敲低己糖激酶2(HK2)抑制乳腺癌细胞增殖并降低其对氟尿嘧啶的耐药 被引量：6

1

作者 王军华 陶明华 +4 位作者 王滕 王孜 肖静 丁巳娟 陈瑞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期722-727,共6页

目的研究敲低己糖激酶2(HK2)对乳腺癌细胞增殖、耐药的影响及其机制。方法通过短发夹RNA(shRNA)质粒转染技术构建稳定转染的MDA-MB-231乳腺癌细胞,实时定量PCR及Western blot法检测HK2 mRNA和蛋白水平,噻唑蓝(MTT)法观察HK2对乳腺癌细... 目的研究敲低己糖激酶2(HK2)对乳腺癌细胞增殖、耐药的影响及其机制。方法通过短发夹RNA(shRNA)质粒转染技术构建稳定转染的MDA-MB-231乳腺癌细胞,实时定量PCR及Western blot法检测HK2 mRNA和蛋白水平,噻唑蓝(MTT)法观察HK2对乳腺癌细胞增殖及对5氟脲嘧啶(5-FU)耐药的影响,乳酸试剂盒和细胞外酸化率(ECAR)检测HK2对乳腺癌细胞糖酵解的影响。结果获得稳定低表达HK2的乳腺癌细胞株,HK2 mRNA及蛋白水平均明显降低。敲低HK2后明显抑制乳腺癌细胞的增殖并增强5-FU对乳腺癌细胞的杀伤作用,下调HK2后能够明显抑制乳腺癌细胞乳酸分泌和下调糖酵解基线。结论敲低HK2抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖并降低其对5-FU的耐药性。 展开更多

关键词 乳腺癌细胞 己糖激酶2(HK2) 短发夹rna(shrna) 5氟脲嘧啶(5-FU) 糖酵解

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应用shRNA技术研究NDRG2在人胃癌细胞SGC7901增殖中的作用 被引量：4

2

作者 裴德宁 张翊 +1 位作者 饶春明 王军志 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1021-1025,共5页

目的:构建针对人 N-myc 下游调节基因2(NDRG2)的短发夹 RNA(shRNA)表达载体 pSNAV-shRNA,观察其在SGC7901细胞中对 NDRG2的抑制作用以及 NDRG2被抑制后细胞增殖能力的变化。方法:PCR 扩增针对 NDRG2的 shRNA 表达框架,构建 pSNAV-shRNA... 目的:构建针对人 N-myc 下游调节基因2(NDRG2)的短发夹 RNA(shRNA)表达载体 pSNAV-shRNA,观察其在SGC7901细胞中对 NDRG2的抑制作用以及 NDRG2被抑制后细胞增殖能力的变化。方法:PCR 扩增针对 NDRG2的 shRNA 表达框架,构建 pSNAV-shRNA 质粒,转染 SGC7901细胞,通过 RT-PCR,免疫印迹试验检测其对 NDRG2表达的影响;通过细胞周期分析,软琼脂集落形成试验检测细胞增殖能力的变化。结果:将构建好的 pSNAV-shRNA 质粒转染 SGC7901细胞后,NDRG2的表达受到明显的抑制,细胞周期 G1期阻滞,集落形成能力降低。结论:构建的 pSNAV-shRNA 质粒能够有效抑制NDRG2在 SGC7901细胞中的表达,降低 SGC7901细胞的增殖能力。 展开更多

关键词 rna干扰 短发夹rna(shrna) 人N-myc下游调节基因2(NDRG2) 胃肿瘤

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PCR扩增的shRNA表达盒快速筛选PRRSV有效siRNA序列 被引量：3

3

作者 贺云霞 华荣虹 +4 位作者 周艳君 安同庆 仇华吉 王云峰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期376-380,共5页

