拟南芥氮代谢相关基因T-DNA插入突变体低氮响应的初步研究 被引量：2

1

作者 刘菲 林熊 +1 位作者 尹辉 张富春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期91-95,99,共6页

氮代谢相关基因家族的拟南芥T-DNA插入突变体幼苗期对低氮环境有不同的响应。叶绿素含量,干物重,全氮含量测定结果表明:有2个氨转运蛋白基因(ammonium transport gene mutant,AMTm)和8个硝酸还原酶基因(nitrate reduc-tases gene mutant... 氮代谢相关基因家族的拟南芥T-DNA插入突变体幼苗期对低氮环境有不同的响应。叶绿素含量,干物重,全氮含量测定结果表明:有2个氨转运蛋白基因(ammonium transport gene mutant,AMTm)和8个硝酸还原酶基因(nitrate reduc-tases gene mutant,NRm)的T-DNA突变体与野生型对照相比对外界低氮环境的适应能力存在显著差异。 展开更多

关键词 拟南芥 氨转运蛋白基因 硝酸还原酶基因 T-DNA突变体 低氮响应

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彩色豆马勃硝酸还原酶基因克隆与序列分析 被引量：2

2

作者 周爱东 吴小芹 +2 位作者 王明生 王小龙 叶建仁 《南京林业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期22-26,共5页

彩色豆马勃是重要的林木外生菌根真菌,采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)从彩色豆马勃中克隆得到硝酸还原酶基因,将其命名为ptnr(GenBank登录号为KC698974)。ptnr cDNA全长2 951 bp,ORF长2 754 bp,编码917个氨基酸,推测所得蛋白质... 彩色豆马勃是重要的林木外生菌根真菌,采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)从彩色豆马勃中克隆得到硝酸还原酶基因,将其命名为ptnr(GenBank登录号为KC698974)。ptnr cDNA全长2 951 bp,ORF长2 754 bp,编码917个氨基酸,推测所得蛋白质的分子质量为102.06 ku,等电点为6.34。序列相似性检索和系统进化树分析结果显示:彩色豆马勃ptnr编码的氨基酸序列与担子菌皱木耳硝酸还原酶基因的氨基酸序列同源性最高为60%,与担子菌灰盖鬼伞的同源性为57%,与外生菌根真菌粘滑菇和双色蜡蘑的同源性分别为53%和56%。 展开更多

关键词 外生菌根真菌 彩色豆马勃 硝酸还原酶基因 CDNA末端快速扩增 序列分析

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水稻硝酸还原酶基因5′上游序列的克隆与序列分析 被引量：1

3

作者 胡静 吴文华 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期284-288,共5页

以日本晴水稻幼苗叶的基因组总DNA为模板,采用PCR方法扩增获得约1 300 bp大小的DNA片段,回收该片段并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌感受态,并提取质粒DNA。用凝胶电泳检测和酶切鉴定,选取阳性克隆进行测序分析。测序结果显示,该片段含... 以日本晴水稻幼苗叶的基因组总DNA为模板,采用PCR方法扩增获得约1 300 bp大小的DNA片段,回收该片段并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌感受态,并提取质粒DNA。用凝胶电泳检测和酶切鉴定,选取阳性克隆进行测序分析。测序结果显示,该片段含1 376个核苷酸对;应用NCB1网站的BLAST软件对本试验中克隆的序列与GenBank(NC_008401)公布的水稻硝酸还原酶基因启动子序列进行比对,有3个核苷酸差异,同源性为99%,证实本试验中克隆的DNA序列为水稻硝酸诱导基因启动子。该序列含有多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box、CAAT-box和GAGA-box)。此序列的成功克隆,为今后开展水稻等重要农作物转基因研究奠定基础。 展开更多

关键词 日本晴水稻 硝酸还原酶基因 5’上游序列 基因克隆

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硝酸还原酶合成的NO通过诱导酸敏感水稻根尖ROS积累引起酸毒

