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乙型脑炎病毒NS1′蛋白表达对小鼠毒力的影响 被引量：1
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作者 任阳 陈岚 +4 位作者 杨俊杰 黄荣 冯亚岚 袁磊 杨健 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2023年第3期86-98,共13页
为探究乙型脑炎病毒NS1′蛋白表达对小鼠神经毒力和神经侵袭力的影响,以乙脑病毒疫苗株SA14-14-2为模板,对NS2A基因进行A66G定点突变,并构建全长感染性克隆。体外转录后,将病毒RNA导入BHK21细胞,获得突变病毒SA14-14-2(A66G)。同样以乙... 为探究乙型脑炎病毒NS1′蛋白表达对小鼠神经毒力和神经侵袭力的影响,以乙脑病毒疫苗株SA14-14-2为模板,对NS2A基因进行A66G定点突变,并构建全长感染性克隆。体外转录后,将病毒RNA导入BHK21细胞,获得突变病毒SA14-14-2(A66G)。同样以乙脑病毒野毒株SA14为模板,采用相同方法构建并获得突变病毒SA14(G66A)。经测序和间接免疫荧光鉴定,证明突变病毒构建成功。Western blot检测发现疫苗株SA14-14-2和SA14(G66A)不表达NS1′蛋白,而野毒株SA14和SA14-14-2(A66G)能表达NS1′蛋白。生长曲线显示突变病毒的生长特性无明显改变。蚀斑实验发现SA14(G66A)的蚀斑较SA14更小,SA14-14-2(A66G)的蚀斑较SA14-14-2更大。细胞增殖活性实验显示NS1′蛋白表达对BHK21细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.01)。疫苗株SA14-14-2与SA14-14-2(A66G)对1周龄小鼠脑内接种的LD50分别为297.9 PFU(0.02 mL)和143.4 PFU(0.02 mL),野毒株SA14和SA14(G66A)对3周龄小鼠脑内接种的LD50分别为0.8 PFU(0.03 mL)和2.3 PFU(0.03 mL)。疫苗株SA14-14-2与SA14-14-2(A66G)对2周龄小鼠腹腔接种的LD50分别为>5.65×10^(6)PFU(0.5 mL)和>1.46×10^(6)PFU(0.5 mL)。野毒株SA14和SA14(G66A)对3周龄小鼠腹腔接种的LD50分别为1.3×10^(3)PFU(0.5 mL)和1.2×10^(4)PFU(0.5 mL)。结果表明,乙脑病毒NS2A中第66位碱基是影响NS1′蛋白表达与否的关键位点,且NS1′蛋白表达能提高病毒对小鼠的神经毒力与神经侵袭力,其中对侵袭力的影响更为显著。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 非结构蛋白 NS1′蛋白 神经毒力 神经侵袭力
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乙型脑炎病毒E315回复突变对小鼠神经毒力的影响
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作者 范凤鸣 付茵 +7 位作者 刘莉娜 杨欢 谢安平 石晓玲 刘杰 曾献武 李玉华 杨会强 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第4期184-188,共5页
目的构建乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2包膜蛋白第315位氨基酸(E315)回复突变株,并分析该位点回复突变株在小鼠体内的神经毒力变化.方法采用重叠PCR扩增含基因组第1921核苷酸位点回复突变的基因片段,替换SA14-14-2全长克隆的相应区域,获... 目的构建乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2包膜蛋白第315位氨基酸(E315)回复突变株,并分析该位点回复突变株在小鼠体内的神经毒力变化.方法采用重叠PCR扩增含基因组第1921核苷酸位点回复突变的基因片段,替换SA14-14-2全长克隆的相应区域,获得回复突变株M315.通过比较SA14-14-2与突变株的噬斑大小和一步生长曲线,分析M315的增殖特征.采用小鼠模型测定该突变株的脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力和乳鼠传代返祖能力,分析疫苗株E315位点回复突变后毒力的变化.结果成功构建了回复突变株M315,其噬斑大小和增殖特征与疫苗株相似.M315对17~19日龄小鼠无皮下或腹腔感染入脑神经毒力,鼠脑病毒有很低但可检测的脑内神经毒力〔小于3.0 lg噬斑形成单位(plaque forming unit,PFU)/0.03 ml〕,皮下注射不致病.3~5日龄乳鼠脑内接种后发病,但脑内病毒毒力低于3.0 lgPFU/0.03 ml.结论在分子水平证明了E315位点是影响乙型脑炎疫苗安全性的关键位点之一,但影响较小.E315位点的回复突变虽使SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力和乳鼠传代返祖能力增强,但没有超出中国药典规定的毒力范围. 展开更多
关键词 脑炎病毒 日本 疫苗 减毒 回复突变 神经毒力 神经侵袭力
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