴壁法分离大鼠MSC ,体外扩增培养。中药天麻定向诱导分化为类神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原... 目的 :探讨天麻对体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的影响。方法 :通过贴壁法分离大鼠MSC ,体外扩增培养。中药天麻定向诱导分化为类神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志物神经原烯醇化酶 (NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白 (Nestin)。结果 :大鼠MSC可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。天麻诱导 2h后大部分可分化为神经元样细胞 ,出现胞体和突起 ,免疫细胞化学染色NSE、Nestin呈阳性 ,GFAP阴性。结论 :大鼠MSC可诱导分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 天麻 诱导 骨髓间质干细胞 神经元细胞 实验研究 中药
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多种中药成分诱导大鼠骨髓间质干细胞转变为神经元样细胞 被引量:32
4
作者 刘金保 董晓先 +4 位作者 董燕湘 何慧华 董伟华 梁仲培 肖庆忠 《中国药物与临床》 CAS 2003年第3期234-236,共3页
目的 体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞 (MSCs)分化为神经元样细胞。方法 通过贴壁法分离大鼠MSCs,体外扩增培养 ,流式细胞仪检测其表面抗原表达 ,中药成分定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学法检测神... 目的 体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞 (MSCs)分化为神经元样细胞。方法 通过贴壁法分离大鼠MSCs,体外扩增培养 ,流式细胞仪检测其表面抗原表达 ,中药成分定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志。结果 大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。流式细胞仪检测结果显示CD1 4、CD1 1α、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性 ,CD2 9、CD44、CD90、CD1 0 5、CD1 66呈阳性。黄芪、天麻、人参、当归、脑新舒、人参蜂王浆等多种中药诱导 1~ 3h后大部分MSCs转变为神经元样细胞 ,出现胞体和突起 ,免疫细胞化学染色神经元特异性烯醇酶 (NSE)、巢蛋白 (nestin)呈阳性 ,胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阴性。 展开更多
关键词 中药成分 诱导 大鼠 骨髓间质干细胞 神经元细胞
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当归诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:28
5
作者 刘金保 董晓先 +4 位作者 董燕湘 何慧华 董伟华 梁仲培 肖庆忠 《广东医学》 CAS CSCD 2003年第5期466-468,共3页
目的 研究当归体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化的作用。方法 通过贴壁法分离大鼠MSCs,体外扩增培养。MSC用 2 0 μl当归注射液 /ml含 10 %胎牛血清的L -DMEM为预诱导条件 ,预诱导 2 4h后用当归注射液 10 0 μl/ml不含胎... 目的 研究当归体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs)分化的作用。方法 通过贴壁法分离大鼠MSCs,体外扩增培养。MSC用 2 0 μl当归注射液 /ml含 10 %胎牛血清的L -DMEM为预诱导条件 ,预诱导 2 4h后用当归注射液 10 0 μl/ml不含胎牛血清的L -DMEM进行诱导。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学检测神经细胞特异性抗原标志。结果 大鼠骨髓间充质干细胞可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。当归诱导 3h后大部分MSCs转变为神经元样细胞 ,出现胞体和突起 ,免疫细胞化学染色NSE及nestin呈阳性、GFAP阴性。 展开更多
关键词 当归 诱导 骨髓 间充质干细胞 分化 神经元细胞
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黄连素诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:31
6
作者 项平 李海标 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期51-53,共3页
目的 :黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法 :用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第 5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化 ,用含 10 μg/L碱性细胞生长因子 (bFGF)的完全培养液预诱导 2 4... 目的 :黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法 :用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第 5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化 ,用含 10 μg/L碱性细胞生长因子 (bFGF)的完全培养液预诱导 2 4h ,后更换含黄连素的无血清DMEM诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元烯醇酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :大鼠骨髓间质干细胞体外扩增第 5代后细胞形态达到均一 ,成梭形。加黄连素诱导 1h -8h ,间质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起 ,形似神经细胞。免疫组化显示诱导的神经元样细胞NSE、NF表达阳性 ,GFAP阴性。结论 展开更多
