硫代半乳糖苷通过抑制半乳糖凝集素-8的糖结合活性改善脑出血继发性脑损伤 被引量：1

1

作者 宋晶晶 白宏英 +2 位作者 徐辉 陈思 邢媛媛 《中国实用神经疾病杂志》 2023年第8期925-929,共5页

目的探讨小鼠脑出血后半乳糖凝集素-8(Galectins-8)对脑出血急性期脑损伤程度的影响。方法采用胶原酶注入法建立小鼠脑出血模型,制作冰冻切片,采用免疫荧光染色观察血肿周围免疫炎症细胞表达情况,干湿质量法检测脑组织含水量,劳克坚牢蓝... 目的探讨小鼠脑出血后半乳糖凝集素-8(Galectins-8)对脑出血急性期脑损伤程度的影响。方法采用胶原酶注入法建立小鼠脑出血模型,制作冰冻切片,采用免疫荧光染色观察血肿周围免疫炎症细胞表达情况,干湿质量法检测脑组织含水量,劳克坚牢蓝/焦油紫(LFB/CV)染色观察CH急性期脑组织的血肿体积、脑肿胀程度。结果脑出血后硫代半乳糖苷抑制Galectins-8的糖结合活性,可显著减少血肿周围活化的小胶质细胞及浸润的中性粒细胞数量(Iba1:t=2.904,P=0.0272;MPO:t=3.503,P=0.0128),抑制脑血肿体积扩大(t=2.486,P=0.0486),减轻脑水肿(t=5.369,P=0.0126),从而改善脑出血后的继发性脑损伤。结论脑出血后Galectins-8一定程度上加重了继发性脑损伤的程度,可能成为治疗脑出血新的潜在治疗靶点。 展开更多

关键词 脑出血 继发性脑损伤 半乳糖凝集素-8 硫代半乳糖苷 免疫炎症 小鼠

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一种基于酵母3',5'-二磷酸核苷酸酶的蛋白亲和层析纯化体系 被引量：1

2

作者 张晓 杨洋 孙梅好 《今日科技》 2014年第3期47-,49,共2页

蛋白质是生命活动的主要承担者.蛋白质的结构和功能的研究在后基因组时代尤为重要.为深入分析蛋白质的结构和功能,研究者们需要分离纯化大量不同的蛋白质.亲和层析具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点已成为纯化蛋白质等生物大分... 蛋白质是生命活动的主要承担者.蛋白质的结构和功能的研究在后基因组时代尤为重要.为深入分析蛋白质的结构和功能,研究者们需要分离纯化大量不同的蛋白质.亲和层析具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点已成为纯化蛋白质等生物大分子最有效的技术之一.目前,常用的亲和层析标签有多聚组氨酸、谷胱甘肽转硫酶、麦芽糖结合蛋白等,但不同的标签各有其优缺点.例如:研究发现如果表达的蛋白表面有几个接近的组氨酸,此蛋白可能结合Ni-NTA介质,最终和目的蛋白一同洗脱下来,导致多聚组氨酸标签纯化的蛋白纯度不够;麦芽糖结合蛋白标签的缺点为层析介质价格较高且纯化的目的蛋白纯度较低;谷胱甘肽转硫酶标签的缺点为标签蛋白中半胱氨酸的氧化可导致目的蛋白凝集,且此蛋白与其配体的结合较慢,因此,我们需要降低上样流速,延长样品的上样时间等.最近,我们开发了以酵母3',5'-二磷酸核苷酸酶作为原核蛋白表达和分离纯化的标签.本文主要对其蛋白纯化原理和方法进行总结. 展开更多

关键词 层析纯化 二磷酸核苷酸 谷胱甘肽转硫酶 生物大分子 亲和层析 表达载体 层析柱纯化 钙离子 表达纯化 硫代半乳糖苷

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山东地方山羊ERα/β基因的原核表达与检测抗体的制备

3

作者 刘海港 李宏梅 +7 位作者 侯秋玲 李宝全 王春阳 刘法孝 窦文文 井维芳 王洪进 郭慧君 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期308-309,共2页

