bHLH转录因子的磷酸化调控植物生理功能的研究进展 被引量：1

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作者 刘铖霞 孙宗艳 +2 位作者 罗云波 朱鸿亮 曲桂芹 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期26-34,共9页

bHLH转录因子是植物体内第二大类转录因子,在植物生长发育和胁迫反应的转录调控网络中扮演着非常重要的角色。磷酸化作为蛋白质翻译后重要的调控方式,影响转录因子的转录活性、定位、蛋白间互作、稳定性。为深入了解磷酸化对bHLH转录因... bHLH转录因子是植物体内第二大类转录因子,在植物生长发育和胁迫反应的转录调控网络中扮演着非常重要的角色。磷酸化作为蛋白质翻译后重要的调控方式,影响转录因子的转录活性、定位、蛋白间互作、稳定性。为深入了解磷酸化对bHLH转录因子的影响,本文对近年来bHLH家族成员的磷酸化研究进展进行综述,包括bHLH转录因子的结构、分类、功能以及磷酸化位点上的突变对其生理及生化功能的改变,为从磷酸化调控角度提升农作物的营养利用效率、品质和抗逆性等农艺性状提供理论依据。 展开更多

关键词 碱性螺旋-环-螺旋转录因子 磷酸化 生理功能

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大鼠少突胶质细胞转录因子2基因真核表达载体的构建

2

作者 欧阳长杰 段线花 +1 位作者 戚举星 曲德伟 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第42期7871-7876,共6页

背景:碱性螺旋-环-螺旋转录因子少突胶质细胞转录因子2在脊髓的少突胶质细胞的分化过程中起着关键性的作用。目的:构建大鼠少突胶质细胞转录因子2基因重组真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达。方法:从新生大鼠脊髓组织中提取总RNA,... 背景:碱性螺旋-环-螺旋转录因子少突胶质细胞转录因子2在脊髓的少突胶质细胞的分化过程中起着关键性的作用。目的:构建大鼠少突胶质细胞转录因子2基因重组真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达。方法:从新生大鼠脊髓组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将少突胶质细胞转录因子2cDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-Olig2以脂质体法转染至COS-7细胞中,反转录PCR鉴定少突胶质细胞转录因子2mRNA的表达,免疫印迹法检测少突胶质细胞转录因子2蛋白质表达水平。结果与结论:克隆了少突胶质细胞转录因子2的cDNA,并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-Olig2,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;转染72h时免疫印迹分析显示,COS-7/pEGFP-N1-Olig2实验组COS-7细胞表达Olig2-GFP融合蛋白。提示实验成功构建pEGFP-N1-Olig2真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达。 展开更多

关键词 少突胶质细胞转录因子2 重组 质粒 基因表达 转染 COS-7细胞 碱性螺旋-环-螺旋转录因子 组织构建 组织工程

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碱性螺旋-环-螺旋转录因子和肌肉增强因子调节心脏发育基因心钠素

3

作者 李勇 臧明玺 +2 位作者 任霞 李卫新 陈祥贵 《中国生育健康杂志》 2005年第2期99-102,共4页

目的探讨碱性螺旋-环-螺旋转录因子(dHAND)和肌肉增强因子(MEF2C)调控心脏特异基因心钠素(ANP)表达及其分子机制。方法用脂质体转染HeLa细胞和H9c2细胞,48h后测荧光素酶活性。结果复合转染pcDNA3+dHAND、+MEF2C+ANP的HeLa细胞提取物荧... 目的探讨碱性螺旋-环-螺旋转录因子(dHAND)和肌肉增强因子(MEF2C)调控心脏特异基因心钠素(ANP)表达及其分子机制。方法用脂质体转染HeLa细胞和H9c2细胞,48h后测荧光素酶活性。结果复合转染pcDNA3+dHAND、+MEF2C+ANP的HeLa细胞提取物荧光素酶活性大约是复合转染pcDNA3+ANP的HeLa细胞提取物荧光素酶活性的13倍,差异有显著性(P<0.05),在H9c2细胞中复合转染dHAND与MEF2C可使ANP基因启动子的转录活性提高7倍。结论在HeLa和H9c2细胞中dHAND与MEF2C能协同激活ANP基因的转录。 展开更多

关键词 碱性螺旋-环-螺旋转录因子 肌肉增强因子 调节 心脏发育 心钠素 心肌肥大 发病机制

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子宫内膜癌组织Runx3、Twist1表达与临床病理特点及预后的关系 被引量：8