4

作者 孙黎明 马建锋 沈仁芳 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期201-211,共11页

酸毒是酸性土壤中限制作物生长的重要因子之一,但酸毒通常与金属离子毒性共存,难以在土壤中直接研究,目前关于水稻酸毒机制的报道较少。选用前期筛选的酸耐性不同的两个水稻品种Kasalath(酸耐性)和Jinguoyin(酸敏感),研究水稻的酸敏感... 酸毒是酸性土壤中限制作物生长的重要因子之一,但酸毒通常与金属离子毒性共存,难以在土壤中直接研究,目前关于水稻酸毒机制的报道较少。选用前期筛选的酸耐性不同的两个水稻品种Kasalath(酸耐性)和Jinguoyin(酸敏感),研究水稻的酸敏感性与活性氧(ROS)积累及氧化还原代谢相关酶的关系,并试图探讨酸毒害中一氧化氮(NO)信号与活性氧信号的调控关系。结果显示,低pH引起酸敏感水稻品种Jinguoyin中根尖NO和ROS的富集,但酸耐性水稻品种Kasalath中无显著变化。NO清除剂2-(4-羧基苯基)-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-1-氧基-3-氧化物钾盐(cPTIO)可清除Jinguoyin根尖富集的NO和ROS。硝酸还原酶反馈抑制剂谷氨酰胺(Gln)可明显降低Jinguoyin在低pH下的根尖NO信号,而一氧化氮合酶抑制剂N’-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐(L-NAME)对根尖NO信号无影响。低pH显著提高了Jinguoyin中硝酸还原酶基因NIA1、NIA2和NIA3的表达,同时也提高了硝酸还原酶活性。可见,低pH下Jinguoyin受到的酸毒与NO介导的ROS富集有关,酸毒下产生的NO信号主要由硝酸还原酶合成,其硝酸还原酶基因NIA1和NIA2的表达调控硝酸还原酶活性的提高。 展开更多

关键词 酸耐性 水稻 硝酸还原酶基因 一氧化氮(NO) 活性氧(ROS)

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甘蓝过量表达硝酸还原酶基因对硝酸盐积累的影响

5

作者 张正英 陈玉梁 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1024-1028,共5页

为探索过量表达硝酸还原酶基因对甘蓝（Brassicaoleracea L.var.capitata L.）硝酸盐积累的影响,以‘中甘11号’下胚轴为外植体,采用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导法将烟草硝酸还原酶基因（NR）导入甘蓝,获得13株卡那霉... 为探索过量表达硝酸还原酶基因对甘蓝（Brassicaoleracea L.var.capitata L.）硝酸盐积累的影响,以‘中甘11号’下胚轴为外植体,采用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导法将烟草硝酸还原酶基因（NR）导入甘蓝,获得13株卡那霉素抗性植株.PCR和Southern blot检测证实,NR基因已经成功导入并整合到甘蓝的基因组.4个转基因株系硝酸盐质量分数明显低于非转基因供体株系,降幅为13.9％～23.0％.说明：将重组硝酸还原酶基因导入甘蓝且得到超量表达,创制低硝酸盐育种材料的方法可行. 展开更多

关键词 甘蓝 农杆菌介导法 硝酸还原酶基因 硝酸盐质量分数

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水稻防御信号NO对褐飞虱产卵刺激的响应

6

作者 周金明 颜静 +2 位作者 尤珂珂 高媛媛 周强 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1078-1083,共6页

