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化浊抗纤保肝汤调控PI3K/AKT/mTOR途径抑制肝纤维化的机制研究 被引量:5
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作者 孙瑞芳 刘石柱 +1 位作者 李瑞东 许双朝 《天津中医药》 CAS 2022年第7期911-916,共6页
[目的]探究化浊抗纤保肝汤(HZKXD)调控磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)途径抑制肝纤维化的机制。[方法] 80只大鼠随机分为4组:对照组、模型组、低剂量HZKXD组和高剂量HZKXD组(每组20只)。四氯化碳(10%)腹腔... [目的]探究化浊抗纤保肝汤(HZKXD)调控磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)途径抑制肝纤维化的机制。[方法] 80只大鼠随机分为4组:对照组、模型组、低剂量HZKXD组和高剂量HZKXD组(每组20只)。四氯化碳(10%)腹腔注射构建纤维化模型,低剂量HZKXD组和高剂量HZKXD组灌胃剂量分别为5 mL/kg和10 mL/kg。比较各组大鼠外周血中肝功能指标、肝组织损伤、肝纤维化情况、成纤维细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平,以及PI3K、AKT、mTOR mRNA和蛋白表达量。[结果] 4组大鼠上述指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型组的谷丙转氨酶(ALT)(127.26±14.03)U/L、谷草转氨酶(AST)(260.15±27.57)U/L、肝组织损伤情况、胶原蛋白的体积分数(24.27±1.96)%、α-SMA蛋白、PI3K、AKT和m TOR mRNA和蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。低剂量HZKXD组的ALT(92.85±9.84)U/L、AST(198.67±21.91)U/L、肝组织损伤情况、胶原蛋白的体积分数(14.81±1.04)%、α-SMA蛋白、PI3K、AKT和mTOR m RNA和蛋白表达量显著低于模型组(P<0.05)。高剂量HZKXD组的ALT(56.44±6.35)U/L、AST(137.23±14.06) U/L、肝组织损伤情况、胶原蛋白的体积分数(7.05±0.85)%、α-SMA蛋白、PI3K、AKT和mTOR mRNA和蛋白低于模型组和低剂量HZKXD组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论] HZKXD可缓解肝纤维化模型大鼠肝组织中胶原蛋白累积,还可以抑制PI3K/AKT/mTOR通路减少成纤维细胞。 展开更多
关键词 肝纤维化 化浊抗纤保肝汤 成纤维细胞 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白
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PI3K/Akt/mTOR通路在炎症相关疾病中分子机制研究进展 被引量:47
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作者 嵇莹莹 龚国清 《药学研究》 CAS 2018年第4期226-229,共4页
炎症是一种机体应对感染、组织损伤或者细胞应激的反应,并且可以通过修复机制恢复组织功能。炎症发生时会引起多条信号通路的激活,包括核转录因子-κB(NF-κB)通路、Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)通路、丝裂原活化蛋白激酶(... 炎症是一种机体应对感染、组织损伤或者细胞应激的反应,并且可以通过修复机制恢复组织功能。炎症发生时会引起多条信号通路的激活,包括核转录因子-κB(NF-κB)通路、Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路以及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路等。本文综述了近年来磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路在炎症相关疾病中的分子作用机制,为研发以磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白为靶点的药物提供理论依据。 展开更多
关键词 炎症 信号通路 磷脂肌醇-3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白通路
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四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的免疫组化影响 被引量:20
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作者 王燕 柳荣 朱向东 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期42-48,共7页
目的本研究拟通过观察四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织病理特征和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白免疫组化表达水平的影响,探讨溃疡性结肠炎发生的可能机制。方法120只SPF级Wistar大鼠(雌雄各半)随机分出20只作为空... 目的本研究拟通过观察四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织病理特征和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白免疫组化表达水平的影响,探讨溃疡性结肠炎发生的可能机制。方法120只SPF级Wistar大鼠(雌雄各半)随机分出20只作为空白组,其余100只作为造模组,造模采用DNBS/乙醇溶液灌肠+皮下注射氢化可的松+番泻叶灌胃法建立脾肾阳虚型UC大鼠模型。将成模大鼠随机分为5组,分别为模型组、美沙拉嗪组、四神丸高、中、低剂量组。模型组和空白组给予蒸馏水灌服,美沙拉嗪组按0.36 g/kg剂量灌胃,四神丸高、中、低剂量组分别按生药3.2、1.6、0.8 g/kg剂量灌胃,灌胃体积均为10 m L/kg。每日1次,连续21 d。采用HE染色法观察各组大鼠结肠组织病理改变,免疫组化法观察结肠组织PI3K p85、p-PI3K p85、AKT、p-AKT Ser473、mTOR、p-mTOR Ser2448蛋白的表达位置及表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠病理切片见肠黏膜部分消失,腺体消失,有大量的炎性细胞浸润,聚集于黏膜层和基层;PI3K p85、p-PI3K p85、AKT、p-AKT Ser473、mTOR、pmTOR Ser2448蛋白平均光密度值显著升高(P<0.01)。与模型组比较,药物组炎性细胞减少,黏膜层结构不同程度的恢复正常,美沙拉嗪组和四神丸中剂量组效果最好,黏膜结构接近空白对照组。四神丸低剂量组炎性细胞稍有减少,可见少量的腺体结构;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组PI3K p85、p-PI3K p85、AKT、p-AKT Ser473、mTOR、p-mTOR Ser2448蛋白平均光密度值均有不同程度下降(P<0.01,P<0.05)。结论四神丸可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活改善脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠的肠黏膜损伤。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 温肾健脾法 四神丸 磷脂肌醇-3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路