关键词 黄连素 大鼠 骨髓间质干细胞 神经元细胞 细胞分化
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麝香组分诱导成年大鼠骨髓间质干细胞体外定向分化为神经元样细胞的能力 被引量:27
7
作者 肖庆忠 温冠媚 +4 位作者 李浩威 黄少华 张秀明 李艳 李树浓 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期405-408,F001,共5页
【目的】探讨麝香组分体外诱导成年大鼠骨髓间质干细胞 (adultratbonemarrowmesenchymalstemcells,rBMM SCs)定向分化为神经元样细胞的能力。【方法】分别采用含麝香多肽或麝香酮的L DMEM培养基体外定向诱导第 5代至 10代的rBMMSCs,并... 【目的】探讨麝香组分体外诱导成年大鼠骨髓间质干细胞 (adultratbonemarrowmesenchymalstemcells,rBMM SCs)定向分化为神经元样细胞的能力。【方法】分别采用含麝香多肽或麝香酮的L DMEM培养基体外定向诱导第 5代至 10代的rBMMSCs,并分别应用相差显微镜观察神经元样细胞和免疫细胞组化检测神经元样细胞所表达的神经干细胞特异性标志 (nestin)、神经元特异性标志 [神经元特异性烯醇化酶 (neuronspecificenolase ,NSE)和神经丝蛋白 (neurofilament ,NF) ]及星形胶质细胞特异性标志 [胶质纤维酸性蛋白 (gliafiberacidprotein ,GFAP) ],并进行神经元样细胞记数分析。【结果】成年大鼠BMMSCs在加入含麝香多肽的无血清L DMEM培养基诱导后 ,发现细胞胞体收缩 ,突起伸出 ,形似神经元 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。神经元样细胞记数分析发现 :rBMMSCs经过麝香多肽诱导后 ,NSE+ 神经元样细胞和NF H+ 神经元样细胞的比例分别高达 93 5和 88 2 %;而用含麝香酮的无血清L DMEM培养基却无上述变化。【结论】麝香多肽能在体外诱导rBMMSCs定向分化为神经元样细胞 ,而麝香酮却无此能力。 展开更多
关键词 麝香组分 大鼠 骨髓间质干细胞 体外定向 分化 神经元细胞 麝香多肽 麝香酮
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丹参素定向诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究 被引量:34
8
作者 余勤 罗依 +4 位作者 鄂艳 盛丽先 董勤 丁伟 郭莹 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期49-53,共5页
目的研究丹参素体外定向诱导骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)分化为神经元样细胞。方法利用Ficoll Paque液将骨髓细胞进行密度梯度离心和贴壁筛选分离出MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达。采用含丹参素的无血清... 目的研究丹参素体外定向诱导骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)分化为神经元样细胞。方法利用Ficoll Paque液将骨髓细胞进行密度梯度离心和贴壁筛选分离出MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达。采用含丹参素的无血清L DMEM诱导MSC分化为神经元样细胞 ,并且探讨丹参素不同浓度及不同作用时间对MSC诱导分化为神经元样细胞的影响。以免疫组化方法检测神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF M )、巢蛋白 (nestin)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果MSC在体外传代扩增后 ,流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD4 4、CD16 6表达阳性 ,CD14、CD34、CD4 5、HLA DR为阴性。丹参素诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ,呈典型的核周体形态 ,类似神经元 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF M、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。结论丹参素可以在体外诱导MSC分化为神经元样细胞 ,其诱导转化率与丹参素浓度和作用时间有关。 展开更多
关键词 丹参素 神经元细胞 骨髓间质干细胞 表达 分化 MSC NF 结论 目的 典型
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人脐带间充质干细胞体外扩增和向神经元样细胞定向诱导分化的研究 被引量:29
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作者 袁源 杨树源 +1 位作者 韩忠朝 张晓辉 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期230-236,共7页