4

作者 王劲红 杜林 +2 位作者 蒋萍 陈英超 姜娟 《山东医药》 CAS 2020年第13期5-8,共4页

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中RUNX家族转录因子3(Runx3)、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)表达与临床病理参数和预后的关系。方法选择80例EC患者,通过荧光定量PCR法检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中Runx3、Twist1表达,比较... 目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中RUNX家族转录因子3(Runx3)、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)表达与临床病理参数和预后的关系。方法选择80例EC患者,通过荧光定量PCR法检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中Runx3、Twist1表达,比较两种组织Runx3、Twist1表达量,并对Runx3、Twist1表达与子宫内膜癌患者临床病理学特征之间的关系进行分析,采用Kaplan-Meier法分析不同Runx3、Twist1表达与患者预后生存的关系。结果与癌旁组织相比,EC组织中Runx3表达降低,Twist1表达增高(P均<0.05)。EC组织中Runx3和Twist1表达呈负相关(r=-0.611,P<0.05)。EC组织中Runx3、Twist1表达与肿瘤临床分期、肿瘤分化程度有关(P均<0.05),而与年龄、病理类型、肿瘤大小、肌层浸润深度及淋巴结转移无关(P均>0.05)。低Runx3表达组3年生存率低于高Runx3表达组,高Twist1表达组3年生存率低于低Twist1表达组(P均<0.05)。结论EC中Runx3表达下调,Twist1表达上调,两者表达与肿瘤分期、肿瘤分化程度及预后有关。 展开更多

关键词 子宫内膜肿瘤 RUNX家族转录因子3 Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1 临床特点 预后

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Twist1与Jagged1基因在人卵巢癌A2780细胞顺铂耐药中的作用 被引量：5

5

作者 杨将 邢辉 +4 位作者 洪莉 卢丹华 李倩男 刘耀丹 何松明 《中华实用诊断与治疗杂志》 2017年第11期1067-1071,共5页

目的探讨碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist basic helix-loop-helix transcription factor 1,Twist1)与Notch信号通路配体Jagged1(Notch ligand Jagged-1,Jagged1)在人卵巢癌A2780细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用。方法实验分为敏... 目的探讨碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist basic helix-loop-helix transcription factor 1,Twist1)与Notch信号通路配体Jagged1(Notch ligand Jagged-1,Jagged1)在人卵巢癌A2780细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用。方法实验分为敏感组(人卵巢癌DDP敏感A2780细胞),耐药组(DDP耐药A2780/DDP细胞),转染组[应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术转染A2780/DDP细胞,干扰Twist1基因表达为A2780/DDP/si-Twist1、干扰Jagged1基因表达为A2780/DDP/si-Jagged1、空转不干扰Twist1及Jagged1基因表达为A2780/DDP/si-NC]。采用Western blot法检测3组Twist1、Jagged1蛋白表达水平;采用CCK-8比色法检测耐药组和转染组细胞DDP敏感性,生长曲线分析耐药组和转染组细胞增殖状况,流式细胞仪检测耐药组和转染组细胞凋亡情况。结果耐药组A2780/DDP细胞Twist1和Jagged1蛋白表达水平均高于敏感组A2780细胞(P<0.05);转染组A2780/DDP/si-Twist1细胞Twist1和Jagged1蛋白表达水平均低于耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞(P<0.05);转染组A2789/DDP/si-Jagged1细胞Jagged1蛋白表达水平低于耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞(P<0.05),Twist1蛋白表达水平与耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞比较差异无统计学意义(P>0.05);转染组A2780/DDP/si-Twist1细胞对DDP的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)[(19.53±0.32)mg/L]低于耐药组A2780/DDP细胞[(30.57±0.27)mg/L]和转染组A2780/DDP/si-NC细胞[(29.61±0.35)mg/L],细胞凋亡率[(34.74±3.15)%]高于耐药组A2780/DDP细胞[(21.56±1.99)%]和转染组A2780/DDP/si-NC细胞[(23.49±2.27)%](P<0.05)。结论 Twist1可通过调控Jagged1基因表达,介导人卵巢癌A2780细胞的增殖和凋亡,参与对DDP耐药的调节。 展开更多

关键词 卵巢癌 A2780细胞 碱性螺旋-环-螺旋转录因子1 JAGGED1 小干扰RNA 顺铂 耐药

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miR-223对大鼠心肌细胞中纤维化相关信号通路分子的干预作用及机制 被引量：5

6

作者 张多多 李宗奇 孔晶晶 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第29期2303-2308,共6页