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加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞的影响 被引量:14
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作者 施胜英 林海桢 +2 位作者 周溦 王素丽 林敬明 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第18期88-93,共6页
目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋... 目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡形态;免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果:加味四君子汤含药血清呈浓度依赖性抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期。hoechst33342染色后,随着含药血清浓度的增加,Hep-G2细胞核显著呈碎块状致密浓染。同时,加味四君子汤含药血清能够抑制Hep-G2细胞Akt,m TOR,核糖体S6蛋白激酶(S6),真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化,从而上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)和下调细胞周期蛋白(Cyclin D1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达。加味四君子汤含药血清与300 nmol·L-1的PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584联合使用具有协同作用,含药血清能增强PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584对Hep-G2细胞中PI3K/Akt/m TOR信号通路靶点Akt和m TOR磷酸化的抑制作用。结论:加味四君子汤含药血清能抑制Hep-G2细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其于G0/G1期,其机制可能通过阻断PI3K/Akt/m TOR信号通路而实现。 展开更多
关键词 加味四君子汤 含药血清 肝癌HEPG2细胞 增殖 凋亡 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路
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黄芪皂苷对病毒性心肌炎大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路和心肌细胞凋亡的影响 被引量:11
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作者 郑恒 张聪子 +3 位作者 徐金军 章登政 甘露珍 饶志威 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第23期3521-3526,共6页
目的分析黄芪皂苷(SA)对病毒性心肌炎(VMC)大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和心肌细胞凋亡的影响。方法制备VMC大鼠模型,随机分成正常组、模型组、SA低(40 mg/kg)、中(80 mg/kg)、高剂量(160 m... 目的分析黄芪皂苷(SA)对病毒性心肌炎(VMC)大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和心肌细胞凋亡的影响。方法制备VMC大鼠模型,随机分成正常组、模型组、SA低(40 mg/kg)、中(80 mg/kg)、高剂量(160 mg/kg)组,每组15只,造模成功后灌胃给药,连续15 d。超声心动图检测大鼠心功能。HE染色检测大鼠心肌组织病理变化。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测柯萨奇B3病毒(CVB3)mRNA表达。生化仪检测血清心肌酶含量。酶联免疫吸附法检测大鼠血清炎症因子。蛋白免疫印迹检测蛋白。结果经SA干预可改善VMC大鼠心肌病理损伤,降低CVB3病毒表达量,提高短轴缩短率(LVFS)和左室射血分数(LVEF)水平,降低左室舒张末内径(LVEDd)和左室收缩末内径(LVESd)水平;减少血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)水平;降低肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-7(IL-7)和白细胞介素-6(IL-6)水平;下调大鼠心肌组织中磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)/PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)/AKT、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR、Bcl-2相关X蛋白(Bax)/B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)比值。结论SA可抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路激活降低血清心肌酶、炎症因子水平,抑制CVB3基因复制,改善心肌损伤,增强心功能,抑制心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 黄芪皂苷 病毒性心肌炎 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白 信号通路 凋亡
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复方芩柏颗粒剂通过靶向干预miR-199-3p对溃疡性结肠炎的改善作用 被引量:7
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作者 肖佑 肖超 +2 位作者 肖戈 赵建政 王真权 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1100-1103,共4页