克隆山东地方山羊的α-和β-雌激素受体(ERα/β)基因,进行原核表达,并制备检测用多克隆抗体。根据NCBI发布的绵羊ERα和ERβ基因序列分别设计两对引物,以济宁青山羊卵巢总RNA为模板,使用RT-PCR方法分别扩增ERα和ERβ部分基因,克隆序... 克隆山东地方山羊的α-和β-雌激素受体(ERα/β)基因,进行原核表达,并制备检测用多克隆抗体。根据NCBI发布的绵羊ERα和ERβ基因序列分别设计两对引物,以济宁青山羊卵巢总RNA为模板,使用RT-PCR方法分别扩增ERα和ERβ部分基因,克隆序列经双酶切和测序验证后,连接到原核表达载体pET32a,构建成重组表达载体pET32a-ERα和pET32a-ERβ。 展开更多

关键词 原核表达 ERΑ 测序验证 重组载体 抗体特异性 雌激素受体 融合蛋白 RNA 硫代半乳糖苷 蛋白抗原

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重组人血管内皮抑制素(rh-Endostatin)大肠杆菌表达体系发酵条件的优化 被引量：26

4

作者 常国栋 李壮林 +3 位作者 秦加阳 马翠卿 罗永章 许平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期662-666,共5页

优化了重组人血管内皮抑制素的E.coli表达体系的发酵条件。利用E.coli表达体系得到了较高的产量,在9h左右的发酵周期内达到OD600值140,包涵体蛋白产量为3g/L。主要优化了异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside... 优化了重组人血管内皮抑制素的E.coli表达体系的发酵条件。利用E.coli表达体系得到了较高的产量,在9h左右的发酵周期内达到OD600值140,包涵体蛋白产量为3g/L。主要优化了异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)的终浓度、诱导时间、培养温度、补料控制方法等条件,并且在诱导后提高培养温度到40℃,在非常短的培养周期内达到了高密度培养的目的。利用E.coli表达,继而通过复性获得有活性的重组人血管内皮抑制素,成本低、生产过程稳定可控、得到的蛋白性质稳定,符合工业生产的需要。 展开更多

关键词 重组人血管内皮抑制素 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 大肠杆菌 基因工程蛋白 高密度培养 肿瘤

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不依赖IPTG诱导产木糖醇大肠杆菌工程菌的构建 被引量：5

5

作者 唐梅 蔡松 +3 位作者 杨东成 付声亮 王金华 王永泽 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第9期173-179,共7页

该研究采用分子生物学技术构建不依赖异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产木糖醇的大肠杆菌(Escherichia coli)工程菌,并研究启动子、质粒拷贝数、诱导剂IPTG的添加、基因xylA和xylB的敲除以及木糖含量对工程菌发酵产木糖醇的影响。... 该研究采用分子生物学技术构建不依赖异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产木糖醇的大肠杆菌(Escherichia coli)工程菌,并研究启动子、质粒拷贝数、诱导剂IPTG的添加、基因xylA和xylB的敲除以及木糖含量对工程菌发酵产木糖醇的影响。结果表明,当转速为200 r/min时,E.coli AI07/pWYZ-1(启动子为lacP)的木糖醇产量是E.coli AI07/pAGI02(启动子为pflB-p6)的1.8倍;E.coli AI07/pWYZ-2(中拷贝质粒pBR322)的木糖醇产量高于E.coli AI07/pWYZ-1(高拷贝质粒pUC19),分别为19.56 g/L、7.90 g/L;是否添加诱导剂IPTG对E.coli AI07/pWYZ-2产木糖醇影响不大,且在发酵96 h时,木糖醇产量极显著高于E.coli AI05/pWYZ-2(P<0.01),其在不添加IPTG的条件下,当木糖初始质量浓度为80 g/L,发酵时间为108 h时,木糖醇产量达48.7 g/L。 展开更多

