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硫醇转移酶对高糖诱导大鼠晶状体氧化应激的保护作用 被引量：5
1
作者 于罡 严宏 《国际眼科杂志》 CAS 2014年第11期1927-1930,共4页
目的:观察高浓度葡萄糖对离体大鼠晶状体氧化还原系统的影响,探讨硫醇转移酶(Thioltransferase,TTase)在糖尿病性白内障中抗氧化应激的作用。方法:用不同浓度葡萄糖(35.5,65.5,95.5mmol/L葡萄糖组以及相应的甘露醇等渗对照组)体外培养... 目的:观察高浓度葡萄糖对离体大鼠晶状体氧化还原系统的影响,探讨硫醇转移酶(Thioltransferase,TTase)在糖尿病性白内障中抗氧化应激的作用。方法:用不同浓度葡萄糖(35.5,65.5,95.5mmol/L葡萄糖组以及相应的甘露醇等渗对照组)体外培养大鼠晶状体7d,动态观察晶状体的混浊情况。测定各组晶状体中TTase、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性,以及氧化型谷胱甘肽(GSSG)与总谷胱甘肽(TGSH)的比值。结果:高糖组晶状体早期就已出现雾状混浊,而对照组保持相对透明;在高糖刺激下,TTase活性增加较正常对照组增加,并在含35.5mmol/L葡萄糖的高糖组中最高(1.743±0.20mU/mg protein,P<0.01)。高糖组GSSG/TGSH比值均较正常对照组增加,分别增加2.89倍、2.57倍和2.42倍,其组间互相比较无明显差异,相应等渗对照组和正常对照组比较差异不明显;高糖处理组的SOD和CAT较正常对照组降低,其中SOD分别为正常对照的0.71倍、0.52倍和0.49倍(P<0.05),CAT分别为正常对照的0.47倍、0.56倍、0.50倍(P<0.05),不同葡萄糖浓度处理组间差异无显著性。结论:高糖环境激活晶状体内的抗氧化系统,诱导TTase活性增加,GSSG/T-GSH比例增高,CAT,SOD活性下降,晶状体抗氧化能力降低是糖尿病性白内障形成的重要机制。 展开更多
关键词 糖尿病性白内障 高糖 大鼠晶状体培养 硫醇转移酶
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硫醇转移酶基因敲除小鼠模型的建立及其白内障形成机制 被引量：4
2
作者 张婕 严宏 Marjorie F.Lou 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期420-425,共6页
目的:通过建立硫醇转移酶(TTase)基因敲除小鼠模型,观察其晶状体形态和生化方面随年龄的改变,探讨TTase在晶状体氧化还原系统中的重要作用及参与年龄相关性白内障形成的机制。方法:建立TTase基因敲除小鼠模型并进行基因型鉴定。裂隙灯观... 目的:通过建立硫醇转移酶(TTase)基因敲除小鼠模型,观察其晶状体形态和生化方面随年龄的改变,探讨TTase在晶状体氧化还原系统中的重要作用及参与年龄相关性白内障形成的机制。方法:建立TTase基因敲除小鼠模型并进行基因型鉴定。裂隙灯观察TTase基因敲除型和野生型小鼠白内障随年龄的发生情况。检测小鼠晶状体中谷胱甘肽(GSH)含量。Western blot检测晶状体中氧化产物蛋白质二硫化物(PSSG)的变化。免疫共沉淀法鉴定形成PSSG的蛋白质。观察纯化的重组人晶状体TTase(RHLT)对PSSG的脱硫醇作用。结果:TTase基因敲除型小鼠和野生型小鼠白内障的发生均随年龄而增加,且主要表现为核性白内障。在TTase基因敲除型小鼠中,白内障最早从4月龄开始发生,9月龄时最为显著;野生型小鼠白内障最早从9月龄开始发生,12月龄时最为显著。两种基因型小鼠晶状体中GSH含量均随年龄增加而下降,9月龄TTase基因敲除型小鼠晶状体中GSH下降更为显著,且PSSG的表达明显高于野生型,主要表现为高分子聚合物。免疫共沉淀反应证实形成PSSG的蛋白质包含肌动蛋白(actin)和三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),这种积聚的PSSG可被GSH还原,且与纯化的RHLT反应更有效。结论:TTase基因敲除可以加速小鼠年龄相关性白内障的发生,这与晶状体中PSSG的积聚相关,且形成的PSSG可被TTase脱硫醇,证实TTase在防止年龄相关性白内障的发生中发挥重要作用。 展开更多