目的观察复方芩柏颗粒剂通过靶向干预miR-199-3p抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PK3K)/蛋白激酶B(AKT)-雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路激活对溃疡性结肠炎(UC)的作用。方法用5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)与无水乙醇按1∶1体积制成TNBS/乙醇混合液... 目的观察复方芩柏颗粒剂通过靶向干预miR-199-3p抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PK3K)/蛋白激酶B(AKT)-雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路激活对溃疡性结肠炎(UC)的作用。方法用5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)与无水乙醇按1∶1体积制成TNBS/乙醇混合液,建立溃疡性结肠炎模型。用随机数字表法将大鼠随机分为3组:正常组、模型组和实验组,每组19只。正常组和模型组给予0. 9%Na Cl 2 m L灌肠,实验组给16%复方芩柏颗粒2 m L灌肠,2次/天,连续3周。以免疫组化法检测结肠组织中m TOR表达,以蛋白质印迹法检测结肠组织PI3K/AKT相关蛋白表达,以实时荧光定量-PCR法测定结肠组织miR-199-3p基因表达。结果正常组、模型组和实验组的m TOR阳性表达(平均光密度)分别为0. 18±0. 06,0. 67±0. 09和0. 40±0. 06;上述3组的PI3KP85蛋白相对表达量分别为0. 18±0. 04,0. 83±0. 09和0. 58±0. 08;上述3组的PI3KP100蛋白相对表达量分别为0. 19±0. 05,0. 71±0. 11和0. 54±0. 08;上述3组的p-AKT蛋白相对表达量分别为0. 21±0. 06,0. 79±0. 05和0. 49±0. 08;上述3组大鼠结肠组织miR-199-3p基因相对表达量分别为0. 62±0. 09,0. 19±0. 0和0. 38±0. 09。上述指标:模型组和正常组相比较差异均有统计学意义(均P <0. 05);实验组与模型组比较差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论增加miR-199-3p表达和抑制PI3K/AKT-m TOR信号通路激活可能是复方芩柏颗粒剂治疗UC的重要机制。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 复方芩柏颗粒剂 微小RNA-199-3p 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b-雷帕霉素蛋白信号通路
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基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨水蛭蜈蚣药对改善糖尿病勃起功能障碍大鼠的作用机制 被引量:7
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作者 冯隽龙 李海松 +6 位作者 王继升 代恒恒 鲍丙豪 邓省 龙中闻 徐洪胜 王彬 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1118-1125,共8页
目的通过检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路关键因子,探讨水蛭蜈蚣药对改善糖尿病勃起功能障碍(DIED)的作用机制。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导SD雄性大鼠。8周后,用阿扑吗啡对DIED模型进行验证。将... 目的通过检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路关键因子,探讨水蛭蜈蚣药对改善糖尿病勃起功能障碍(DIED)的作用机制。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导SD雄性大鼠。8周后,用阿扑吗啡对DIED模型进行验证。将造模成功大鼠分为模型组、他达拉非组、水蛭蜈蚣药对组(以下简称"药对组"),分别用去离子水、他达拉非(0.5 mg/kg)和水蛭蜈蚣颗粒剂(0.3 g/kg)灌胃8周。检测血糖水平及勃起功能,化学发光法测定血清睾酮、黄体生成素与卵泡刺激素释放激素水平。用Western blot和RT-qPCR法检测阴茎组织PI3K、AKT、mTOR蛋白和基因的表达,HE染色对阴茎组织进行病理学观察。结果药物干预8周后,药对组大鼠的勃起次数较他达拉非组增加(P<0.05);药对组的睾酮水平高于模型组(P<0.05),他达拉非组的睾酮水平与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组PI3K、AKT、mTOR蛋白的磷酸化水平和mRNA表达水平低于空白对照组(P<0.05),药对组PI3K、AKT、mTOR蛋白的磷酸化水平和mRNA表达水平高于模型组(P<0.05),他达拉非组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论水蛭蜈蚣药对可以通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制DIED大鼠阴茎平滑肌细胞的凋亡,改善勃起功能。 展开更多
关键词 糖尿病勃起功能障碍 水蛭蜈蚣 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路 大鼠
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Barrett食管组织中环氧合酶-2的表达及其与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路的关系
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作者 闫秀文 张雍偲 +1 位作者 周毅 霍云奎 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第3期515-518,共4页
目的探究Barrett食管(BE)组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路与环氧合酶-2(COX-2)表达的关系及对Barrett食管发生的影响。方法选择2021年1月至2023年1月间于山西医科大学第一医院治疗的BE患者... 目的探究Barrett食管(BE)组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路与环氧合酶-2(COX-2)表达的关系及对Barrett食管发生的影响。方法选择2021年1月至2023年1月间于山西医科大学第一医院治疗的BE患者共48例,取其中的病灶组织为BE组,同时取病灶周围正常食管黏膜组织标本作为对照组。对患者的BE组和对照组均进行食管组织免疫组织化学染色,检测组织中PI3K、Akt、mTOR以及COX-2蛋白的水平。应用Spearman秩相关方法,分别分析PI3K、Akt、mTOR与COX-2的相关性。结果BE组的组织中COX-2蛋白阳性率及相对表达水平高于对照组(97.92%比70.83%、0.75±0.12比0.28±0.06,t=24.721,χ^(2)=85.429,P<0.05)。BE组的组织中PI3K蛋白阳性率及相对表达水平高于对照组(85.42%比11.63%、0.81±0.15比0.23±0.04,t=25.885,χ^(2)=91.132,P<0.05)。BE组的组织中PI3K蛋白阳性率及相对表达水平高于对照组(83.33%比14.58%、0.77±0.12比0.25±0.05,t=27.713,χ^(2)=89.273,P<0.05)。BE组的组织中PI3K蛋白阳性率及相对表达水平高于对照组(81.25%比33.33%、0.70±0.11比0.30±0.08,t=20.375,χ^(2)=75.422,P<0.05)。BE组的组织中PI3K、Akt、mTOR水平分别与COX-2水平呈正相关(r=0.681、0.605、0.634,P<0.05)。结论BE组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路与COX-2水平呈正相关且表达水平上调,参与BE的发生发展。 展开更多
关键词 bARRETT食管 磷脂肌醇-3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白 环氧合酶-2
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复方守宫散含药血清对PI3K/AKT/mTOR通路介导的小鼠非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响