目的探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)的体外分离、纯化、扩增和向神经元样细胞的定向诱导分化,以期为脐带MSCs的神经移植提供理论依据。方法无菌条件下收集剖宫产新生儿脐带,酶消化法获取MSCs,进行培养。用流式细胞仪检测MSCs的表面标志... 目的探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)的体外分离、纯化、扩增和向神经元样细胞的定向诱导分化,以期为脐带MSCs的神经移植提供理论依据。方法无菌条件下收集剖宫产新生儿脐带,酶消化法获取MSCs,进行培养。用流式细胞仪检测MSCs的表面标志。取扩增3,5,10代的MSCs分别向神经元样细胞诱导,用免疫组化和RT-PCR法检测神经元样细胞特异性标志。结果脐带富含MSCs,且脐带MSCs(UCMSCs)强表达CD13、29、CD44、CD105,弱表达CD106,不表达CD34、CD11a、CD14、CD33、CD45。神经条件培养基诱导后的细胞平均有70%左右呈现典型的神经元样表型。免疫组化法检测发现不同代数的MSCs经诱导后均表达nestin,NSE,NeuN,NF-M,弱表达GFAP。RT-PCR显示诱导后NSEmRNA表达增加。结论MSCs存在于人脐带中,并且在体外有较强的增殖能力,特定条件下能够分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 脐带 间充质干细胞 体外扩增 诱导分化 神经元细胞
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骨髓基质细胞源性神经干细胞体外分化及电生理特性的研究 被引量:21
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作者 郭再玉 姜晓丹 +5 位作者 徐如祥 张世忠 徐强 邹雨汐 杜谋选 蔡颖谦 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期545-550,共6页
目的探索骨髓基质细胞(BMSCs)诱导分化为神经干细胞(NSCs),比较血清、维甲酸(RA)、胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及2-巯基乙醇(2-ME)等不同浓度诱导条件下BMSCs分化情况,以及分化细胞的电生理特性。方法以恒... 目的探索骨髓基质细胞(BMSCs)诱导分化为神经干细胞(NSCs),比较血清、维甲酸(RA)、胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及2-巯基乙醇(2-ME)等不同浓度诱导条件下BMSCs分化情况,以及分化细胞的电生理特性。方法以恒河猴骨髓中分离出的BMSCs为实验对象,利用神经干细胞培养基和RA、GDNF、BDNF、2-ME等生长因子在不同血清浓度下进行培养增殖和诱导分化。Nestin、CD133抗体免疫细胞化学染色鉴定NSCs,NSE、β-tublin鉴定神经元、GFAP鉴定神经胶质细胞。膜片钳检测细胞的电生理特性。结果低浓度血清(2.5%)+RA(0.3mg/L)+GDNF(20μg/L)诱导分化效果较好,且分化的神经元样细胞较未分化细胞的膜特性[静息膜电位(RMP)、膜电容(Cm)、串联电阻值(Rs)]有了显著改变(P﹤0.01)。部分形态成熟的神经元样细胞表现出TTX敏感的快速激活、快速失活的电压依赖性的Na+通道,而未分化细胞却未记录到内向电流;两类细胞均可记录到外向的K+电流,但神经元样细胞的电流峰值强度要显著高于未分化细胞,并且包括两种电流成分:瞬时外向K+电流和延迟整流型的K+电流。结论RA+GDNF及配合使用低浓度血清能够有效诱导骨髓源神经干细胞向成熟神经系细胞分化,且分化的神经元样细胞具有快速激活、快速失活的电压依赖性Na+通道,类似神经细胞的电生理特性。 展开更多
关键词 电生理特性 细胞体外分化 细胞源性 胶质细胞神经营养因子 神经元细胞 脑源性神经营养因子 骨髓源神经细胞 Na^+通道 BMSCs 未分化细胞 电压依赖性 K^+电流 诱导分化 骨髓基质细胞 Nestin 免疫细胞化学 神经胶质细胞
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人羊膜来源间质干细胞的分离、培养及鉴定 被引量:23
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作者 李国喜 杨波 +6 位作者 关方霞 杜英 宋来君 张清勇 胡祥 胡平生 徐虹 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第2期244-247,共4页
目的:探讨来源于人羊膜间质干细胞( amniotic-derived mesenchymal stem cells, AD-MSCs)的分离、培养及鉴定。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,加入胰酶37℃消化30min,共2次,然后加入终浓度1.0g/L的胶原酶... 目的:探讨来源于人羊膜间质干细胞( amniotic-derived mesenchymal stem cells, AD-MSCs)的分离、培养及鉴定。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,加入胰酶37℃消化30min,共2次,然后加入终浓度1.0g/L的胶原酶和0.1g/L的DNA酶,37℃消化60min,收集细胞,用含体积分数为10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基进行培养和纯化。倒置显微镜观察细胞形态,取4~6代的细胞用流式细胞仪分析细胞表面标志,取扩增第3代后的AD-MSCs加人全反式维甲酸(RTRA)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)向神经元样细胞诱导分化。结果:来源于羊膜的细胞种植于DMEM/F12培养基中后,可在体外大量扩增并纯化;流式细胞检测显示:CD29、CD44、HLA-ABC阳性表达,CD34、CD45、HLA-DR阴性表达。免疫细胞化学显示AD-MSCs经RTRA和bFGF诱导后表达神经元特异性烯醇化酶,不表达胶质纤维性蛋白。结论:羊膜中存在问质干细胞,其可以在体外培养、扩增、纯化,并可在体外向神经元样细胞分化。 展开更多
关键词 羊膜 间质干细胞 培养 神经元细胞
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黄芪对间质干细胞分化为神经元样细胞的定向诱导作用 被引量:19
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作者 余勤 罗依 +3 位作者 董勤 赵伟春 刘文洪 孙国金 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 2004年第12期826-829,i004,共5页
