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γ－^（32）P标记反义核苷酸对HBV基因表达的封闭效应
1
作者 冯雪梅 周永兴 +2 位作者 姚志强 白雪帆 张长法 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期48-49,共2页
γ－￣(３２)Ｐ标记反义核苷酸对ＨＢＶ基因表达的封闭效应冯雪梅，周永兴，姚志强，白雪帆，张长法本文作者以乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因转染的ＨｅｐＧ２细胞（２．２．１５细胞）为实验模型，合成互补于ＨＢＶ基因ｍＲＮＡＳＰⅡ增... γ－￣(３２)Ｐ标记反义核苷酸对ＨＢＶ基因表达的封闭效应冯雪梅，周永兴，姚志强，白雪帆，张长法本文作者以乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因转染的ＨｅｐＧ２细胞（２．２．１５细胞）为实验模型，合成互补于ＨＢＶ基因ｍＲＮＡＳＰⅡ增强于区的１５聚反义硫代脱氧核苷酸（... 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因表达 硫代脱氧核苷酸
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特异性阻断MecR1-MecI-MecA通路逆转耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性 被引量：3
2
作者 孟静茹 罗晓星 +3 位作者 扈本荃 刘杰 王海芳 孟嘉 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第15期1352-1355,共4页
目的:研究互补于MRSA的耐药基因mecR1mRNA的PSODNs6088对MRSA耐药性的影响.方法:利用电穿孔的方法将PSODNs6088导入MRSA内,平板克隆形成实验计数菌落数(CFU);微量法测定细菌的生长曲线;RTPCR法检测目的基因mecR1和mecA的表达变化.结果:P... 目的:研究互补于MRSA的耐药基因mecR1mRNA的PSODNs6088对MRSA耐药性的影响.方法:利用电穿孔的方法将PSODNs6088导入MRSA内,平板克隆形成实验计数菌落数(CFU);微量法测定细菌的生长曲线;RTPCR法检测目的基因mecR1和mecA的表达变化.结果:PSODNs6088能明显抑制MRSA的生长,PSODNs6088各剂量组MRSA的CFU与空白对照组比较明显减少(P<0.05),且具有剂量依赖性,而随机对照组的菌落数却无明显减少;PSODNs6088能显著抑制MRSAmecR1和mecA的表达.结论:反义硫代寡核苷酸能特异的与mecR1mRNA结合并阻断其表达,从而阻断了MRSA耐药基因表达信号通路,减少MRSA的菌落数,抑制其生长,提示反义寡核苷酸能有效的逆转MRSA对β内酰胺类抗生素的耐药性.利用反义技术阻断细菌的耐药信号通路可能成为解决细菌耐药问题的一种新策略. 展开更多
关键词 反义硫代寡聚脱氧核苷酸 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 耐药性 基因表达
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反义寡核苷酸-聚乙烯亚胺纳米微粒逆转耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性的研究 被引量：1
3
作者 王慧 孟静茹 +4 位作者 陈涛 贾敏 何功浩 马雪 罗晓星 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第1期31-35,共5页
目的:以聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)为载体,将硫代寡聚脱氧核苷酸(PS-ODNs)转染到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA)体内,通过药效学观察PS-ODNs逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药... 目的:以聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)为载体,将硫代寡聚脱氧核苷酸(PS-ODNs)转染到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA)体内,通过药效学观察PS-ODNs逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性。方法:制备PEI与PS-ODNs结合的纳米微粒(PEI-ODNs纳米微粒);PEI-ODNs纳米微粒的粒径分析及结合率的测定;平板克隆形成实验计数菌落数(CFU);微量法测定细菌生长曲线;液体稀释法测定细菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果:PEI-ODNs纳米微粒的粒径为(85±22)nm,PEI与PS-ODNs的结合率最高为(97.3±1.1)%。含苯唑西林(6mg/L)的M-H琼脂板上,30μg/mL的PEI-ODNs纳米微粒组MRSA的菌落数为6.4×108/mL,而空白对照组的菌落数为3.3×109/mL,二者相比给药组菌落数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.01),而其他对照组与空白对照组比较差异无统计学意义。实验结果显示PEI-ODNs纳米微粒组的苯唑西林对MRSA生长有抑制作用,30μg/mL的PEI-ODNs纳米微粒可将苯唑西林对MRSA最小抑菌浓度由1024μg/mL降低至16μg/mL。结论:PEI与PS-ODNs的结合率很高且粒径较小,PS-ODNs可以部分逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性。药效学结果显示PEI可以有效地将反义寡核苷酸转入MRSA体内,可考虑将其作为反义寡核苷酸进入细菌的载体。 展开更多
关键词 硫代寡聚脱氧核苷酸 聚乙烯亚胺 纳米微粒 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 转染
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耐药基因mecA阻断策略逆转MRSA耐药性研究 被引量：1
4
作者 祝强强 杨福泰 +4 位作者 周诗萌 王宁 贾敏 马雪 孟静茹 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期936-941,共6页
目的探讨脂质体包裹的靶向耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因mecA的硫代寡聚脱氧核苷酸(PSODN010)能否有效逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性。方法以mecA mRNA为靶点设计合成PS-ODN010;薄膜分散法制备新型的包裹PS-ODN/PEI纳... 目的探讨脂质体包裹的靶向耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因mecA的硫代寡聚脱氧核苷酸(PSODN010)能否有效逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性。方法以mecA mRNA为靶点设计合成PS-ODN010;薄膜分散法制备新型的包裹PS-ODN/PEI纳米微粒脂质体并进行质量评估;体外实验测定细菌生长曲线、菌落数(CFU)等;实时定量PCR法检测PS-ODN010对mecA表达的影响。结果实验结果显示脂质体的包封率为75.9%±3.91%;脂质体包裹的PS-ODN010能浓度依赖性的抑制mecA表达;给予脂质体包裹的PS-ODN010后,苯唑西林明显抑制MRSA的生长(P<0.01),MRSA的菌落数明显低于对照组(P<0.01),苯唑西林等5种β-内酰胺类抗生素对MRSA的MIC显著降低。结论脂质体包裹的抗mecA的PS-ODN010能够选择性抑制MRSA的mecA表达,有效逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 硫代寡聚脱氧核苷酸 耐药性 MECA 纳米微粒 脂质体
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全硫代反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞生长及端粒酶活性的影响
5
作者 崔凯 李洪秀 +1 位作者 鞠培新 秦书俭 《中国实用医药》 2012年第7期71-72,共2页
目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASODN)对骨肉瘤细胞HOS细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于骨肉瘤细胞HOS细胞后并培养24、48、... 目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASODN)对骨肉瘤细胞HOS细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于骨肉瘤细胞HOS细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法检测骨肉瘤细胞HOS细胞的端粒酶活性、细胞形态改变。结果端粒酶PS-ASODN作用骨肉瘤细胞HOS细胞72h后端粒酶活性表达为阴性。PS-ASODN作用的骨肉瘤细胞HOS细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩。结论 PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大。 展开更多
关键词 全硫代反义寡聚脱氧核苷酸 骨肉瘤细胞HOS细胞 端粒酶 细胞凋亡
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全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用
6
作者 刘学 单伟 +3 位作者 曾瑞霞 房艳 李德华 秦书俭 《中国实用医药》 2009年第8期12-16,共5页
目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代... 目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸(Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN)组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸(Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN)组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态:PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验:PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖(P<0.0l),并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期:与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显著(P<0.01);在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。 展开更多
关键词 端粒酶全硫代反义寡聚脱氧核苷酸 卵巢癌HO-8910细胞 端粒酶 细胞凋亡
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