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作者 张良军 蔡琪 +3 位作者 黄璟 毛汉文 田敬海 夏黎明 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期3015-3020,共6页
目的探讨复方守宫散(CSP)含药血清对磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路介导的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡的影响。方法制备不同浓度CSP含药血清。以NSCLC细胞株A549细胞为研究对象,以不同浓... 目的探讨复方守宫散(CSP)含药血清对磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路介导的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡的影响。方法制备不同浓度CSP含药血清。以NSCLC细胞株A549细胞为研究对象,以不同浓度CSP含药血清处理细胞,分为对照组、CSP低浓度(CSP-L,1.25 g/ml)组、CSP中浓度(CSP-M,2.50 g/ml)组、CSP高浓度(CSP-H,3.75 g/ml)组,在CSP-H组基础上,分别以PI3K过表达质粒(pcDNA PI3K)及过表达阴性对照(pcDNA NC)转染细胞,记为CSP-H+pcDNA NC组、CSP-H+pcDNA PI3K组。倒置显微镜下观察细胞生长状态;CCK-8法检测各组细胞增殖状况;透射电镜下观察自噬溶酶体形成情况;流式细胞仪观察各组细胞凋亡变化;Transwell室测定各组细胞侵袭性;Western印迹检测各组细胞中PI3K/AKT/mTOR通路蛋白及自噬相关蛋白(Beclin-1)表达水平。结果对照组A549细胞无自噬体产生,经不同浓度CSP含药血清处理后,自噬体逐渐增多,细胞增殖率、侵袭细胞数、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR显著下降,Beclin-1及细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与CSP-H+pcDNA NC组相比,CSP-H+pcDNA PI3K组细胞增殖率、侵袭细胞数、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR显著升高,Beclin-1及细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。结论CSP含药血清可以抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡及自噬,可能与抑制PI3K/AKT/mTOR通路有关。 展开更多
关键词 复方守宫散 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路 增殖 凋亡
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敲减Nei内切核酸酶Ⅷ样蛋白3来源的外泌体对脑胶质瘤细胞迁移自噬及替莫唑胺耐药性的影响
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作者 谢祎 闻嘉 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第8期1755-1758,共4页
目的探讨Nei内切核酸酶Ⅷ样蛋白3(NEIL3)在脑胶质瘤中的表达及其对脑胶质瘤细胞生长、迁移、自噬和替莫唑胺耐药性的影响,并揭示其调控机制。方法15例人脑胶质瘤组织样本和癌旁组织样本收集自郑州大学第一附属医院神经外科,通过定量聚... 目的探讨Nei内切核酸酶Ⅷ样蛋白3(NEIL3)在脑胶质瘤中的表达及其对脑胶质瘤细胞生长、迁移、自噬和替莫唑胺耐药性的影响,并揭示其调控机制。方法15例人脑胶质瘤组织样本和癌旁组织样本收集自郑州大学第一附属医院神经外科,通过定量聚合酶链反应(qPCR)实验评估NEIL3在脑胶质瘤组织中表达,通过基因敲减技术降低NEIL3在脑胶质瘤细胞中的表达,提取并纯化NEIL3来源的外泌体,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验评估细胞迁移能力,免疫印迹和免疫荧光技术检测自噬相关蛋白的表达水平,流式细胞术测定细胞对替莫唑胺的敏感性,此外,通过免疫印迹分析磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的活性变化,采用t检验比较两组之间的差异,单因素方差分析(ANOVA)用于多组比较。结果脑胶质瘤组织中NEIL3 RNA表达水平(1.00±0.04)明显高于癌旁组织(0.47±0.11),差异有统计学意义(P<0.01)。敲减NEIL3来源的外泌体能够抑制脑胶质瘤细胞的生长[(55.00±0.06)%比(100.00±0.53)%,P<0.01]和集落形成[(49.67±11.55)个比(197.30±44.24)个,P<0.01],抑制脑胶质瘤细胞的自噬,改善脑胶质瘤细胞对替莫唑胺的耐药性,并抑制脑胶质瘤细胞的PI3K/Akt/mTOR信号通路。结论敲低NEIL3来源的外泌体可以抑制脑胶质瘤细胞的迁移和自噬,改善对替莫唑胺的耐药性。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 替莫唑胺耐药性 外泌体 磷脂肌醇3激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路
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桑皮苷A逆转K562/阿霉素耐药细胞化疗多药耐药的研究 被引量:4
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作者 黎玉华 江洁 +5 位作者 陈鹏飞 肖雄 钟国平 黄民 毕惠嫦 胡锦芳 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1064-1068,共5页
目的研究桑皮苷A对人白血病耐药细胞K562/阿霉素耐药细胞(K562/ADM)化疗耐药的影响。方法实验分为溶媒(DMSO)对照组、阳性对照组(10μmol·L^(-1)维拉帕米处理48 h,再用5μg·mL^(-1)阿霉素孵育1 h或2μg·mL^(-1)罗丹明12... 目的研究桑皮苷A对人白血病耐药细胞K562/阿霉素耐药细胞(K562/ADM)化疗耐药的影响。方法实验分为溶媒(DMSO)对照组、阳性对照组(10μmol·L^(-1)维拉帕米处理48 h,再用5μg·mL^(-1)阿霉素孵育1 h或2μg·mL^(-1)罗丹明123孵育1.5 h)、阿霉素单用组(5μg·mL^(-1)阿霉素孵育1 h)、阿霉素合用桑皮苷A组(用5,10,20μmol·L^(-1)桑皮苷A处理48 h,再用5μg·mL^(-1)阿霉素孵育1 h)、罗丹明123合用桑皮苷A组(用5,10,20μmol·L^(-1)桑皮苷A处理48 h,再用2μg·mL^(-1)罗丹明123孵育1.5 h)。用噻唑蓝(MTT)实验初步确定桑皮苷A的逆转耐药作用;再以细胞内阿霉素蓄积实验,罗丹明123(Rho123)蓄积及外排实验进一步研究桑皮苷A的逆转耐药作用;分别用聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测桑皮苷A对K562/ADM细胞中P-糖蛋白(P-gp)mRNA、蛋白表达及磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白(PI3K-Akt-mTOR)通路相关蛋白的影响。结果桑皮苷A能增加K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性,桑皮苷A(5~20μmol·L^(-1))与阿霉素(5~160μg·mL^(-1))联合处理可明显降低耐药细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50),逆转倍数分别为1.59,2.20和5.48倍。阿霉素胞内蓄积实验结果显示桑皮苷A能显著升高K562/ADM细胞中阿霉素浓度,其中10,20μmol·L^(-1)桑皮苷A可使胞内阿霉素平均荧光值升高2.3倍和4.3倍;同时,Rho123胞内蓄积和外排实验发现桑皮苷A不仅能增加细胞内Rho123的蓄积,还能减少Rho123的外排,其中10和20μmol·L^(-1)桑皮苷A可分别使胞内Rho123的平均荧光值增加至2.1倍和2.6倍。与对照组相比,桑皮苷A处理可浓度依赖性地降低细胞内P-gp的mRNA和蛋白表达水平,其中10与20μmol·L^(-1)桑皮苷A可分别使P-gp mRNA水平显著下降36.90%和65.40%。桑皮苷A能显著抑制K562/ADM细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白水平。结论桑皮苷A可通过抑制K562/ADM细胞中PI3K-Akt-mTOR通路,进而下调细胞内P-gp� 展开更多