目的 研究黄芪在体外诱导间质干细胞 (MSC)分化为神经元祥细胞的作用。方法 用Ficoll Paque液将成人骨髓细胞进行密度梯度离心和贴壁筛选分离出MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,采用含黄芪的无血清L DMEM诱导MSC分化... 目的 研究黄芪在体外诱导间质干细胞 (MSC)分化为神经元祥细胞的作用。方法 用Ficoll Paque液将成人骨髓细胞进行密度梯度离心和贴壁筛选分离出MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,采用含黄芪的无血清L DMEM诱导MSC分化为神经元样细胞。以免疫组化方法检测神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF M)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 MSC原代可获得 (6~ 8)× 10 5、第 8代可获得 (2~ 3)× 10 1 0 个细胞。流式细胞仪检测结果CD2 9、CD4 4、CD16 6表达阳性 ,CD14、CD34、CD4 5、HLA DR为阴性 ;扩增后的各代MSC表面抗原表达无显著性差异。黄芪诱导后 ,MSC形态上转变为典型的神经元样细胞 ,免疫组化显示诱导出的神构经元样细胞NSE、NF M表达阳性 ,NSE阳性细胞为 (87 2± 3 3) % ,NF M阳性细胞为 (89 1± 3 1) % ,GFAP阴性。结论 黄芪可在体外诱导成人MSC分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 神经元细胞 黄芪 表达 NF 间质干细胞 NSE 分化 诱导 阳性细胞 筛选
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人骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞 被引量:12
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作者 郭子宽 刘晓丹 +2 位作者 候春梅 李秀森 毛宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2001年第1期91-92,共2页
Recent reports have clearly demonstrated that bone marrow cells can be differentiated into neurons, suggesting the existence of cells with the differentiation capacity in the bone marrow cell population. It is well kn... Recent reports have clearly demonstrated that bone marrow cells can be differentiated into neurons, suggesting the existence of cells with the differentiation capacity in the bone marrow cell population. It is well known that hematopoietic stem cells as well as mesenchymal stem cells (MSCs) can be transplanted and therefore, alternative of them might contribute to the process. In the present study it was addressed whether marrow MSCs could be coaxed into neuron-specific antigen bearing cells and if so, whether the differentiated cells possess the cytochemical features seen in neurons. The report here showed that high concentration of 2-mercaptoethanol (2-ME) could induce some of the MSCs into neuron-like cells expressing neurofilament (NF) and neuron specific enolase (NSE). The neuron-like cells were alkaline phosphotase positive while the others MSCs were kept negative. Cells treated with 2-ME were positive for α-naphthylacetate esterase and glycogen and negative for acetylchonlinesterase, which were similar with the results seen in untreated cells. Furthermore, Nissel body was not observed in treated cells shown by toluidine blue staining. Therefore, it is likely that the cells described here seem not belong to the neuronal lineage. These findings, however, reveal that human MSCs could alter their committed fates under some circumstances. 展开更多
关键词 骨髓 间充质干细胞 细胞分化 神经元细胞
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川芎嗪诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究 被引量:11
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作者 撒亚莲 李海标 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期514-517,共4页