有效siRNA的筛选是RNAi研究的关键点之一。本研究选取猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核衣壳蛋白(N)作为靶基因,使用http://www.ambion.com的靶位点筛选和设计工具,选取4个siRNA序列(siRNA95、siRNA179、siRNA218和siRNA294),利用一步... 有效siRNA的筛选是RNAi研究的关键点之一。本研究选取猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核衣壳蛋白(N)作为靶基因,使用http://www.ambion.com的靶位点筛选和设计工具,选取4个siRNA序列(siRNA95、siRNA179、siRNA218和siRNA294),利用一步PCR法产生包含U6启动子的短发夹RNA表达盒技术快速筛选高效siRNA,PCR法制备的shRNA表达盒(PCR-shRNA95、PCR-shRNA179、PCR-shRNA218和PCR-shRNA294)分别与表达N-EGFP融合蛋白的重组质粒pEN-ORF7共转染至293T细胞,48 h后荧光显微镜下检测细胞表达EGFP阳性率,筛选有效siRNA片段,将筛选的PCR-shRNA179的PCR产物转染N-EGFP融合蛋白稳定表达293T细胞系和PRRSV感染的Marc-145细胞,结果表明PCR-shRNA179可明显减少N蛋白的表达、有效减轻PRRSV引起的细胞病变及减少感染PRRSV的Marc-145细胞中的N蛋白阳性细胞。本研究证明一步PCR扩增shRNA表达盒法可用于筛选特异性基因表达抑制的siRNA。 展开更多

关键词 rna干扰 SIrna 短发夹rna(shrna) 猪繁殖与呼吸综合征病毒

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RNAi下调PIK3CB表达抑制U251胶质瘤细胞生长的体内外研究 被引量：3

4

作者 康春生 浦佩玉 +5 位作者 张志勇 王广秀 刘晓智 贾志凡 黄强 裘明哲 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2008年第4期271-274,共4页

目的探讨应用RNAi技术靶向磷酸肌醇酯-3-激酶β催化亚单位（PIK3CB）抑制恶性胶质瘤细胞系U251的PIK3CB表达后在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法将短发夹RNA（shRNA）表达载体psiRNA-PIK3CB进行脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞... 目的探讨应用RNAi技术靶向磷酸肌醇酯-3-激酶β催化亚单位（PIK3CB）抑制恶性胶质瘤细胞系U251的PIK3CB表达后在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法将短发夹RNA（shRNA）表达载体psiRNA-PIK3CB进行脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达，检测细胞转染前后的细胞增殖能力和凋亡的变化。应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用，对肿瘤组织应用免疫荧光双染色和免疫组化的方法分析结果。结果靶向PIK3CB的shRNA转染后U251细胞生长受到抑制，细胞周期出现G2／M阻滞，细胞明显凋亡。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-PIK3CB显著抑制皮下肿瘤生长（P〈0．01）。结论靶向PIK3CB的shRNA基因治疗可以成为胶质瘤治疗的新策略。 展开更多

关键词 磷酸肌醇酯-3-激酶β催化亚单位(PIK3CB) 短发夹rna(shrna) 神经胶质瘤 增殖 细胞凋亡

原文传递

shRNA特异性静默大鼠肺泡巨噬细胞TLR2基因对染尘大鼠肺纤维化的抑制作用 被引量：2

5

作者 周韶炜 邵伯棕 +1 位作者 陈宣辰 张意 《中国工业医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第2期88-91,101,共5页