关键词 桑皮苷A 磷脂肌醇3-激酶-蛋白激酶b-雷帕霉素蛋白 P-糖蛋白 K562/阿霉素耐药细胞 多药耐药
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解毒祛瘀方通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路逆转乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的机制研究 被引量:5
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作者 万斯斯 赵萍 +1 位作者 姜华 黄际薇 《中国医药》 2020年第10期1558-1562,共5页
目的探讨解毒祛瘀方通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的逆转作用及机制。方法采用低浓度逐步加量诱导法建立乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株MCF-7C,并分为空白对照组、解毒祛瘀方(2.5 g/L)组... 目的探讨解毒祛瘀方通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的逆转作用及机制。方法采用低浓度逐步加量诱导法建立乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株MCF-7C,并分为空白对照组、解毒祛瘀方(2.5 g/L)组、他莫昔芬(10μmol/L)组、他莫昔芬(10μmol/L)+解毒祛瘀方(2.5 g/L)组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)(10μg/L)+他莫昔芬(10μmol/L)+解毒祛瘀方(2.5 g/L)组。采用噻唑蓝法验证MCF-7C细胞的耐药性、解毒祛瘀方的细胞毒性以及对MCF-7C细胞他莫昔芬耐药性的影响。利用流式细胞术检测细胞凋亡率。利用蛋白质印迹法检测各组MCF-7C细胞中PI3K/Akt/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白的表达。结果 MCF-7C细胞对他莫昔芬的耐药指数为7.20;而经解毒祛瘀方(2.5 g/L)协同作用后,MCF-7C细胞对他莫昔芬的耐药指数为2.02。他莫昔芬+解毒祛瘀方组MCF-7C细胞凋亡率明显高于他莫昔芬组[(56.72±7.25)%比(13.24±0.76)%],同时p-PI3K[(0.37±0.06)比(0.68±0.07)]、p-Akt[(0.17±0.02)比(0.51±0.05)]、p-mTOR[(0.10±0.02)比(0.39±0.02)]蛋白表达量也明显低于他莫昔芬组(均P <0.05)。而加入PI2K/Akt通路激活剂IGF-1后,IGF-1+他莫昔芬+解毒祛瘀方组MCF-7C细胞增殖抑制率和凋亡率较他莫昔芬+解毒祛瘀方组均明显降低(均P <0.05)。结论解毒祛瘀方可逆转乳腺癌细胞他莫昔芬的耐药性,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路活化有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 解毒祛瘀方 他莫昔芬耐药 磷脂肌醇-3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路
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磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路在肺部疾病中的研究进展 被引量:5
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作者 杨春兰 戴爱国 《临床与病理杂志》 2017年第4期813-818,共6页
磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamyc in,PI3K/Akt/mTOR)是细胞内重要信号通路,在细胞生长、增殖、分化和蛋白合成等过程中起重要作用。肺癌、哮喘... 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamyc in,PI3K/Akt/mTOR)是细胞内重要信号通路,在细胞生长、增殖、分化和蛋白合成等过程中起重要作用。肺癌、哮喘、肺动脉高压、肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病(chronic pulmonary obstructive disease,COPD)等疾病是呼吸系统常见疾病,其病理机制涉及细胞增殖及凋亡等,与PI3K/Akt/mTOR信号通路关系密切。 展开更多
关键词 磷脂肌醇3激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路 呼吸系统疾病 病理机制
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二苯乙烯苷对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的作用机制研究 被引量:3
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作者 过禾佳 李翠萍 +5 位作者 粟小平 冯冰华 廖凯彬 何雨亮 吕薇 黄旋平 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期308-312,共5页
目的探讨中药单体二苯乙烯苷(TSG)对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的影响及其分子机制。方法将SCC-9细胞分为3组:空白对照组(0μmol·L^(-1)TSG)和低、高2个浓度实验组(14,28μmol·L^(-1)TSG)。用划痕实验和Transwell迁... 目的探讨中药单体二苯乙烯苷(TSG)对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的影响及其分子机制。方法将SCC-9细胞分为3组:空白对照组(0μmol·L^(-1)TSG)和低、高2个浓度实验组(14,28μmol·L^(-1)TSG)。用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移水平,用流式细胞仪测定凋亡率,用实时荧光定量-PCR法检测抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)基因表达水平,用蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果空白对照组和低、高2个浓度实验组于24 h的平均水平迁移率分别为(48.00±5.87)%,(19.30±1.34)%和(17.16±1.50)%;这3组的垂直迁移细胞数分别为73.00±9.17,32.67±3.21和24.33±4.04;这3组的细胞凋亡率分别为(11.10±0.70)%,(23.17±1.03)%和(36.10±1.32)%;这3组的bcl-2基因的相对表达水平分别为1.03±0.02,0.39±0.09和0.15±0.04;这3组的PI3K蛋白表达水平分别为0.18±0.02,0.14±0.01和0.15±0.01;这3组的Akt蛋白表达水平分别为0.26±0.03,0.13±0.01和0.19±0.01;这3组的mTOR蛋白表达水平分别为0.47±0.05,0.38±0.01和0.34±0.02。上述指标:低、高2个浓度实验组与空白对照组相比,差异均有统计学差异(均P<0.05)。结论 TSG具有抑制口腔癌细胞增殖、迁移和促进细胞凋亡的抗癌特性,并可抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。 展开更多