目的探讨miR-223对大鼠心肌细胞纤维化相关通路的保护作用及对Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)、转化生长因子β1受体2(TGFBR2)的表达调控。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2,以TGF-β人工诱导心肌细胞纤维化相关通路活化,分... 目的探讨miR-223对大鼠心肌细胞纤维化相关通路的保护作用及对Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)、转化生长因子β1受体2(TGFBR2)的表达调控。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2,以TGF-β人工诱导心肌细胞纤维化相关通路活化,分为模型组、miR-223组(转染miR-223过表达慢病毒)以及miR-223-NC组(转染miR-223-NC慢病毒),同时设立正常细胞对照组。免疫组化检测α-SMA的表达情况;实时荧光定量PCR(real-time PCR)测定心肌细胞miR-223、collagenⅠ、collagenⅢ、Twist1、TGFBR2 mRNA表达水平;Western印迹法检测心肌细胞Twist1、TGFBR2、collagenⅠ、collagenⅢ及α-SMA蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-223对Twist1、TGFBR23′UTR的靶向调控。结果miR-223组α-SMA阳性心肌细胞平均吸光度(0.089±0.013)明显低于模型组和miR-223-NC组(0.134±0.018,0.132±0.016);miR-223组心肌collagenⅠ、collagenⅢ、Twist1、TGFBR2 mRNA表达水平与模型组及miR-223-NC组比较显著下降,且差异具有统计学意义(P<0.05);Twist1、TGFBR2、collagenⅠ、collagenⅢ及α-SMA蛋白水平较模型组及miR-223-NC组显著下降,且差异具有统计学意义(P<0.05);Twist1、TGFBR23′UTR野生型双荧光素酶报告质粒与miR-223 mimics共转染293T细胞,荧光素酶活性均显著降低[(0.48±0.06,0.51±0.07)比(0.92±0.17,0.94±0.12)]。结论miR-223可能通过下调Twist1、TGFBR2基因的表达抑制心肌细胞中纤维化相关信号通路活化。 展开更多

关键词 微小RNA-223 心肌纤维化 Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1 转化生长因子β1受体2

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TMPRSS4、TWIST1在早期宫颈癌组织中的表达水平及临床意义

7

作者 方芳 王春佟 吕丹 《检验医学与临床》 CAS 2024年第11期1573-1578,共6页

目的分析跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)、碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(TWIST1)在早期宫颈癌组织中的表达水平及临床意义。方法选取2019年10月至2021年10月该院收治的120例早期宫颈癌患者作为早期宫颈癌组,117例宫颈上皮内瘤变患者作为上皮... 目的分析跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)、碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(TWIST1)在早期宫颈癌组织中的表达水平及临床意义。方法选取2019年10月至2021年10月该院收治的120例早期宫颈癌患者作为早期宫颈癌组,117例宫颈上皮内瘤变患者作为上皮内瘤变组。另选取同期在该院进行宫颈组织活检,且活检结果为阴性的117健康者作为正常组。采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫组织化学法分别检测TMPRSS4信使RNA(mRNA)和TWIST1 mRNA表达水平及TMPRSS4蛋白和TWIST1蛋白表达情况。收集上皮内瘤变组和早期宫颈癌组患者的宫颈脱落细胞并提取其细胞中的DNA进行高危型人乳头瘤病毒(HPV)-DNA检测。结果早期宫颈癌组TMPRSS4 mRNA和TWIST1 mRNA表达水平高于上皮内瘤变组和正常组,且上皮内瘤变组高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。早期宫颈癌组TMPRSS4蛋白和TWIST1蛋白阳性表达率高于上皮内瘤变组和正常组,且上皮内瘤变组高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。早期宫颈癌组中,TMPRSS4蛋白阳性患者有79例,TMPRSS4蛋白阴性患者有41例。TWIST1蛋白阳性患者有74例,TWIST1蛋白阴性患者有46例。TMPRSS4蛋白阳性患者中国际妇产科联盟(FIGO)分期为ⅡA期、淋巴结转移和分化程度为低分化患者比例高于TMPRSS4蛋白阴性患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。TWIST1蛋白阳性患者中FIGO分期为ⅡA期、淋巴结转移和分化程度为低分化患者比例高于TWIST1蛋白阴性患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。从上皮内瘤变组和早期宫颈癌组患者中检测出高危型HPV-DNA阳性患者164例,高危型HPV-DNA阴性患者73例。高危型HPV-DNA阳性患者TMPRSS4蛋白、TWIST1蛋白阳性表达率高于高危型HPV-DNA阴性患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在早期宫颈癌组织中TMPRSS4和TWIST1呈高表达水平,且和高危型HPV感染密切相关。 展开更多