关键词 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 木糖醇 xylI基因 启动子 质粒拷贝数 大肠杆菌 高渗漏表达

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重组雪花莲外源凝集素(GNA)表达条件的优化 被引量：1

6

作者 罗素兰 长孙东亭 +1 位作者 张真 陈琴 《药物生物技术》 CAS CSCD 2005年第5期298-302,共5页

研究了含有GNA基因的重组大肠杆菌菌株G2和G3在不同诱导培养温度、起始诱导菌体密度(OD600值)、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导培养时间等重要因子对重组GNA表达的影响,以期获得重组GNA表达的最佳条件.实验结果表明,... 研究了含有GNA基因的重组大肠杆菌菌株G2和G3在不同诱导培养温度、起始诱导菌体密度(OD600值)、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导培养时间等重要因子对重组GNA表达的影响,以期获得重组GNA表达的最佳条件.实验结果表明,不含信号肽的G2菌株和含有信号肽的G3菌株的最佳培养条件分别为:起始诱导菌体密度为OD600≈0.6;诱导剂IPTG浓度为0.1mmol/L;诱导培养时间为6 h;G2和G3的诱导培养温度分别为37℃,28～30℃.该研究结果将为发酵生产重组GNA的工艺提供依据,也为重组GNA开发成为生物农药、试剂和免疫增强剂提供支持. 展开更多

关键词 重组雪花莲外源凝集素 温度 诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 大肠杆菌表达

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高效液相色谱-串联质谱法测定重组胰岛素中的异丙基硫代半乳糖苷

7

作者 金磊 王朋 +2 位作者 胡骏杰 刘飞 曹婧 《分析试验室》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第2期172-176,共5页

基于高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术,建立了多肽药物重组胰岛素中残留异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的检测方法。采用乙腈从重组胰岛素粗产品/原料药中萃取IPTG,结合亲水作用色谱(HILIC)分离,在质谱多反应监测(MRM)模式下测定。结... 基于高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术,建立了多肽药物重组胰岛素中残留异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的检测方法。采用乙腈从重组胰岛素粗产品/原料药中萃取IPTG,结合亲水作用色谱(HILIC)分离,在质谱多反应监测(MRM)模式下测定。结果表明,IPTG在0.2~100 ng/mL范围内线性关系良好(R^(2)=0.9969),定量限为0.1 ng/mL,检出限为0.025 ng/mL;在重组胰岛素原料药中加标低、中、高浓度IPTG的回收率为103.3%~106.0%,相对标准偏差为0.6%~4.2%。该方法可作为多肽药物中IPTG杂质含量的质量控制方案。 展开更多

关键词 高效液相色谱-串联质谱 多肽药物 异丙基硫代半乳糖苷 亲水作用色谱

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反相高效液相色谱-脉冲电化学检测法测定重组人生长激素中异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（英文） 被引量：1

8

作者 王荔 林碧蓉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期308-313,共6页

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)-脉冲电化学检测(PED)法测定了重组人生长激素(rhGH)中的诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)。rhGH样品经超滤离心后,用超纯水提取,经C18色谱柱分离,用脉冲电化学器检测。结果表明,样品中添加0.02~0.10... 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)-脉冲电化学检测(PED)法测定了重组人生长激素(rhGH)中的诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)。rhGH样品经超滤离心后,用超纯水提取,经C18色谱柱分离,用脉冲电化学器检测。结果表明,样品中添加0.02~0.10 mg/L的IPTG,其回收率为100%~102%,相对标准偏差(n=3)小于10%。在优化的条件下,IPTG的检出限可达1μg/L(0.1 pmol,25μL)。该方法简便高效,具有良好的灵敏度、回收率和重复性。 展开更多

关键词 反相高效液相色谱法 脉冲电化学检测 巯基 含硫化学物 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 重组人生长激素