植物对昆虫产卵刺激产生的防御反应不仅可以直接抑制卵的发育,还可以为防御下一步若虫/幼虫带来的危害做准备。对褐飞虱产卵处理后水稻植株内一氧化氮(NO)合成的关键酶-硝酸还原酶基因的表达量和NO含量进行测定,对比褐飞虱取食和机械损... 植物对昆虫产卵刺激产生的防御反应不仅可以直接抑制卵的发育,还可以为防御下一步若虫/幼虫带来的危害做准备。对褐飞虱产卵处理后水稻植株内一氧化氮(NO)合成的关键酶-硝酸还原酶基因的表达量和NO含量进行测定,对比褐飞虱取食和机械损伤处理,结果显示褐飞虱产卵能够诱导水稻硝酸还原酶基因的表达和NO的生成。处理后12 h,水稻硝酸还原酶基因表达量显著高于取食和和机械损伤处理;12-24 h产卵诱导的NO含量显著高于对照和机械损伤组水稻。褐飞虱产卵诱导水稻启动NO合成关键基因的表达和物质合成表明,与取食危害类似,水稻同样会对褐飞虱产卵刺激产生响应,诱导NO升高,启动相应的植物防御体系。 展开更多

关键词 水稻 褐飞虱 产卵 硝酸还原酶基因 NO

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甜菜硝酸还原酶基因编码氨基酸偏好及功能预测分析

7

作者 丁广洲 侯静 马凤鸣 《中国糖料》 2011年第4期3-6,共4页

利用同源序列克隆方法从标准偏高糖型甜菜二倍体纯系Ty7中获得氮素诱导甜菜硝酸还原酶基因片段,通过RACE技术克隆基因全长序列;该基因ORF长度2718 bp,编码905个氨基酸,分子量大小为102kD(ExPaSy的分子量分析),等电点为6.12,含有147bp的5... 利用同源序列克隆方法从标准偏高糖型甜菜二倍体纯系Ty7中获得氮素诱导甜菜硝酸还原酶基因片段,通过RACE技术克隆基因全长序列;该基因ORF长度2718 bp,编码905个氨基酸,分子量大小为102kD(ExPaSy的分子量分析),等电点为6.12,含有147bp的5'UTR和382 bp的3'UTR,Genbank上的注册号为EU163265,甜菜硝酸还原酶基因编码多肽含有3个氧化还原功能区:钼辅因子功能区(eukary NR Moco;93-478),Fe-血红素结合区(Cyt-b5;535-608),FAD结合区(FAD binding 6;653-760)。利用网上的公共数据库和相关软件对该基因氨基酸偏好和编码蛋白的理化性质进行了分析,并对其功能进行了预测。上述研究结果为下一步基因的表达与调控研究奠定了基础。 展开更多

关键词 甜菜 硝酸还原酶基因 氨基酸偏好 功能预测

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烟草转硝酸还原酶基因高效遗传转化研究

8

作者 裴怀弟 王红梅 +1 位作者 张艳萍 陈玉梁 《甘肃农业科技》 2011年第7期19-21,共3页

通过对农杆菌介导烟草遗传转化方法的优化,建立了快速高效烟草叶盘遗传转化体系。用OD600为0.5的农杆菌悬浮液浸染大小约1.0 cm×1.0 cm烟草叶盘5～10 min,再置于MS附加2.25 mg/L 6-BA和0.10 mg/LNAA的分化培养基上,在100 mg/L卡那... 通过对农杆菌介导烟草遗传转化方法的优化,建立了快速高效烟草叶盘遗传转化体系。用OD600为0.5的农杆菌悬浮液浸染大小约1.0 cm×1.0 cm烟草叶盘5～10 min,再置于MS附加2.25 mg/L 6-BA和0.10 mg/LNAA的分化培养基上,在100 mg/L卡那霉素选择压下,21～28 d可获得抗性不定芽。经卡那霉素生根筛选和PCR扩增鉴定,其阳性转基因植株频率可达81.2%。 展开更多

关键词 烟草 农杆菌 硝酸还原酶基因 叶盘 遗传转化 PCR鉴定

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好氧反硝化细菌YX-6特性及鉴定分析 被引量：31

9

作者 安健 宋增福 +3 位作者 杨先乐 胡鲲 路怀灯 佘林荣 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期561-569,共9页