目的构建表达大鼠TLR2的shRNA慢病毒载体,并研究其在染尘大鼠肺组织内对巨噬细胞功能的抑制效应。方法设计并构建具有干扰效力的shRNA表达质粒,筛选出对TLR2干扰效果最好的一段序列,使用Gateway方法重组到慢病毒表达载体中进行包装,采... 目的构建表达大鼠TLR2的shRNA慢病毒载体,并研究其在染尘大鼠肺组织内对巨噬细胞功能的抑制效应。方法设计并构建具有干扰效力的shRNA表达质粒,筛选出对TLR2干扰效果最好的一段序列,使用Gateway方法重组到慢病毒表达载体中进行包装,采用包装好的慢病毒感染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383,ELISA法检测TGF-β1、IL-1β、IL-6的表达情况;而后,在大鼠矽肺模型中引入TLR2慢病毒载体,观察矽肺发生和进展情况。结果成功筛选出具有良好TLR2表达干扰效果的shRNA,并成功包装入慢病毒,慢病毒滴度为1.0×106TU/ml,转染慢病毒的肺泡巨噬细胞释放TGF-β1、IL-1β、IL-6均显著减少(P<0.05);转导了干扰病毒载体的矽肺大鼠,其矽肺发生发展受抑情况均优于对照组。结论成功构建了表达大鼠TLR2 shRNA的慢病毒,具有良好的抑制TGF-β1、IL-1β、IL-6功能,并能有效抑制矽肺的发生发展,揭示TLR2可能成为治疗肺纤维化的潜在靶点。 展开更多

关键词 矽肺 Toll样受体2(TLR2) 短发夹rna(shrna) 肺泡巨噬细胞 转化生长因子β1(TGF—β1) 白 介素-1β(IL-1β) 白介素6(IL-6)

原文传递

慢病毒介导的靶向c-Met可诱导shRNA稳定乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建及生物活性鉴定 被引量：1

6

作者 王金西 郭晓娟 +3 位作者 程锦红 张绍东 焦保庭 檀晓东 《生物技术通讯》 CAS 2020年第4期392-398,共7页

目的:探讨适当敲除c-Met后对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法:设计3条针对c-Met基因不同位点的短发夹RNA(shRNA)片段,将其连接到TA载体上,瞬时转染MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR、Western印迹检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,挑选沉默... 目的:探讨适当敲除c-Met后对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法:设计3条针对c-Met基因不同位点的短发夹RNA(shRNA)片段,将其连接到TA载体上,瞬时转染MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR、Western印迹检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,挑选沉默效率最佳的shRNA。以scramble为阴性对照,MDA-MB-231细胞为空白对照,挑选沉默效率最佳的TA-shRNA,并将其与pSD400慢病毒载体连接,利用293T细胞进行慢病毒组装,收集病毒液并感染MDA-MB-231细胞,将嘌呤霉素与MDA-MB-231细胞共培养,筛选稳定表达shRNA的细胞株。利用多西环素对稳定细胞系进行诱导,Western印迹检测稳定细胞系c-Met蛋白的表达量,MTT法检测敲低c-Met对稳定细胞系增殖的影响。结果:测序结果表明模板序列与设计序列正确,并筛选出沉默效率最高的shRNA为shRNA1,慢病毒包装后筛选出稳定细胞株,适当敲除MDA-MB-231细胞c-Met基因后细胞的增殖明显低于对照组。结论:构建了针对c-Met基因可诱导shRNA的乳腺癌稳定细胞系,为探讨适当敲除c-Met基因后乳腺癌细胞对化疗、放疗敏感性检测奠定了基础。 展开更多

关键词 C-MET 短发夹rna(shrna) 慢病毒 MDA-MB-231细胞

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大鼠STAT3特异性shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