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高亲和PDGFβR多肽修饰的截短型TβRⅡ的可溶性表达条件优化

9

作者 王兵 刘海峰 +1 位作者 候惠娴 王春涛 《牡丹江医学院学报》 2023年第2期25-28,共4页

目的 探讨高亲和血小板衍生生长因子受体(Platelet derived growth factor-β receptor, PDGFβR)多肽ZPDGFβR修饰的截短型转化生长因子β Ⅱ型受体(Truncated transforming growth factor-β receptor type Ⅱ,tTβRⅡ)的重组蛋白(Z-t... 目的 探讨高亲和血小板衍生生长因子受体(Platelet derived growth factor-β receptor, PDGFβR)多肽ZPDGFβR修饰的截短型转化生长因子β Ⅱ型受体(Truncated transforming growth factor-β receptor type Ⅱ,tTβRⅡ)的重组蛋白(Z-tTβRⅡ)最佳可溶性表达的条件。方法 将含有原核表达质粒pET28/Z-tTβRⅡ的阳性大肠杆菌(Rossta/pET28-Z-tTβRⅡ)置于LB培养基中培养,接着加入不同浓度的IPTG,使其终浓度为0.2、0.4、0.6、0.8 mmo/L,应用SDS-PAGE技术分析在不同温度时间下(16℃、18 h, 20℃、20 h和37℃、6 h)重组蛋白Z-tTβRⅡ的可溶性表达。结果 Z-tTβRⅡ在16℃、18 h下,0.8 mmol/L IPTG时,诱导后全菌表达约22%和诱导后上清表达约13%;Z-tTβRⅡ在20℃、20 h下,诱导后全菌0.8 mmol/L IPTG时表达约23%,诱导后上清0.2 mmol/L IPTG时表达约14%;Z-tTβRⅡ在37℃、6 h下,0.2 mmol/L IPTG时,诱导后全菌约30%和诱导后上清约20%。结论 Z-tTβRⅡ蛋白最佳表达条件为37℃、6 h、IPTG浓度为0.2 mmo/L。 展开更多

关键词 转化生长因子βⅡ型受体 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 可溶性表达 条件优化

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乳糖诱导表达重组人甲状旁腺激素rhPTH(1-34)

10

作者 陈耀国 《齐鲁药事》 2012年第2期63-65,共3页

目的研究以乳糖代替异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组人甲状旁腺激素的可行性。方法对乳糖浓度、诱导时间及发酵培养方式进行研究,确定了乳糖诱导的最佳条件。结果 0.6%的乳糖诱导4 h,目的蛋白的表达量约占菌体总蛋白的56.8%,采取... 目的研究以乳糖代替异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组人甲状旁腺激素的可行性。方法对乳糖浓度、诱导时间及发酵培养方式进行研究,确定了乳糖诱导的最佳条件。结果 0.6%的乳糖诱导4 h,目的蛋白的表达量约占菌体总蛋白的56.8%,采取分批补料培养方式,5 L发酵罐中蛋白表达量达到42.6%。结论乳糖能作为诱导剂诱导rhPTH(1-34)在大肠杆菌中的表达。 展开更多

关键词 重组人甲状旁腺激素 乳糖 异丙基硫代半乳糖苷 诱导

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DJ-1融合蛋白的原核表达、纯化和鉴定

11

作者 曲伟 蒲小平 Hiroyoshi Ariga 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1627-1628,共2页

Nagakubo等[1]在1997年发现并报道了DJ-1之后,人们研究发现DJ-1基因突变与帕金森病（Parkinsons disease,PD）相关[2],此外,DJ-1还具有转录调控、抗氧化应激等功能[3-4]。目前DJ-1逐渐成为PD的研究热点,但国内尚未见有关DJ-1蛋白原核... Nagakubo等[1]在1997年发现并报道了DJ-1之后,人们研究发现DJ-1基因突变与帕金森病（Parkinsons disease,PD）相关[2],此外,DJ-1还具有转录调控、抗氧化应激等功能[3-4]。目前DJ-1逐渐成为PD的研究热点,但国内尚未见有关DJ-1蛋白原核表达的报道。 展开更多