目的 用川芎嗪 (ligustrazinhydrochloride)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,rMSCs)分化为神经元样细胞。 方法 用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化 ,选用... 目的 用川芎嗪 (ligustrazinhydrochloride)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,rMSCs)分化为神经元样细胞。 方法 用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化 ,选用第 5代后的骨髓间质干细胞进行诱导分化。用 10 μg LbFGF预诱导 2 4h ,更换成含川芎嗪的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组织化学SABC法鉴定神经丝蛋白 (NF M)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、巢蛋白 (nestin)、微管联合蛋白 2 (MAP 2 )、生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。 结果 第 5代间质干细胞形态达到均一 ,呈梭形。用川芎嗪诱导 15min到 3h ,间质干细胞胞体逐渐增大 ,并伸出细长突起形似神经元样细胞。免疫组织化学显示NF M、NSE、nestin、MAP 2和GAP 4 3表达阳性 ,而GFAP阴性。对照组上述染色均为阴性。 结论 川芎嗪可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 川芎嗪 诱导 大鼠 骨髓 间质干细胞分化 神经元细胞
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成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞 被引量:12
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作者 肖庆忠 温冠媚 +2 位作者 李浩威 李红乐 李树浓 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期323-325,共3页
目的 探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(adult rat marrow mesenchymal stem cells,rMSCs)的体外 增殖和特异性诱导分化为神经元样细胞的能力。方法 分别采用3种不同的诱导方法体外定向诱导... 目的 探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(adult rat marrow mesenchymal stem cells,rMSCs)的体外 增殖和特异性诱导分化为神经元样细胞的能力。方法 分别采用3种不同的诱导方法体外定向诱导第三至五代的 rMSCs向神经元样细胞分化,并分别应用相差显微镜观察神经元样细胞和免疫细胞组化检测神经元样细胞所表达 的神经元特异性标志[神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)和神经丝蛋白(neurofilament,NF)]及 星形胶质细胞特异性标志[胶质纤维酸性蛋白(glia fiber acid protein,GFAP)],并进行神经元样细胞定量分析。结 果 所采用的3种定向诱导方法都能使rMSCs特异性诱导分化为神经元样细胞,此神经元样细胞都能特异性地表 达出NSE和NF,而不表达GFAP。经过定量计数分析发现用上述方法处理rMSCs后出现NSE阳性的细胞约为 75.5%±3.5%,出现NF阳性的细胞约为77.2%±2.8%。结论rMSCs能在体外扩增、传代,并能被定向诱导分 化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 骨髓 间充质干细胞 细胞分化 神经元细胞 MSC 神经 动物实验
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人参总皂苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:14
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作者 郑国庆 王小同 +2 位作者 邬伟 陈伟 宋秋英 《中华中医药学刊》 CAS 2008年第6期1257-1259,共3页
目的:探讨人参总皂苷体外诱导青年SD大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的作用。方法:贴壁筛选法分离纯化MSCs。10μg·L^-1 bFGF预诱导第5代的MSCs24h,换200μg·mL^-1人参总皂苷的无血清培养液诱导诱导5~6h,... 目的:探讨人参总皂苷体外诱导青年SD大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的作用。方法:贴壁筛选法分离纯化MSCs。10μg·L^-1 bFGF预诱导第5代的MSCs24h,换200μg·mL^-1人参总皂苷的无血清培养液诱导诱导5~6h,观察细胞形态变化,免疫组织化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:第5代间质干细胞形态达到均一,呈梭形。用人参总皂苷诱导30min到3h后,MSCs胞体逐渐增大,并伸出细长突起形似神经元样细胞。诱导5~6h后,NSE、MAP-2和GFAP阳性细胞数分别为(76±4.7)%、(61±5.2)%、(10±2.4)%。对照组上述染色均呈阴性。结论:人参总皂苷在体外能定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 人参总皂苷 骨髓间质干细胞 神经元细胞 细胞分化
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人脐血间充质干细胞的分离培养与向神经元样细胞诱导分化的实验研究 被引量:14
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作者 喻永涛 惠国桢 +2 位作者 陈镭 陆华 苗宗宁 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 2004年第6期787-790,821,共5页