关键词 硫醇转移酶 白内障 谷胱甘肽 二硫化物 肌动蛋白 三磷酸甘油醛脱氢酶
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高糖对人晶状体上皮细胞硫醇转移酶表达的影响 被引量：3
3
作者 刘擎 杨烨 严宏 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第3期201-204,共4页
目的观察高浓度葡萄糖对人晶状体上皮细胞硫醇转移酶(thioltransferase,TTase)表达的影响。方法将体外培养的人晶状体上皮细胞分别用葡萄糖浓度为5.5 mmol·L-1(正常对照组)、15.5 mmol·L-1、25.5 mmol·L-1及35.5 mmol... 目的观察高浓度葡萄糖对人晶状体上皮细胞硫醇转移酶(thioltransferase,TTase)表达的影响。方法将体外培养的人晶状体上皮细胞分别用葡萄糖浓度为5.5 mmol·L-1(正常对照组)、15.5 mmol·L-1、25.5 mmol·L-1及35.5 mmol·L-1(不同浓度高糖组),胎牛血清体积分数均为15%的DMEM培养液培养,同时设5.5 mmol·L-1葡萄糖+30.0 mmol·L-1甘露醇高渗对照组,24 h后Western-blotting检测TTase表达情况。选择35.5 mmol·L-1高糖浓度培养细胞,分别在0 h、2 h、8 h、16h、24 h时间点收集细胞,Western-blotting检测TTase表达,并测定TTase活性,细胞内总谷胱甘肽(T-GSH)、还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量,计算GSSG与T-GSH的比值。结果 TTase表达随葡萄糖浓度增加逐渐增强,在35.5mmol·L-1高糖组中表达最强,约为正常对照组的2.3倍(P<0.01),25.5 mmol·L-1高糖组约为正常对照组1.7倍(P<0.05),甘露醇高渗对照组TTase表达与正常对照组相比无明显变化(P>0.05)。在35.5 mmol·L-1高糖处理后2 h,TTase表达开始增高,8 h表达达到高峰,约为正常对照组的2.0倍(P<0.01),随后逐渐下降,16 h时约为正常对照组1.7倍(P<0.01);24 h降为1.5倍(P<0.05)。与TTase表达类似,TTase活性在35.5 mmol·L-1高糖处理后2 h开始升高,8 h达到高峰,约为正常对照组的1.8倍(P<0.01),随后逐渐下降。GSH在35.5 mmol·L-1高糖处理后16 h较对照组明显下降(P<0.05)。GSSG和GSSG/T-GSH比值在35.5 mmol·L-1高糖处理2 h后均显著升高,分别约为正常对照组的3.5倍(P<0.001)和3.3倍(P<0.001),并随时间推移不断上升。结论高糖可诱导晶状体上皮细胞TTase表达上调、活性增强,同时伴GSH的含量下降,GSSG含量上升。 展开更多
关键词 糖尿病性白内障 高糖 晶状体上皮细胞 硫醇转移酶
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硫醇转移酶和硫氧还蛋白系统在白内障中的研究
4
作者 柴飞燕 严宏 《眼科学报》 2007年第1期15-19,共5页
晶状体透明性的维持需要平衡的氧化还原状态和恰当的巯基/二硫化物比例,其丰富的谷胱甘肽和内在修复酶系统作为重要的防御屏障对于维持晶状体功能非常重要,然而,在老化白内障晶状体中,谷胱甘肽含量显著下降。近年对硫醇转移酶和硫氧还... 晶状体透明性的维持需要平衡的氧化还原状态和恰当的巯基/二硫化物比例,其丰富的谷胱甘肽和内在修复酶系统作为重要的防御屏障对于维持晶状体功能非常重要,然而,在老化白内障晶状体中,谷胱甘肽含量显著下降。近年对硫醇转移酶和硫氧还蛋白系统的研究发现:硫醇转移酶特异地使蛋白质与谷胱甘肽形成的二硫化物脱硫醇,恢复蛋白质的自由巯基,维持蛋白质或酶的功能;硫氧还蛋白系统能使蛋白质二硫化物脱硫醇,是细胞内氧化还原稳态的重要调节子。两者协同作用能有效地修复晶状体蛋白质和酶的巯基,维持晶状体的功能。 展开更多