关键词 宫颈癌 跨膜丝氨酸蛋白酶4 碱性螺旋-环-螺旋转录因子1 高危型人孔头瘤病毒 相关性

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信号转导和转录活化因子3和碱性螺旋-环-螺旋转录因子1在卵巢恶性上皮肿瘤中的表达 被引量：3

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作者 洪莉 杨将 +4 位作者 邢辉 卢丹华 汤剑明 李秉枢 郭凤琴 《中国医药导报》 CAS 2017年第24期118-121,193,共5页

目的探讨信号转导和转录活化因子3(STAT3)和碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)在卵巢恶性上皮肿瘤中的表达,并分析其表达失调与卵巢癌发生和发展的关系。方法收集2015年3月~2016年12月于武汉大学人民医院行手术的49例卵巢恶性上皮肿瘤... 目的探讨信号转导和转录活化因子3(STAT3)和碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)在卵巢恶性上皮肿瘤中的表达,并分析其表达失调与卵巢癌发生和发展的关系。方法收集2015年3月~2016年12月于武汉大学人民医院行手术的49例卵巢恶性上皮肿瘤患者和14例卵巢良性肿瘤患者的组织,应用免疫组化SP法检测STAT3和Twist1蛋白的表达情况,比较其在早期卵巢癌和晚期卵巢癌中的表达差异,并作Pearson相关性分析。结果STAT3和Twist1在卵巢癌中的阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤,差异有统计学意义(P<0.05);二者在晚期卵巢癌患者中的阳性表达率明显高于早期卵巢癌,差异有统计学意义(P<0.05);Twist1与STAT3在早期和晚期卵巢癌中的阳性表达均呈正相关(r=0.653、0.798,均P<0.05)。结论 STAT3和Twist1在卵巢癌的发生、发展和恶化中发挥着重要作用,其阳性表达率与卵巢癌FIGO分期相关,其机制可能是通过上皮-间质转化实现的。 展开更多

关键词 信号转导和转录活化因子3 碱性螺旋-环-螺旋转录因子1 相关性 卵巢恶性上皮肿瘤

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脑缺血再灌注后少突胶质细胞转录因子Olig1、轴突生长抑制因子Nogo—A基因表达与白质损伤 被引量：2

9

作者 高晓玉 王得新 张拥波 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期808-812,共5页

目的检测少突胶质细胞转录因子Oligl、轴突生长抑制因子Nogo—A在大鼠脑缺血再灌注后不同时间点基因表达的变化规律，观察白质损伤的病理变化，探讨两者之间的关系。方法利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血（middle cerebral artery occl... 目的检测少突胶质细胞转录因子Oligl、轴突生长抑制因子Nogo—A在大鼠脑缺血再灌注后不同时间点基因表达的变化规律，观察白质损伤的病理变化，探讨两者之间的关系。方法利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血（middle cerebral artery occlusion，MCAO）再灌注模型，实时定量PCR方法（relative quantification PCR，RQ—PCR）检测各时问点Oligl、Nogo—A在大脑损伤白质区的基因表达，髓鞘快蓝-高碘酸雪夫（LFB—PAS）染色法标记大脑神经髓鞘，Bielschowsky银染法标记大脑神经轴突，并计算缺血侧与健侧髓鞘染色的积分吸光度（IAs）比值以代表白质受损程度。结果（1）Olig1：Olig1在缺血再灌注不同时间点，在大脑白质区的基因表达量不同。缺血再灌注6h Oligl表达量减低至假手术组的83％（与假手术组相比，q=2．074，P=0．042），7d时表达量降至最低，14d时恢复至基础水平，21d时表达量升高至假手术组的1．52倍（与假手术组相比，q=6．362，P〈0．01，差异具有统计学意义）。Nogo—A：Nogo-A在缺血再灌注不同时间点，在大脑白质区的基因表达量不同。Nogo-A基因表达在缺血再灌注1d时开始减低，表达量降至假手术组的84％（与假手术组相比，q=2．230，P=0．029），7d时降至最低，14～21d表达量开始上调，21d时表达量上调至假手术组的66％（与假手术组相比，q=4．681，P〈0．01）。（2）缺血再灌注不同时间点髓鞘染色／As比值不同，再灌注6h时开始下降（0．91±0．05），与假手术组（1．03±0．09）相比，q=3．829，P〈0．01；12h时有空洞形成，再灌注14d髓鞘损伤达到高峰，IAs比值降到最低（0．31±0．07），髓鞘脱失明显；21d的髓鞘IAs比值（0．30±0．06）与14d（O．31±0．07）相比较差异无统计学意义（g=0．257，P=0．798）。轴突变化规律与髓鞘基本相同。结论Oligl、Nogo—A在脑缺血再灌注 展开更多