从对虾池塘筛选得到1株高效的好氧反硝化细菌,命名为YX-6。对该菌生长及反硝化性能间的关系进行研究;同时研究了不同温度、pH、盐度及碳源对该菌生长及反硝化性能的影响。结果表明,该菌反硝化作用主要发生在对数生长期,可将亚硝酸盐氮由... 从对虾池塘筛选得到1株高效的好氧反硝化细菌,命名为YX-6。对该菌生长及反硝化性能间的关系进行研究;同时研究了不同温度、pH、盐度及碳源对该菌生长及反硝化性能的影响。结果表明,该菌反硝化作用主要发生在对数生长期,可将亚硝酸盐氮由10mg/L降至0;该菌最适生长及反硝化温度为30℃;pH值范围为7～9时最适于该菌生长及反硝化性能的发挥。该菌最适盐度范围为0～15;丁二酸钠、乙酸钠为该菌生长及反硝化的最适碳源。通过对YX-6菌株生理生化及16SrRNA分子鉴定,初步鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。对该菌株亚硝酸还原酶基因进行序列分析,结果表明,该菌含有亚硝酸还原酶nirS基因。 展开更多

关键词 好氧反硝化 凝结芽孢杆菌 16SrRNA 亚硝酸还原酶基因

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农杆菌介导法将硝酸还原酶基因转入大白菜的研究 被引量：4

10

作者 张艳萍 陈玉梁 +1 位作者 张正英 肖兴国 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第30期14597-14599,共3页

[目的]建立大白菜的硝酸还原酶基因(NR)转化体系。[方法]以大白菜北京小杂60为材料,通过农杆菌LBA4404介导,将硝酸还原酶基因(NR)转入大白菜,对获得的转NR基因苗进行PCR检测、Southern杂交检测以及硝酸盐含量测定。[结果]试验初步建立... [目的]建立大白菜的硝酸还原酶基因(NR)转化体系。[方法]以大白菜北京小杂60为材料,通过农杆菌LBA4404介导,将硝酸还原酶基因(NR)转入大白菜,对获得的转NR基因苗进行PCR检测、Southern杂交检测以及硝酸盐含量测定。[结果]试验初步建立了一套大白菜的转化体系,即以预培养2d苗龄4d的大白菜不带柄半子叶为外植体,在OD600nm值约为0.6的农杆菌工程菌液中浸染8min,然后在pH值为5.8且不加抗生素的分化培养基中将子叶与菌共培养2d,其后经过诱导、抗生素筛选、生根生长等过程,获得抗性植株,转化频率为6.48%。对抗性植株采用分级筛选,获得8株转NR基因苗。[结论]试验证实,NR基因已整合进大白菜的基因组中并得到表达,植株体内的硝酸盐含量均低于对照。 展开更多

关键词 大白菜 农杆菌 硝酸还原酶基因(NR) 硝酸盐含量

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萝卜硝酸还原酶基因的克隆与表达分析 被引量：1

11

作者 武悦 徐良 +3 位作者 王娟娟 龚义勤 谢洋 柳李旺 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期205-211,共7页