目的 探讨来源于人脐血的间充质干细胞(mesenchyma/stem cells,MSCs)分化成神经元样细胞的可行性,以及在体外分离、纯化和扩增的条件。方法 无菌条件下收集正常足月剖腹产胎儿的脐带血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细... 目的 探讨来源于人脐血的间充质干细胞(mesenchyma/stem cells,MSCs)分化成神经元样细胞的可行性,以及在体外分离、纯化和扩增的条件。方法 无菌条件下收集正常足月剖腹产胎儿的脐带血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的MesencultTM作为培养基进行培养和纯化,获得贴壁细胞,取扩增第三代后的MSCs向神经元样细胞诱导分化。用免疫荧光标记方法检测神经元特异性标记物。结果 来源于脐血的单个核细胞种植于特定的培养基中后,可产生贴壁细胞,主要表现为破骨样和间充质样细胞;传3代后,这些细胞可得到纯化、扩增;免疫组化标记显示经诱导后的MSCs表达神经丝蛋白(NF)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)。结论 源于脐血的MSCs在体外可以培养、扩增,并向神经元样细胞分化,可作为神经干细胞的来源而用于实验研究和临床。 展开更多
关键词 人脐带血 间充质干细胞 纯化和扩增 神经元细胞
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川芎嗪诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞:最佳诱导剂量筛选 被引量:17
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作者 陈兵 尹延庆 +4 位作者 柯俊龙 邹新辉 彭浩 谈山峰 许志恩 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1072-1077,共6页
背景:目前用于体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的诱导剂众多,但多数化学诱导剂具有毒性不适合用于人体。目的:观察中药川芎嗪对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响,并寻找川芎嗪诱导分化的最佳浓度。方法:SD大... 背景:目前用于体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的诱导剂众多,但多数化学诱导剂具有毒性不适合用于人体。目的:观察中药川芎嗪对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响,并寻找川芎嗪诱导分化的最佳浓度。方法:SD大鼠麻醉后无菌条件下取出股骨和胫骨,离心后弃上清液,加入含体积分数为15%胎牛血清的L-DMEM培养基重新悬浮细胞并转入培养瓶培养传代,用免疫细胞化学方法检测第5代骨髓间充质干细胞CD44、CD45的表达;取含1.00,1.25,1.50g/L3种剂量盐酸川芎嗪注射液的无血清L-DMEM培养基对体外培养的第5代骨髓间充质干细胞进行诱导。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫细胞化学方法检测已诱导细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达,比较3种剂量盐酸川芎嗪注射液诱导神经元样细胞抗原表达率。结果与结论:①原代细胞接种3d后多数细胞贴壁,传代后细胞贴壁速度和增殖更快,第5代基本纯化为骨髓间充质干细胞,细胞呈放射状或漩涡状排列。②第5代骨髓间充质干细胞(98.02±0.81)%CD44表达阳性,CD45表达阴性。③诱导后细胞出现类似神经元细胞样形态;免疫细胞化学方法检测显示多数细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性表达,1.25g/L浓度组细胞的神经元特异性烯醇化酶阳性表达率最高。提示川芎嗪可诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,1.25g/L为最适诱导剂量。 展开更多
关键词 川芎嗪 骨髓间充质干细胞 神经元细胞 诱导剂 分化
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复方丹参注射液诱导鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的研究 被引量:14
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作者 李禄全 余加林 +1 位作者 刘官信 官晓清 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期53-54,共2页
关键词 骨髓间充质干细胞 BMSC 神经细胞 诱导 神经 复方丹参注射液 性分化 能值 发现 神经元细胞
原文传递
人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化 被引量:13
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作者 林竞韧 郭坤元 +1 位作者 李江琪 严定安 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期251-253,264,共4页
目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培... 目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上,表达CD13、CD29、CD59,不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR;传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞,并保持分化潜能;克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。 展开更多
关键词 骨髓基质干细胞 细胞 培养的 神经元细胞 诱导分化
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