关键词 脑缺血 再灌注损伤 神经组织蛋白质类 碱性螺旋-环-螺旋转录因子类 髓磷脂蛋白质类

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微小RNA-466靶向调控Twist1影响宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移 被引量：2

10

作者 李莉 常春玲 魏海波 《安徽医药》 CAS 2022年第1期156-160,共5页

目的研究微小RNA-466(miR-466)靶向调控碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)对宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移的影响和机制。方法本研究起止时间为2019年1—10月。宫颈癌Caski、SiHa、C33A细胞购自上海沪震生物科技有限公司;正常宫颈上皮End1/... 目的研究微小RNA-466(miR-466)靶向调控碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)对宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移的影响和机制。方法本研究起止时间为2019年1—10月。宫颈癌Caski、SiHa、C33A细胞购自上海沪震生物科技有限公司;正常宫颈上皮End1/E6E7细胞购自上海雅吉生物科技有限公司。定量即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)方法测定宫颈癌细胞中miR-466表达变化。在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-466模拟物(miR-466 mimics),噻唑蓝(MTT)方法检测细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力变化,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中波形蛋白(Vimentin)和上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白表达变化。在线靶基因预测软件预测miR-466的靶基因可能为Twist1,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将Twist1过表达载体和miR-466 mimics共转染到宫颈癌SiHa细胞中,检测细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。结果正常宫颈上皮End1/E6E7细胞和宫颈癌Caski、SiHa、C33A细胞中miR-466表达水平依次为:(1.00±0.09)、(0.58±0.06)、(0.20±0.03)、(0.45±0.04);宫颈癌细胞系Caski、SiHa、C33A中miR-466表达水平低于End1/E6E7细胞,差异有统计学意义(P<0.0001)。与miR-NC组比较,miR-466组SiHa细胞细胞吸光度(0.29±0.04)比(0.45±0.02)降低,细胞侵袭数目[(81.46±6.35)个比(117.95±11.62)个]和迁移数目[(90.17±7.43)个比(147.15±12.04)个]下降,Vimentin蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.001)。与miR-466+pCDNA3.1组比较,miR-466+pCDNA3.1-Twist1组宫颈癌SiHa细胞吸光度(0.41±0.04)比(0.30±0.03)升高,细胞迁移数目[(127.34±10.26)个比(93.05±6.84)个]和侵袭数目[(108.94±10.24)个比(83.26±5.17)个]增加,Vimentin、Twist1蛋白表达增多,E-cadherin蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。上调miR-466靶向抑制Twist1表达。结论miR-466靶向抑制Twist1降低宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移能力。 展开更多

关键词 子宫肿瘤 碱性螺旋-环-螺旋转录因子1 miR-466 波形蛋白 迁移

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低氧环境下低氧诱导因子2α对大鼠肾小球内皮细胞细胞间紧密连接蛋白表达和细胞通透性的影响 被引量：1

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作者 罗朋立 王妍君 +1 位作者 杨艳燕 杨佳佳 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期766-771,共6页

目的探讨低氧环境下大鼠肾小球内皮细胞（rGENC）中低氧诱导因子2仅（HIF-2α）对细胞间紧密连接蛋白闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白1（ZO-1）的表达和细胞通透性的影响。方法10％FBS的DMEM培养基37℃5％CO2体外培养rGENC，待细胞... 目的探讨低氧环境下大鼠肾小球内皮细胞（rGENC）中低氧诱导因子2仅（HIF-2α）对细胞间紧密连接蛋白闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白1（ZO-1）的表达和细胞通透性的影响。方法10％FBS的DMEM培养基37℃5％CO2体外培养rGENC，待细胞生长达到80％时进行不同分组：（1）给予不同时间（0、12、24、48h）低氧处理，即置于5％o2，5％CO2和90％N2低氧培养箱培养；（2）分为正常对照组、低氧组、阴性对照组（转染空载体＋低氧）、低氧转染组（转染HIF-2α siRNA＋低氧）培养24h。慢病毒转染空载体或HIF-2α siRNA；Western印迹检测各组细胞中occludin、ZO-1和HIF-2α蛋白表达。电阻仪检测跨上皮细胞电阻（TEER）。结果随着缺氧时间的延长，低氧组细胞中HIF-2α表达逐渐增加，而occludin和ZO-1蛋白表达逐渐降低（与对照组比较，均P〈0．01），均呈时间依赖性。并且低氧组TEER低于正常对照组（P〈0．01），其细胞通透性增加。慢病毒转染后筛选出稳定抑制HIF-2α表达细胞株。与低氧组比较，低氧转染组细胞中HIF-2α表达降低，occludin和ZO-1蛋白表达增加，TEER升高（均P〈0．01）；阴性对照组上述各项目与低氧组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论低氧环境下rGENC通过上调HIF-2α表达来降低细胞间紧密连接蛋白occludin和ZO-1的表达，进而增加细胞通透性。 展开更多