关键词 二苯乙烯苷 口腔鳞状细胞癌 细胞增殖 细胞迁移 细胞凋亡 磷脂肌醇3激酶-蛋白激酶b-雷帕霉素蛋白信号通路
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基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用 被引量:3
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作者 佟雪 梁潇 +2 位作者 宿滋 闫梦璇 段彦苍 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期510-518,共9页
目的研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的关系。方法给6~8周龄雌性大鼠灌服补肾调经Ⅲ号方制备含药血清。将3~4周龄雌性小鼠随机分为A、B组,A组... 目的研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的关系。方法给6~8周龄雌性大鼠灌服补肾调经Ⅲ号方制备含药血清。将3~4周龄雌性小鼠随机分为A、B组,A组灌胃蒸馏水,B组序贯灌胃补肾调经系列方(Ⅱ号方和Ⅲ号方),各灌胃12 d。第11天腹腔注射孕马血清促性腺激素(5 IU/只),48 h后剥离卵巢,取出卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养。将A组COCs分为空白对照组和抑制剂组(25μmol/L LY294002),B组分为补肾组(10%补肾调经Ⅲ号方含药血清)和补肾加抑制剂组(10%补肾调经Ⅲ号方含药血清+25μmol/L LY294002)。体外培养18 h后,在显微镜下统计各组第一极体排出量并计算排出率。收集COCs, RT-PCR法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3K、AKT、mTOR mRNA的表达,免疫荧光染色法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3K、AKT、mTOR、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白表达。结果第一极体排出率补肾组高于空白对照组(P<0.05),抑制剂组低于空白对照组(P<0.05),补肾加抑制剂组低于补肾组(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均升高(P<0.05),Bax mRNA表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均下降(P<0.05),Bax mRNA表达升高(P<0.05)。与补肾组比较,补肾加抑制剂组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均降低(P<0.05),Bax mRNA表达升高(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,各组间PI3K、AKT、mTOR蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达� 展开更多
关键词 补肾调经系列方 卵丘-卵母细胞复合体 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路 小鼠 大鼠
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类风湿关节炎患者B细胞活化与磷脂酰肌3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路相关性研究
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作者 汪元 黄传兵 +6 位作者 陈瑞莲 王桂珍 黄旦 林章英 潘慧 孙思凌 王露琳 《中医临床研究》 2022年第20期13-16,共4页
目的:研究类风湿关节炎患者外周血B细胞活化与磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(Mechanistic Target of Rapamycin Kinase,mTOR)信号通路的相关性。方法:选取符合诊断标准的类风湿... 目的:研究类风湿关节炎患者外周血B细胞活化与磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(Mechanistic Target of Rapamycin Kinase,mTOR)信号通路的相关性。方法:选取符合诊断标准的类风湿关节炎患者30例和对照组20例健康人群纳入研究。采用流式细胞术检测B细胞绝对数目、B细胞百分比(Percentage of B cells,B%)、CD19^(+)CD81^(+)B细胞及CD19^(+)CD40^(+)B细胞表达水平,酶联免疫吸附试验法检测血清白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-10、PI3K、Akt、mTOR C1、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶(Phosphoinositide-Dependent Protein Kinase,PDK)1、磷酸酶及张力蛋白同源物(Phosphatase And Tensin Homolog,PTEN)、抗环瓜氨酸多肽抗体的水平,常规检测类风湿因子、免疫球蛋白M、免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、补体第三因子、补体第四因子、C-反应蛋白、红细胞沉降率水平,并收集同期临床资料。结果:与对照组相比,30例类风湿关节炎患者外周血中类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、免疫球蛋白G、红细胞沉降率、C-反应蛋白水平均显著升高(P<0.01),全血中B细胞绝对数目、B%、CD19^(+)CD81^(+)B细胞及CD19^(+)CD40^(+)B细胞表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),血清IL-1β、IL-2及IL-6水平显著升高(P<0.01),IL-10水平显著下降(P<0.01);30例类风湿关节炎患者外周血中PI3K、Akt、mTORC1和PDK1水平均显著升高(P<0.01);PTEN水平均显著下降(P<0.01)。相关性分析显示,类风湿关节炎患者B细胞绝对数目与类风湿因子、红细胞沉降率、C-反应蛋白、IL-1β、IL-2、PI3K、Akt、mTORC1、PDK1成正相关(P<0.05或P<0.01),与PTEN水平成负相关(P<0.01);B%与免疫球蛋白G、IL-6、Akt水平成正相关(P<0.01);CD19^(+)CD81^(+)B细胞的表达水平与IL-2、IL-6、PI3K、mTORC1水平成正相关(P<0.05或P<0.01);CD19^(+)CD40^(+)B细胞的表达水平与类风湿因子、IL-1β、PI3K、PDK1水平成正 展开更多