[目的]为揭示萝卜（Raphanus sativus L.）硝酸还原酶基因（RsNR）的分子特征,降低硝酸盐含量,对萝卜RsNR基因进行分离与表达特性研究。[方法]基于本实验室转录组测序所得unigene序列分离RsNR基因cDNA,利用生物信息学方法进行序列分析,... [目的]为揭示萝卜（Raphanus sativus L.）硝酸还原酶基因（RsNR）的分子特征,降低硝酸盐含量,对萝卜RsNR基因进行分离与表达特性研究。[方法]基于本实验室转录组测序所得unigene序列分离RsNR基因cDNA,利用生物信息学方法进行序列分析,采用RT-qPCR方法对不同浓度KNO3（0、5、20、30和50mmol·L^-1）和不同时间（0、4、8、12和24h）处理的萝卜中RsNR基因表达进行检测,并测定硝酸盐含量和硝酸还原酶活性（NRA）。[结果]获得萝卜RsNR基因cDNA序列（GenBank登录号：KM272859）,开放阅读框为2742bp,编码913个氨基酸,RsNR与油菜NR基因（D38219）氨基酸序列相似性为95%。在30mmol·L^-1NO3^--N诱导下,萝卜叶片和根中RsNR基因表达量最高。在30mmol·L^-1NO3^--N诱导初期,叶片和根中RsNR表达量4h达到最大值,随后呈下降趋势;随着硝酸盐处理浓度升高,NRA、硝酸盐含量和RsNR基因表达量均呈先升后降趋势,0～4h内叶片和根中三者均上升,4～24h内NRA和RsNR基因表达下降,而硝酸盐含量呈上升趋势。[结论]NO3^--N可能在转录水平上调控萝卜RsNR基因表达,进而影响其硝酸盐含量和NRA。 展开更多

关键词 萝卜 基因表达 硝酸还原酶基因(NR) NO3^--N处理

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棉花体细胞胚胎发生相关基因——亚硝酸还原酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量：1

12

作者 韩改英 王省芬 +1 位作者 张贵寅 马峙英 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第6期24-28,共5页

利用生物信息学方法,以水稻的NiR基因序列为基础,克隆棉花亚硝酸还原酶基因的开放阅读框,并对序列进行氨基酸组成、二级结构、疏水性及信号肽进行等预测分析,同时与4个物种的NiR基因进行了同源性比较。结果成功地克隆了NiR基因,该研究... 利用生物信息学方法,以水稻的NiR基因序列为基础,克隆棉花亚硝酸还原酶基因的开放阅读框,并对序列进行氨基酸组成、二级结构、疏水性及信号肽进行等预测分析,同时与4个物种的NiR基因进行了同源性比较。结果成功地克隆了NiR基因,该研究结果对研究棉花体细胞胚胎发生和基因的关系奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 棉花 亚硝酸还原酶基因 克隆 生物信息学

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氨氧化菌的分离鉴定及其在罗氏沼虾育苗废水中的应用

13

作者 潘晓艺 蔺凌云 +5 位作者 尹文林 徐洋 姚嘉赟 袁雪梅 郑群艳 沈锦玉 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期894-902,共9页

氨氮转化细菌在养殖水生态系统的物质循环和水体净化的过程中起着重要作用。该研究从养殖池塘底泥中筛选具有氨氮去除能力的细菌,通过生化和分子生物学技术进行细菌鉴定,并用于罗氏沼虾育苗用水的氨氮净化。结果表明:分离获得的氨氮去除... 氨氮转化细菌在养殖水生态系统的物质循环和水体净化的过程中起着重要作用。该研究从养殖池塘底泥中筛选具有氨氮去除能力的细菌,通过生化和分子生物学技术进行细菌鉴定,并用于罗氏沼虾育苗用水的氨氮净化。结果表明:分离获得的氨氮去除菌YX0703能在无机氮培养基和有机氮培养基中生长,既具有氨氮氧化活性,也能将NO_3^-转化为NO_2^-,再将NO_2^-转化为N_2,经鉴定,该菌为人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi);该菌株携带亚硝酸还原酶基因(Nitrite reductase K gene,nirK),药物最低抑菌浓度检测发现,其对头孢类抗菌素耐药,对喹诺酮类、美罗培南和四环素等抗菌药物敏感;摇床转速150 r·min^(-1)时,在25、30℃条件下,菌株YX0703对罗氏沼虾育苗废水的氨氮去除率分别为96.98%和97.44%。综上,分离获得的氨氮去除菌YX0703是人苍白杆菌,其既能利用无机氮又能利用有机氮,既具有氨氧化活性又有反硝化活性,可用于罗氏沼虾育苗废水的氨氮净化。 展开更多