关键词 细胞低氧 碱性螺旋-环-螺旋转录因子类 细胞膜通透性 紧密连接蛋白 低氧诱导因子2α

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卡那霉素联合速尿致聋豚鼠的Math1基因治疗 被引量：1

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作者 张贤芬 杨仕明 +7 位作者 韩东一 郭维维 孙建和 高举 孙东绣 孙爱玲 李臻 魏晓娜 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期584-588,共5页

目的 观察卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠耳蜗鼓阶导入Math1基因后的形态学及功能改变,探讨Mathl基因治疗药物中毒性耳聋的可行性.方法 健康成年豚鼠经硫酸卡那霉素（500 mg/kg）和速尿（50 mg/kg）联合致聋,将听性脑干反应（ABR）反应阈＞... 目的 观察卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠耳蜗鼓阶导入Math1基因后的形态学及功能改变,探讨Mathl基因治疗药物中毒性耳聋的可行性.方法 健康成年豚鼠经硫酸卡那霉素（500 mg/kg）和速尿（50 mg/kg）联合致聋,将听性脑干反应（ABR）反应阈＞95 dB SPL的豚鼠按随机数字表法分为空白对照组（不做任何处置,3只）,手术对照组（右耳单纯鼓阶钻孔,3只）,人工外淋巴液组（右耳鼓阶钻孔导入人工外淋巴液,3只）,单纯病毒载体组[右耳鼓阶钻孔导入携带增强型绿色荧光蛋白基因（enhanced green fluorescent protein,EGFP）的重组腺病毒（Ad.EGFP）,4只]、Math1基因治疗组[右耳鼓阶钻孔导入携带Math1及EGFP基因的重组腺病毒（Ad.Math1-EGFP）,6只].各组动物分别于鼓阶注射前及注射后8周时行ABR测试,结束测试后处死动物,取出耳蜗组织行扫描电镜观察.结果 各组豚鼠不同频率（4、8、16、20 kHz）短纯音ABR阈值在不同检测时间段差异均无统计学意义,组间比较差异亦无统计学意义（P值均＞0.05）.除Math1基因治疗组外,其余各组右耳耳蜗各回毛细胞形态和数目与左耳（自身对照）比较无明显差别.4只Math1基因治疗组豚鼠中,有2只右耳耳蜗第三回内、外毛细胞数量明显比左耳多,其中内毛细胞排列形态较外毛细胞整齐.结论 鼓阶显微注射导入Math1基因能使部分卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠的耳蜗毛细胞修复或再生,但其听觉功能没有改善. 展开更多

关键词 基因疗法 碱性螺旋-环-螺旋转录因子类 耳蜗 听觉丧失 感音神经性 豚鼠

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miR-1271抑制卵巢癌细胞的增殖和转移的研究 被引量：1

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作者 周春燕 范婷婷 易钢 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第14期1811-1815,共5页

目的探讨miR-1271对卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响,及其作用机制。方法实验分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-1271组(转染miR-1271 mimics)、miR-1271+pcDNA3.1组(共转染miR-1271和pcDNA3.1)、miR-1271+pcDNA3.1-Twist1组(共转染miR... 目的探讨miR-1271对卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响,及其作用机制。方法实验分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-1271组(转染miR-1271 mimics)、miR-1271+pcDNA3.1组(共转染miR-1271和pcDNA3.1)、miR-1271+pcDNA3.1-Twist1组(共转染miR-1271和pcDNA3.1-Twist1)。用噻唑蓝法检测细胞活性,用Transwell检测细胞迁移和侵袭情况,用实时定量聚合酶链反应检测miR-1271和碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)mRNA的表达水平,用荧光素酶报告基因检测实验检测miR-1271对Twist1的靶向调控。结果干预24 h后,miR-NC组、miR-1271组、miR-1271+pcDNA3.1组和miR-1271+pcDNA3.1-Twist1组的细胞活性分别为0.71±0.07,0.46±0.04,0.42±0.04和0.57±0.05,迁移细胞数分别为(129.00±9.69),(68.00±3.26),(67.00±3.18)和(98.00±6.85)个,侵袭细胞数分别为(110.00±8.16),(53.00±2.91),(55.00±2.96)和(83.00±4.39)个,miR-1271表达水平分别为0.18±0.02,0.47±0.04,0.46±0.06和0.49±0.01,Twist1 mRNA表达水平分别为0.68±0.06,0.13±0.01,0.11±0.01和0.47±0.03。miR-1271组和miR-1271+pcDNA3.1-Twist1组的细胞活性、迁移和侵袭细胞数、miR-1271和Twist1 mRNA表达水平分别与miR-NC组和miR-1271+pcDNA3.1组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染WT-Twist1后,相较于miR-NC组,miR-1271组的荧光素酶活性显著降低(0.63±0.06 vs 1.12±0.10,P<0.05);而转染MUT-Twist1后,相较于miR-con组,miR-1271组的荧光素酶活性无显著变化(1.09±0.10 vs 1.11±0.10,P>0.05)。结论miR-1271可抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与Twist1有关。 展开更多