关键词 类风湿关节炎 b细胞活化 磷脂肌醇3激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白 炎症因子
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长链非编码RNA LINC01235通过调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路影响胃癌进展的机制 被引量:1
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作者 程华 张卓奇 +5 位作者 张牙 李杰 彭鑫宇 问明 郭剑 张爱民 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期1503-1506,共4页
目的探讨长链非编码RNA LINC01235在胃癌中的表达及其作用机制。方法肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库检测LINC01235在胃癌及癌旁组织的表达;分析LINC01235对胃癌患者预后的价值;收集新鲜胃癌及癌旁组织验证生物信息学结果。调控人胃癌细胞株... 目的探讨长链非编码RNA LINC01235在胃癌中的表达及其作用机制。方法肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库检测LINC01235在胃癌及癌旁组织的表达;分析LINC01235对胃癌患者预后的价值;收集新鲜胃癌及癌旁组织验证生物信息学结果。调控人胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901中LINC01235表达,检测细胞增殖、侵袭和转移能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测调控LINC01235的表达对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。应用SAS 9.4软件进行统计学分析,t检验分析实验结果。结果TCGA数据分析表明与癌旁组织比较,LINC01235在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织(6.340±1.705比3.115±1.558,Z=10.026,P<0.05),且LINC01235高表达的患者预后较差(χ^(2)=6.902,P<0.05)。临床标本验证结果与生物信息学结果相符。蛋白质印迹结果显示,胃癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化雷帕霉素靶(p-mTOR)的表达水平高于癌旁组织(p-Akt为1.154±0.459比0.326±0.150,t=9.392,P<0.01;p-mTOR为0.665±0.310比0.270±0.121,t=6.501,P<0.01)。在MGC-803细胞中上调LINC01235后细胞的增殖能力显著比对照组增强(24 h为0.203±0.027比0.142±0.042,t=2.993,P<0.05;48 h为0.503±0.106比0.247±0.064,t=5.064,P<0.01;72 h为0.917±0.118比0.55±0.11,t=5.573,P<0.01)、侵袭和转移能力显著比对照组增强(139.333±22.151比57.833±15.639,t=-7.362,P<0.01;111.667±15.016比73.667±14.024,t=-4.530,P<0.01);在SGC-7901细胞中抑制LINC01235的表达后细胞的增殖能力显著比对照组降低(48 h为0.425±0.133比0.667±0.091,t=-3.678,P<0.01;72 h为0.565±0.157比0.945±0.200,t=-3.661,P<0.01)、侵袭和转移能力显著比对照组降低(50.667±13.231比141.167±15.224,t=10.991,P<0.01;57.667±14.348比166.167±25.631,t=9.048,P<0.01)。在MGC-803细胞中上调LINC01235表达后p-Akt、p-mTOR、细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)表达比对照组增强(p-Akt为0.851±0.138比0.366±0.138, 展开更多
关键词 胃癌 长链非编码RNA 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白信号通路
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前列地尔调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制心肌缺血再灌注损伤诱导的自噬 被引量:3
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作者 郑伟民 詹智晖 +3 位作者 吴钟伟 刘超权 陈运起 李堪董 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第13期3280-3285,共6页
目的探讨前列地尔[又称前列腺素(PG)E1]对心肌缺血再灌注损伤的影响及其可能的作用机制。方法进行原代乳鼠心肌细胞的分离和培养,将细胞随机分为对照组、缺氧/复氧(H/R)组、PGE1组和PGE1+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂(LY294002)组,除... 目的探讨前列地尔[又称前列腺素(PG)E1]对心肌缺血再灌注损伤的影响及其可能的作用机制。方法进行原代乳鼠心肌细胞的分离和培养,将细胞随机分为对照组、缺氧/复氧(H/R)组、PGE1组和PGE1+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂(LY294002)组,除对照组外,其余组进行H/R处理,CCK-8检测细胞活力;试剂盒检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)产生和凋亡;Western印迹检测细胞微管相关蛋白轻链(LC)3、自噬效应蛋白(Beclin)1、p62、磷酸化(p)-PI3K、PI3K、p-蛋白激酶B(AKT)、AKT、p-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和mTOR蛋白表达。结果成功分离培养原代乳鼠心肌细胞。与对照组相比,H/R组心肌细胞增殖能力显著降低,LDH、CK-MB、MDA和ROS水平显著升高,SOD水平显著降低,凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达显著升高,p62、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低(均P<0.05);与H/R组相比,PGE1组心肌细胞增殖能力显著升高,LDH、CK-MB、MDA和ROS水平显著降低,SOD水平显著升高,凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达显著降低,p62、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达显著升高(均P<0.05);与PGE1组相比,PGE1+LY294002组心肌细胞增殖能力显著降低,LDH、CK-MB、MDA和ROS水平显著升高,SOD水平显著降低,凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达显著升高,p62、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论PGE1可改善心肌细胞H/R损伤,抑制H/R诱导的自噬,该作用是通过激活PI3K/AKT/mTOR通路实现的。 展开更多