关键词 硫醇转移酶 硫氧还蛋白系统 白内障 晶状体透明性
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硫醇转移酶(TTase)对紫外线诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞的保护作用 被引量：1
5
作者 郑晓亮 张婕 严宏 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第7期601-604,共4页
目的探讨硫醇转移酶(thioltransferase,TTase)对紫外线诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)的保护作用。方法将体外培养的HLEC随机分为4组。正常组:正常培养的HLEC;紫外线组:正常培养的HLEC+紫外线(波长3... 目的探讨硫醇转移酶(thioltransferase,TTase)对紫外线诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)的保护作用。方法将体外培养的HLEC随机分为4组。正常组:正常培养的HLEC;紫外线组:正常培养的HLEC+紫外线(波长302 nm、辐照强度55.56μW·cm^(-2)的紫外线照射15 min,辐照量共计500 J·m^(-2));TTase siRNA组:TTase siRNA转染的HLEC;TTase siRNA+紫外线组:TTase siRNA转染的HLEC+紫外线(照射参数同紫外线组)。应用乳酸脱氢酶释放试剂盒检测细胞的增殖能力;测定TTase酶活性及Western blotting检测TTase蛋白表达;测量细胞内总GSH、GSH与GSSG含量,计算GSSG与总GSH的比值。结果紫外线组较正常组细胞增殖能力下降21.0%(P<0.05),TTase siRNA组较正常组细胞增殖能力下降17.0%(P<0.05);TTase siRNA+紫外线组较正常组细胞增殖能力下降29.0%(P<0.05)。紫外线组TTase活性较正常组升高,约为正常组的2.1倍;siRNA组较正常组TTase活性下降,约为正常组的67.0%(P<0.05);TTase siRNA+紫外线组较TTase siRNA组TTase活性增加,约为TTase siRNA组的1.3倍(P<0.05)。与正常组相比,紫外线组TTase相对表达量升高,约为正常组的3.9倍,TTase siRNA组的TTase相对表达量明显降低,约为正常组的35.0%(P<0.05);而TTase siRNA+紫外线组的TTase相对表达量较TTase siRNA组升高,约为TTase siRNA组的3.0倍(P<0.05)。相比于正常组,紫外线组、TTase siRNA组及TTase siRNA+紫外线组GSSG含量均上升,分别为正常组的2.3倍、1.4倍和3.7倍(均为P<0.05);紫外线组、TTase siRNA组和TTase siRNA+紫外线组GSH含量较正常组下降,分别为正常组的68.4%、79.0%和61.7%(均为P<0.05)。紫外线组、TTase siRNA组和TTase siRNA+紫外线组GSSG/总GSH比值均较正常组增加,分别为正常组的3.1倍、1.7倍和5.2倍(均为P<0.05)。结论 TTase对紫外线诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞均有重要的保护作用。 展开更多
关键词 硫醇转移酶 紫外线辐射 人晶状体上皮细胞 SIRNA
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氨甲酰化诱导的牛晶状体3-磷酸甘油醛脱氢酶和硫醇转移酶的失活(英文)
6