关键词 氨氧化菌 人苍白杆菌 反硝化 生物脱氮 亚硝酸还原酶基因

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杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析 被引量：3

14

作者 李杰 贾岩龙 +2 位作者 闫红霞 潘卫东 薛乐勋 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1-7,共7页

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其功能进行分析。方法:利用BamHI、EcoRI、HindIII、PstI、SalI、Xbal6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库。采用LA-PCR方法,从上述盐... 目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其功能进行分析。方法:利用BamHI、EcoRI、HindIII、PstI、SalI、Xbal6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库。采用LA-PCR方法,从上述盐藻步行基因组文库中扩增NR基因5′上游序列,测序并进行分析。为检测其表达特性,构建了该片段与GUS嵌合基因的表达载体pNR-GUS,通过电击法将所构建的重组表达载体转化盐藻,组织化学染色法观察GUS的表达。结果:从盐藻基因组步行文库中扩增出约1200bp特异片段,序列分析表明5′上游序列含有启动子的特征性序列。GUS瞬时表达染色结果显示,该DNA片段具有硝酸盐诱导和铵抑制的启动子活性。结论:所克隆的盐藻的5′上游序列可能是一种具有“开关”活性的可控性启动子。 展开更多

关键词 杜氏盐藻 硝酸盐还原酶基因 5’上游序列 功能

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新型双启动子表达质粒pCMVnir的构建及其促进基因免疫效果的研究

15

作者 卞继峰 于修平 +4 位作者 耿昭 卢翌 穆玉兰 胡海燕 刘浩 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期614-619,共6页

目的构建一种新型双启动子表达载体pCMVnir,研究其与胞内寄生菌联合应用促进基因免疫效果的作用。方法细菌硝酸盐还原酶基因B启动子nirB为厌氧诱导启动子,根据nirB启动子的结构,设计合成改良的nirB,置换三启动子载体pTriEx4中的T7Lac和... 目的构建一种新型双启动子表达载体pCMVnir,研究其与胞内寄生菌联合应用促进基因免疫效果的作用。方法细菌硝酸盐还原酶基因B启动子nirB为厌氧诱导启动子,根据nirB启动子的结构,设计合成改良的nirB,置换三启动子载体pTriEx4中的T7Lac和P10启动子,而保留其CMVie启动子,获得携带CMVie和nirB双种启动子的新型载体pCMVnir,或称为pCN。构建pCNEGFP和pCNDsRed两种报告质粒,分别转化S.SL3261、E.coliDH5α和CHO等细胞,检测报告基因的表达情况以确定两种启动子的活性。pCNEGFP转化S.SL3261,接种BALBc小鼠,定期解剖小鼠收集黏膜相关淋巴组织,观察重组细菌和载体DNA在细胞中的定植及稳定性。免疫接种小鼠,并定期收集小鼠血清和阴道分泌物,以重组rEGFP为抗原,用ELISA方法研究其增强免疫应答的能力。并构建人乳头瘤病毒L1E7双启动子pCN16L1E7及对照单启动子载体pCMV16L1E7和pNir16L1E7,对比三者诱导黏膜免疫的差别。结果双启动子表达载体pCMVnir可在细菌和真核细胞中有效表达报告基因,在细菌中可形成肉眼可见的荧光菌落和沉淀,转染CHO等真核细胞能够表达荧光蛋白,表明pCMVnir载体的两种启动子都有活性,其中nirB活性是受兼性厌氧调控的。pCMVnir与细菌有较好的相容性,重组细菌可在动物体内有限复制和定植达6周,质粒可在细菌中稳定存在。以rEGFP为抗原检测发现pCNEGFP诱导的免疫反应高于常用的单启动子载体pCMVEGFP。人乳头瘤病毒双启动子载体pCN16L1E7诱导的免疫反应也高于其他单启动子载体。结论双启动子表达载体pCMVnir与减毒胞内寄生菌匹配应用,能够提高抗原表达量及增强基因免疫反应的强度。并可作为一般基因克隆和表达载体,特别是作为原核表达载体,不用添加诱导物,即可获得大量表达。 展开更多