关键词 前列地尔 缺血再灌注损伤 心肌细胞 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路 自噬
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沉默CENP-N基因表达对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响 被引量:3
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作者 张玉扬 赵津平 +1 位作者 张丹 翟振华 《广东医学》 CAS 2022年第4期426-433,共8页
目的探究着丝粒蛋白-N(CENP-N)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能机制。方法利用基因表达谱交互式分析网站(GEPIA)中的癌症基因组图谱(TCGA)数据分析CENP-N基因在503例胃癌组织和125例癌旁组织中的表达水平;以收集的143例胃癌患... 目的探究着丝粒蛋白-N(CENP-N)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能机制。方法利用基因表达谱交互式分析网站(GEPIA)中的癌症基因组图谱(TCGA)数据分析CENP-N基因在503例胃癌组织和125例癌旁组织中的表达水平;以收集的143例胃癌患者癌组织、癌旁组织以及人胃癌细胞株SNU-1、HS-746T、AGS、MGC-803及人胃黏膜细胞GES1为研究对象,qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平,Western blot检测CENP-N蛋白表达;体外培养胃癌SNU-1细胞株,分为空白对照组、siRNA-NC组(阴性对照组)、CENP-N-siRNA组(沉默CENP-N表达组)、通路激活剂组(CENP-N-siRNA+740Y-P组)。qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平;CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况;免疫印迹法检测细胞增殖相关核抗原(PCNA)、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]及磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路相关蛋白表达情况。结果利用GEPIA网站发现CENP-N mRNA在胃癌组织、癌旁组织中的表达分别为4.25±0.36、1.45±0.21,差异有统计学意义(P<0.05);与癌旁组织比较,胃癌组织中CENP-N mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与GES1细胞比较,CENP-N mRNA在胃癌SNU-1、HS-746T、AGS、MGC-803细胞中的表达水平显著升高,且CENP-N mRNA在SNU-1细胞中的表达水平最高,因此,选择SNU-1细胞进行后续实验研究。细胞成功转染;与空白对照组、siRNA-NC组比较,CENP-N-siRNA组SNU-1细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达显著降低(P<0.05);与CENP-N-siRNA组比较,通路激活剂组SNU-1细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达显著升高(P<0.05)。结论沉默CENP-N表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路实现的。 展开更多
关键词 着丝粒蛋白-N 胃癌 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/哺乳动物雷帕霉素蛋白通路 增殖 凋亡
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miR-383-3p靶向PTEN/PI3K/Akt/mTOR信号通路对冠心病大鼠内皮细胞凋亡的影响
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作者 蔡贵东 靳孟妮 +4 位作者 王小军 王宗社 舒瑞朝 段朝阳 马恩 《河北医学》 CAS 2022年第12期1943-1949,共7页
目的:探究微小RNA-383-3p(miR-383-3p)靶向调节人第10号染色体缺失的磷酸酶/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PTEN/PI3K/AKT/mTOR)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞凋亡的影响。方法:将SD大鼠分为control组、CHD组、mimic... 目的:探究微小RNA-383-3p(miR-383-3p)靶向调节人第10号染色体缺失的磷酸酶/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PTEN/PI3K/AKT/mTOR)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞凋亡的影响。方法:将SD大鼠分为control组、CHD组、mimic NC组、miR-383-3p mimic组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1-PTEN组,每组15只;除control组外其余组大鼠通过高脂饲料喂养及垂体后叶素注射构建CHD模型,造模前24h,将慢病毒液或质粒载体注射到相应组大鼠中;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测冠状动脉miR-383-3p表达;全自动生化分析仪测定大鼠血脂水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)水平;HE染色及TUNEL法观察冠状动脉组织病理变化及内皮细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-383-3p与PTEN靶向关系;Western blot检测冠状动脉组织Bcl-2、Bax及PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达。结果:与control组相比,CHD组大鼠miR-383-3p、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著减少,三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞凋亡指数(AI)、Bax、PTEN表达显著升高(P<0.05);与CHD组相比,miR-383-3p mimic组miR-383-3p、HDL-C、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著增加,TG、LDL-C、TC、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞AI、Bax、PTEN表达显著减少(P<0.05);过表达PTEN可逆转miR-383-3p高表达对CHD大鼠内皮细胞凋亡及功能损伤的改善作用;PTEN是miR-383-3p的靶向基因。结论:miR-383-3p可通过靶向抑制PTEN表达来激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,与抑制CHD大鼠内皮细胞凋亡密切相关。 展开更多
关键词 微小RNA-383-3p 人第10号染色体缺失的磷酸酶/磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶b/雷帕霉素蛋白 冠状动脉粥样硬化性心脏病 凋亡
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