关键词 miR-1271 碱性螺旋-环-螺旋转录因子1 卵巢癌 增殖 迁移 侵袭

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B细胞淋巴瘤基因-2、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1转录因子在舌鳞癌中调控上皮-间充质转化的研究 被引量：1

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作者 何清华 段远胜 +3 位作者 岳恺 司海山 王佳鑫 王旭东 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1668-1671,共4页

目的探讨B细胞淋巴瘤基因-2（bcl-2）、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1（Twistl）在舌鳞癌中的表达及对上皮-间充质转化（EMT）调控。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测bcl-2、Twistl及EMT相关因子... 目的探讨B细胞淋巴瘤基因-2（bcl-2）、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1（Twistl）在舌鳞癌中的表达及对上皮-间充质转化（EMT）调控。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测bcl-2、Twistl及EMT相关因子在82例舌鳞癌及24例癌旁组织中的表达，分析bcl-2、Twistl及EMT相关因子与舌鳞癌临床病理特征的关系。Westernblot法检测舌鳞癌细胞株Tb3．1中bcl-2、Twistl及EMT相关因子表达水平；免疫共沉淀证明bcl-2、Twistl的相互作用。结果bcl-2、Twistl在舌鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织，82例癌组织中48例（58．64％）bcl-2、46例（56．10％）Twistl表达呈阳性表达，明显高于癌旁组织[bcl-2：6例（25．00％），P〈0．05，Twistl：4例（16．67％），P〈0．05]；bcl-2、Twistl、神经钙黏素、波形蛋白在中低分化组及淋巴转移组中阳性表达高于在高分化组及非淋巴结转移组中的表达，在中低分化组中的表达分别为28例（70．00％）、28例（70．00％）、30例（75．00％）、30例（75．00％），在淋巴结转移组中的表达分别为29例（72．50％）、29例（72．50％）、29例（72．50％）、31例（77．50％），钙黏着蛋白则与之相反，分别为15例（37．50％）、16例（40．00％）。且Twistl与bcl．2、神经钙黏素、波形蛋白的表达呈正相关（相关系数分别为0．303、0．249、0．348，P〈0．05），与钙黏着蛋白的表达呈负相关（相关系数为-0．547，P〈0．05）；免疫共沉淀结果显示bcl-2、Twistl间可互相作用。结论bcl-2和Twistl在舌鳞癌中高表达，两者形成复合体可能参与调控舌鳞癌EMT过程。 展开更多

关键词 舌鳞状细胞癌 B细胞淋巴瘤基因-2 Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1 上皮-间充质转化 淋巴转移

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水稻bHLH基因家族成员表达模式分析 被引量：8

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作者 李晓星 蒋海雄 +4 位作者 黄青云 夏令 张红心 张大兵 陈亮 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期73-77,共5页

为了研究碱性-螺旋-环-螺旋(basic-helix-loop-helix,bHLH)转录因子的生物学功能,通过对开源数据库TIGR中水稻基因序列的预测,我们找到了水稻中的部分bHLH转录因子家族成员.用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法在水稻根、茎、叶、花... 为了研究碱性-螺旋-环-螺旋(basic-helix-loop-helix,bHLH)转录因子的生物学功能,通过对开源数据库TIGR中水稻基因序列的预测,我们找到了水稻中的部分bHLH转录因子家族成员.用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法在水稻根、茎、叶、花和种子中,对这些成员的表达模式进行分析,然后与已有的拟南芥的表达信息进行比较.结果显示,部分序列相似度较高的bHLH基因,表达模式也较为相似,说明其在功能上可能存在联系. 展开更多

关键词 水稻 拟南芥 碱性-螺旋-环-螺旋转录因子家族 表达分析

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miR-125a靶向转录无调性碱性螺旋环螺旋转录因子8对肺腺癌恶性进展的影响