关键词 胞内寄生菌 基因免疫 启动子 硝酸盐还原酶基因 厌氧诱导启动子 表达质粒 免疫效果 酶基因 BALB/C小鼠 原核表达载体

原文传递

养虾池好氧反硝化细菌新菌株的分离鉴定及特征 被引量：30

16

作者 廖绍安 郑桂丽 +2 位作者 王安利 黄洪辉 孙儒泳 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期3718-3724,共7页

利用间歇曝气选择性富集并对所获菌株的好氧反硝化活性进行检测。筛选到一株亚硝酸盐去除活性较高的好氧反硝化细菌。在溶解氧（D0）为3.80-5．21mg／L的培养条件下。该菌株10h内将亚硝态氮由26．18mg／L降至0；在盐度为0—25之间20h内... 利用间歇曝气选择性富集并对所获菌株的好氧反硝化活性进行检测。筛选到一株亚硝酸盐去除活性较高的好氧反硝化细菌。在溶解氧（D0）为3.80-5．21mg／L的培养条件下。该菌株10h内将亚硝态氮由26．18mg／L降至0；在盐度为0—25之间20h内均可达到同样的去除效果。通过形态学特征、生理生化反应及部分长度16SrDNA序列分析对筛选菌株进行鉴定，初步判定它为嗜麦芽寡养单胞菌Stertotrophomonas maltophilia。亚硝酸盐还原酶基因分析结果表明。该菌株只含亚硝酸盐还原酶nitS基因，其序列与Alcaligenes faecalis A15（后来被重新鉴定为Pseudomonas stutzeri）的nirS基因序列相似。 展开更多

关键词 好氧反硝化细菌 嗜麦芽寡养单胞菌 16S RDNA 亚硝酸盐还原酶nitS基因

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典型对虾养殖水体中参与硝化与反硝化过程的微生物群落结构 被引量：20

17

作者 李敬源 林炜铁 +1 位作者 罗剑飞 田国梁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期478-488,共11页

【目的】本研究旨在分析典型虾塘养殖水体中参与氮循环关键过程的菌群多样性,为指导实际对虾养殖水体中NH 4+和NO 2-的微生物降解、水体氮素污染控制以及虾塘养殖氮素循环的有效管理提供科学依据。【方法】使用聚合酶链式反应及变性梯... 【目的】本研究旨在分析典型虾塘养殖水体中参与氮循环关键过程的菌群多样性,为指导实际对虾养殖水体中NH 4+和NO 2-的微生物降解、水体氮素污染控制以及虾塘养殖氮素循环的有效管理提供科学依据。【方法】使用聚合酶链式反应及变性梯度凝胶电泳技术(Polymerase Chain Reaction-Denaturing Gradient GelElectrophoresis,PCR-DGGE)从8个不同地点的虾塘水样中确定代表性水样,以此为典型水样进行研究,构建了氨单加氧酶基因(amoA)、亚硝酸盐氧化还原酶基因(nxrA)、亚硝酸盐还原酶基因(nirS)的克隆文库。利用限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)技术将克隆文库进行酶切分析。【结果】通过序列多态性分析,表明amoA基因克隆文库中所有序列都属于变形杆菌门β亚纲(β-Proteobacteria),分别为亚硝化单细胞菌属(Nitrosomonas)(81%)和亚硝化螺旋菌属(Nitrosospira)(19%)2个属。nxrA基因克隆文库检测到α-Proteobacteria和δ-Proteobacteria两个亚纲,其中硝化杆菌属(Nitrobacter)是优势菌群,占整个文库的92%,仅有一个类群属于δ亚纲的脱硫杆菌科(Desulfobacteraceae)(8%)。nirS基因文库群落结构相对于amoA和nxrA基因文库较复杂,分别为α-Proteobacteria、β-Proteobacteria亚纲和Actinobacteria,序列分析表明,25%的类群为固氮弧菌属(Azoarcus),25%的类群为(Polymorphum),20%的类群为需氧去氮菌属(Thauera),10%的类群为(Sophophora),10%的的类群为链霉菌属(Streptomyces),5%的类群为(Brachymonas),5%的类群为(Ruegeria)。【结论】典型虾塘养殖水环境中氮素循环关键过程的菌群多样性丰富,其中亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)和硝化杆菌属(Nitrobacter)分别是此环境中主要的氨氧化作用推动者和亚硝酸盐氧化作用推动者,而在反硝化重要环节中,固氮弧菌属等多种菌群都起着推动作用。 展开更多