关键词 DJ-1 帕金森病 原核表达 大肠杆菌 氧化应激 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷

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兔源PP1催化亚基突变体的原核表达及活性分析

12

作者 范亚军 倪秀珍 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期213-215,共3页

为了探讨蛋白磷酸酶(PP)催化亚基非保守区N末端结构与功能之间的关系,试验利用原核生物表达兔源蛋白磷酸酶催化亚基突变体DN_8PP1,以DEAE FF和Heparin FF对目的蛋白进行分离、纯化并对其活性进行分析。结果表明:加入异丙基-β-D-硫代半... 为了探讨蛋白磷酸酶(PP)催化亚基非保守区N末端结构与功能之间的关系,试验利用原核生物表达兔源蛋白磷酸酶催化亚基突变体DN_8PP1,以DEAE FF和Heparin FF对目的蛋白进行分离、纯化并对其活性进行分析。结果表明:加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)后成功诱导突变体蛋白在大肠杆菌中表达,对蛋白进行分离、纯化时含0.15 mol/L NaCl的Buffer A洗脱出目的蛋白,以pNPP为底物检测活性。说明突变体蛋白具有脱磷酸化的生物学活性。 展开更多

关键词 兔源 蛋白磷酸酶(PP) 突变体 原核表达 异丙基-β—D-硫代半乳糖苷(IPTG) 活性检测

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IPTG与乳糖联合诱导重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶表达 被引量：6

13

作者 李攀峰 张洪斌 胡雪芹 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第1期185-188,共4页

研究异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)与乳糖联合诱导重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶表达的效果。在利用IPTG和乳糖分别作为诱导剂对右旋糖酐蔗糖酶工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET28-de... 研究异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)与乳糖联合诱导重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶表达的效果。在利用IPTG和乳糖分别作为诱导剂对右旋糖酐蔗糖酶工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET28-dexYG进行诱导表达的基础上,尝试将此两种诱导剂联合使用,在降低成本的同时获得较好的表达效果。在获得最佳培养基的基础上,考察菌体IPTG与乳糖的联合加入量、菌体浓度、诱导时间对右旋糖酐蔗糖酶表达的影响。在菌浓(OD600 nm)达到3.0时,加入0.1 mmol/L IPTG 95μL+2.5 g/L乳糖,25℃混合诱导培养4 h,酶活力最高,达到40.44 U/mL。IPTG与乳糖联合诱导重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶表达可行。 展开更多

关键词 异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷 乳糖 右旋糖酐蔗糖酶 表达 联合诱导

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乳源性免疫活性肽在E.coli BL21中分泌表达的诱导条件优化 被引量：1

14

作者 胡迪 张少辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第11期198-203,共6页

设计4个乳源性免疫活性肽的目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pTYB11,并将重组质粒转化到E.coli BL21中,通过改变异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的浓度、培养时间和培养温度,设计正交试验来优化乳源活性小肽的IPTG... 设计4个乳源性免疫活性肽的目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pTYB11,并将重组质粒转化到E.coli BL21中,通过改变异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的浓度、培养时间和培养温度,设计正交试验来优化乳源活性小肽的IPTG诱导表达条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高效表达。依据15%SDS-PAGE电泳分析得到融合蛋白的表达量,选出最适诱导条件为IPTG终浓度0.1～0.2mmol/L,在12～15℃条件下培养20h,得到大小为59.2kD左右的融合目的蛋白,其表达量可占总蛋白表达量的40%,经Western Blotting鉴定正确。 展开更多

关键词 乳源性免疫活性肽 pTYB11 原核表达 异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷 诱导条件优化

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