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作者 姜昌瑞 张楚函 +1 位作者 刘洋 李玥 《中国医科大学学报》 北大核心 2024年第2期114-120,共7页

目的探讨miR-125a通过靶向转录无调性碱性螺旋环螺旋转录因子8(ATOH8)对肺腺癌恶性进展的影响。方法通过在线数据库UALCAN分析ATOH8在肺腺癌中的表达水平及其与患者生存率的相关性,以及miR-125a在肺腺癌中的表达水平及其与肺癌进展的关... 目的探讨miR-125a通过靶向转录无调性碱性螺旋环螺旋转录因子8(ATOH8)对肺腺癌恶性进展的影响。方法通过在线数据库UALCAN分析ATOH8在肺腺癌中的表达水平及其与患者生存率的相关性,以及miR-125a在肺腺癌中的表达水平及其与肺癌进展的关系;提取肺腺癌及癌旁正常组织总RNA,实时PCR分析ATOH8表达水平差异;将ATOH8过表达载体转染至肺腺癌细胞中,CCK-8法检测过表达ATOH8对肺腺癌细胞存活能力的影响;预测与ATOH8的3’非翻译区(UTR)结合的微RNA(miRNA),将miR-125a模拟物和抑制物转染至肺腺癌细胞中,实时PCR和Western blotting检测ATOH8的表达水平变化。结果数据库及实时PCR验证结果显示,ATOH8在肺腺癌组织中显著下调(P<0.01);过表达ATOH8能够显著降低肺腺癌细胞存活能力(P<0.05);高表达ATOH8组患者5年生存率显著升高(P<0.05);miR-125a能够与ATOH8的3’UTR结合,显著抑制其表达(P<0.05)。miR-125a在有吸烟史、中晚期和淋巴转移的肺腺癌患者中显著上调(P<0.05)。结论ATOH8是肺腺癌潜在的抑癌基因,能够抑制肺腺癌细胞存活的能力,影响患者的5年生存率。miR-125a表达水平与吸烟史、肿瘤分期和淋巴转移密切相关。miR-125a能够靶向抑制肺腺癌患者ATOH8表达,是ATOH8在肺腺癌中异常表达的潜在因素。 展开更多

关键词 无调性碱性螺旋环螺旋转录因子8 肺腺癌 miR-125a 细胞存活

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MiR-15a-3p调节Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

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作者 童凯 罗红兰 《蚌埠医学院学报》 CAS 2024年第10期1282-1289,共8页

目的:探讨miR-15a-3p通过调节碱性螺旋环螺旋转录因子1(Twist1)/Jagged1/Notch/Kruppel样因子4(KLF4)信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:采用RT-qPCR实验检测肺腺癌组织、癌旁组织和肺腺癌细胞系(A549、HCC827)... 目的:探讨miR-15a-3p通过调节碱性螺旋环螺旋转录因子1(Twist1)/Jagged1/Notch/Kruppel样因子4(KLF4)信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:采用RT-qPCR实验检测肺腺癌组织、癌旁组织和肺腺癌细胞系(A549、HCC827)及人肺正常上皮细胞(BEAS-2B)中miR-15a-3p和Twist1 mRNA水平。A549细胞分成Control组(未转染)、NC mimics组(转染NC mimics)、miR-15a-3p mimics组(转染miR-15a-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-Twist1组(转染si-Twist1)、miR-15a-3p mimics+pcDNA组(共转染miR-15a-3p mimics和pcDNA)、miR-15a-3p mimics+pc-Twist1组(共转染miR-15a-3p mimics和pc-Twist1)。CCK-8法检测细胞增殖情况;TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告分析实验确定miR-15a-3p和Twist1的靶向作用关系;Western blotting实验检测Twist1、Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达水平。结果:在肺腺癌组织和细胞系中,miR-15a-3p表达降低,Twist1 mRNA表达升高(P<0.05)。A549细胞通过转染miR-15a-3p mimics或si-Twist1,上调miR-15a-3p或下调Twist1后,细胞增殖率(24 h、48 h、72 h)显著下降,TUNEL阳性细胞比显著增加,细胞迁移数和侵袭数显著降低(P<0.05)。Twist1是miR-15a-3p的下游靶基因,被miR-15a-3p直接负调控。Twist1的上调明显逆转了miR-15a-3p过表达对A549细胞进展的抑制作用。miR-15a-3p过表达抑制Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达,而继续上调表达Twist1后Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:miR-15a-3p通过靶向抑制Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路,降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进凋亡。 展开更多

关键词 肺腺癌 miR-15a-3p 碱性螺旋环螺旋转录因子1/Jagged1/Notch/Kruppel样因子4信号通路

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