关键词 PCR-DGGE 氨单加氧酶基因(amoA) 亚硝酸盐氧化还原酶基因(nxrA) 亚硝酸盐还原酶基因 (nirS) 克隆文库 系统发育树

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膜生物反应器好氧反硝化菌的筛选及鉴定 被引量：4

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作者 刘欢 骆灵喜 +1 位作者 李旭宁 王波 《环境污染与防治》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期26-29,共4页

从某膜生物反应器（MBR）污泥中筛选出反硝化活性较高的好氧反硝化细菌,进行了反硝化活性检测、菌种鉴定和作用机制探索。结果表明,共分离出6株好氧反硝化细菌,在较低的菌浓度（1×105个/mL）、DO为4.2∽5.5mg/L的条件下启动脱氮反... 从某膜生物反应器（MBR）污泥中筛选出反硝化活性较高的好氧反硝化细菌,进行了反硝化活性检测、菌种鉴定和作用机制探索。结果表明,共分离出6株好氧反硝化细菌,在较低的菌浓度（1×105个/mL）、DO为4.2∽5.5mg/L的条件下启动脱氮反应,菌株F2、F4、F5在24、48h的总氮去除率分别超过40.29%、67.19%,硝酸盐氮去除率分别在64.21%、83.31%以上;经16SrDNA序列测序和比对,菌株F2、F4、F5分别与苍白杆菌属（Ochrobactrumsp.）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、布鲁菌属（Brucellasp.）的同源性最高;PCR扩增结果表明,菌株F2、F4、F5中均具有周质硝酸盐还原酶,这几种细菌很可能通过这种酶来实现好氧反硝化。 展开更多

关键词 膜生物反应器 好氧反硝化菌 筛选 鉴定 周质硝酸盐还原酶亚基基因

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海洋异养硝化菌株的快速筛选 被引量：1

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作者 王光玉 孙洋洋 +1 位作者 陈雷 张健 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第12期61-66,共6页

目前尚缺乏有效地系统分离获得异养硝化菌的方法,为此,利用海洋养殖废水,采用前期自养后期异养的混养富集方法,获得具有异养脱氮能力的菌群.通过异养培养基分离获得纯菌株,利用特异性引物扩增分离菌株的氨单加氧酶(AMO)基因amoA和周质... 目前尚缺乏有效地系统分离获得异养硝化菌的方法,为此,利用海洋养殖废水,采用前期自养后期异养的混养富集方法,获得具有异养脱氮能力的菌群.通过异养培养基分离获得纯菌株,利用特异性引物扩增分离菌株的氨单加氧酶(AMO)基因amoA和周质硝酸盐还原酶(NAR)亚基基因napA,快速筛选具有潜在异养硝化或异养硝化好氧反硝化能力的菌株.通过氮素转化试验确认菌株的氮代谢特性.共分离获得异养细菌22株,其中11株细菌amoA基因呈阳性,7株细菌amoA基因和napA基因同时显阳性,氮素转化试验证明9株细菌具有异养脱氮能力. 展开更多

关键词 混养富集 异养硝化细菌 好氧反硝化细菌 氨单加氧酶基因(amoA) 周质硝酸盐还原酶亚基基因

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