7

作者 张五星 周伟 +5 位作者 赵学伟 丁晓然 周喆 张智敏 周焕芝 石炳毅 《四川医学》 CAS 2012年第2期195-198,共4页

目的在已经成功构建4个针对STAT3的shRNA质粒表达载体的基础上,筛选出干扰效果最佳者进行慢病毒包装并鉴定。方法将STAT3的干扰质粒shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4及Control1(空载体对照),Control2(无效shRNA对照)分别转染目的细胞(大... 目的在已经成功构建4个针对STAT3的shRNA质粒表达载体的基础上,筛选出干扰效果最佳者进行慢病毒包装并鉴定。方法将STAT3的干扰质粒shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4及Control1(空载体对照),Control2(无效shRNA对照)分别转染目的细胞(大鼠肾小球系膜细胞),48h后收集细胞提取mRNA,以RT-PCR检测各组分STAT3表达量。对于筛选所得干扰效果最佳的质粒,采用pPACKH1TM慢病毒载体系统进行病毒包装。利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对感染效率及病毒滴度进行检测。结果 RT-PCR检测结果显示,shRNA3样品受干扰的效果最佳。成功构建了慢病毒载体Lenti-shRNA3,共转染293T细胞24h、48h,荧光显微镜下可见强绿色荧光,细胞生长状态良好,表明病毒包装成功。转染HT1080细胞,收集慢病毒液,测定病毒滴度为3.34×108ifu/ml,适合感染目的细胞。结论成功构建了STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。 展开更多

关键词 信号转导子及转录激活子3(STAT3) 短发夹rna(shrna) 慢病毒载体 rna干扰(rnaI)

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沉默组织因子重组腺病毒的构建和胰岛中沉默效果检测

8

作者 李钊伦 薛武军 +4 位作者 田普训 丁小明 田晓辉 冯新顺 侯军 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1299-1302,共4页

目的构建复制缺陷型重组腺病毒介导短发夹RNA(shRNA)干扰组织因子(TF)在胰岛表达。方法设计并合成四对单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后经脂质体介导入成人胰岛,通过实... 目的构建复制缺陷型重组腺病毒介导短发夹RNA(shRNA)干扰组织因子(TF)在胰岛表达。方法设计并合成四对单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后经脂质体介导入成人胰岛,通过实时定量RT-PCR方法筛选对TF沉默效果最佳穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒行同源重组,筛选出正确重组子,用293A细胞包装出表达TF-shRNA的复制缺陷型重组腺病毒并测定其病毒滴度,通过实时定量RT-PCR腺病毒沉默TF效果予以检测。结果测序结果提示所构建的pENTR/U6-shRNA质粒正确,并从四对dsoligos筛选出对组织因子沉默效果最佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,经同源重组后成功构建了介导shRNA-TF复制缺陷型重组腺病毒。转染胰岛后,通过实时定量RT-PCR方法检测发现shRNA-TF腺病毒感染胰岛后对TF mRNA的沉默效果4d后达最佳效果,为54.29%(P<0.05vsNC)。结论成功构建的介导shRNA复制缺陷型重组腺病毒可以体外抑制胰岛细胞中组织因子的表达。 展开更多

关键词 重组腺病毒 组织因子 短发夹rna(shrna) 胰岛 基因沉默

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UbcH10基因沉默对裸鼠移植性大肠癌抑制作用 被引量：1

9

作者 陈世敏 王启栋 +2 位作者 吴建英 胡成进 刘贤锡 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1197-1199,共3页

目的通过短发夹RNA(shRNA)干扰沉默UbcH10基因的表达,并观察其对裸鼠移植结直肠癌的抑制作用。方法构建RNA干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo/UbcH10-RNAi(pUbcH10-RNAi),建立UbcH10基因沉默细胞系HT-29/UbcH10-RNAi;采用蛋白印迹法(western bl... 目的通过短发夹RNA(shRNA)干扰沉默UbcH10基因的表达,并观察其对裸鼠移植结直肠癌的抑制作用。方法构建RNA干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo/UbcH10-RNAi(pUbcH10-RNAi),建立UbcH10基因沉默细胞系HT-29/UbcH10-RNAi;采用蛋白印迹法(western blot)评价pUbcH10-RNAi对UbcH10基因表达的影响,观察移植结直肠癌裸鼠的肿瘤生长情况。结果 HT-29/UbcH10-RNAi细胞中UbcH10基因表达明显下调;与对照组比较HT-29/UbcH10-RNAi组肿瘤生长明显减慢,在接种肿瘤细胞12 d后隐约可见瘤体,36 d后断颈处死剥离瘤体重量仅是对照组肿瘤的40%左右。结论短发夹RNA(shRNA)沉默UbcH10基因对裸鼠移植性大肠癌有抑制作用,提示抑制UbcH10基因表达可能是大肠癌治疗的潜在方法。 展开更多