作者 张婕 严宏 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第6期1083-1086,共4页
目的:3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解过程中的一个关键酶,与老化和白内障发生密切相关,硫醇转移酶(TTase)可断裂晶状体蛋白质氧化形成的二硫键使硫醇化的蛋白质脱硫醇,对于维持晶状体透明性极为重要。氨甲酰化为重要的翻译后修饰。... 目的:3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解过程中的一个关键酶,与老化和白内障发生密切相关,硫醇转移酶(TTase)可断裂晶状体蛋白质氧化形成的二硫键使硫醇化的蛋白质脱硫醇,对于维持晶状体透明性极为重要。氨甲酰化为重要的翻译后修饰。本研究观察氨甲酰化是否能诱导晶状体GAPDH和TTase的失活。方法:透明新鲜的晶状体取自2周岁健康牛,与100mmol/L氰酸钾于37℃水孵箱分别振动温育7d和12d。设透明晶状体为正常对照组。所有晶状体孵育在50mmol/LDMEM液中,然后每只晶状体去囊膜,匀浆,提取水溶性蛋白质。用分光光度计分别测量GAPDH和TTase的活性。结果:与氰酸钾孵育后GAPDH的活性与正常对照组相比显著降低(P<0.01),其中12d组与7d组相比,活性明显下降。TTase的活性在孵育7d后与对照组相比有统计学差异(P<0.05),12d组的活性与对照组相比有显著差异(P<0.01),7d组活性与12d组相比无统计学差异(P=0.19296)。结论:研究结果显示,分别与100mmol/L氰酸钾孵育7d和12d后,氨甲酰化组的GAPDH和TTase活性与对照组相比有统计学差异,证实氨甲酰化可以诱导GAPDH和TTase酶的失活,为TTase和GAPDH在白内障发病机制中的进一步研究提供了新思路。 展开更多
关键词 氨甲酰化 白内障 氰酸钾 3-磷酸甘油醛脱氢酶 硫醇转移酶
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晚期糖基化终产物对人晶状体上皮细胞TTase表达的影响
7
作者 王旭 严宏 《国际眼科杂志》 CAS 2015年第4期588-591,共4页
目的:观察晚期糖基化终产物对人晶状体上皮细胞硫醇转移酶表达及活性的影响。方法:将体外人晶状体上皮细胞用AGEs-BSA浓度为1.5mg/mL,胎牛血清体积分数为10%的DMEM培养液培养,同时设定相同浓度的BSA对照组及空白对照组,分别于0,1,2,3,4... 目的:观察晚期糖基化终产物对人晶状体上皮细胞硫醇转移酶表达及活性的影响。方法:将体外人晶状体上皮细胞用AGEs-BSA浓度为1.5mg/mL,胎牛血清体积分数为10%的DMEM培养液培养,同时设定相同浓度的BSA对照组及空白对照组,分别于0,1,2,3,4d收集细胞,测定晶状体上皮细胞内ROS含量、TTase活性,qRT-PCR检测TTase mRNA表达情况,Western blot检测TTase蛋白质表达。结果:与对照组相比,AGEs-BSA干预后,细胞内ROS含量呈时间依赖性增高,差异有显著统计学意义(P<0.01),BSA干预后ROS的表达与对照组无显著差异。AGEs可诱导TTase的mRNA表达逐渐增高,2d时达到峰值,约为正常对照组的5.06倍(P<0.01);而BSA处理组和对照组TTase的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。与TTase的mRNA表达类似,TTase活性升高,在3d达到峰值,为正常对照组的2.01倍(P<0.01)。Western blot检测发现,TTase蛋白质表达逐渐增加,从3d开始TTase表达与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AGEs可能是通过诱导人晶状体上皮细胞发生氧化应激,致使TTase表达上调,活性增强。 展开更多
关键词 晚期糖基化终产物 硫醇转移酶 晶状体上皮细胞 糖尿病性白内障
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