关键词 大肠癌 泛素结合酶UbcH10 短发夹rna(shrna) 裸鼠移植瘤

原文传递

MDR1基因shRNA真核表达质粒的构建

10

作者 李旭艳 邵淑丽 恽冬泽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期38-40,206,共4页

为了构建靶向MDR1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达重组质粒,试验针对MDR1基因序列选取3个干涉靶点,设计合成3条编码shRNA的DNA模板,分别定向克隆到真核表达质粒pSilencer 3.1-H1中构建重组质粒,再进行菌落PCR扩增和测序鉴定。结果表明:... 为了构建靶向MDR1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达重组质粒,试验针对MDR1基因序列选取3个干涉靶点,设计合成3条编码shRNA的DNA模板,分别定向克隆到真核表达质粒pSilencer 3.1-H1中构建重组质粒,再进行菌落PCR扩增和测序鉴定。结果表明:菌落PCR扩增得到与预期大小相同的阳性带,经DNA测序证实插入片段完全符合设计要求,序列无突变。说明成功构建了3个靶向MDR1基因的真核表达重组质粒pSilencer 3.1-H1 shRNA。 展开更多

关键词 MDR1基因 短发夹rna(shrna) 真核表达重组质粒 H1启动子

原文传递

山羊ATF6基因重组慢病毒干扰载体的构建及鉴定

11

作者 付饶 李会玲 +3 位作者 王磊 杨迪琦 温鑫 靳亚平 《动物医学进展》 北大核心 2019年第5期22-27,共6页

为了研究ATF6通路介导的山羊胎盘滋养层细胞(goat trophoblast cell,GTC)凋亡的作用机制,需要构建激活转录因子6(ATF6)基因慢病毒干扰载体用于试验。采用RNA干扰技术,设计合成以山羊ATF6基因CDS区为靶点的shRNA,构建重组慢病毒载体、慢... 为了研究ATF6通路介导的山羊胎盘滋养层细胞(goat trophoblast cell,GTC)凋亡的作用机制,需要构建激活转录因子6(ATF6)基因慢病毒干扰载体用于试验。采用RNA干扰技术,设计合成以山羊ATF6基因CDS区为靶点的shRNA,构建重组慢病毒载体、慢病毒包装、慢病毒转染、RT-qPCR和Western blot等方法,筛选出干扰效率达60%的shRNA干扰片段,构建出可用于今后ATF6通路相关研究的重组慢病病毒干扰载体,为山羊妊娠相关研究提供材料。 展开更多

关键词 激活转录因子6(ATF6) 内质网应激 短发夹rna(shrna) 慢病毒

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EPCR基因mRNA在人胃癌细胞系中的表达及其shRNA干扰载体内源性筛靶研究

12

作者 刘庆茹 王庆苓 +1 位作者 嵇玮嘉 吴永平 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第26期1-6,共6页

目的检测人胃癌细胞株中内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein creceptor,EPCR)基因的mRNA表达水平,构建EPCR基因特异的短发夹RNA(shRNA)干扰载体,并通过内源性筛靶实验检测EPCR mRNA表达,筛选出最佳的干扰靶序列。方法通过逆转录-聚... 目的检测人胃癌细胞株中内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein creceptor,EPCR)基因的mRNA表达水平,构建EPCR基因特异的短发夹RNA(shRNA)干扰载体,并通过内源性筛靶实验检测EPCR mRNA表达,筛选出最佳的干扰靶序列。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)检测胃癌细胞系(SGC7901、MGC803、HGC27、AGS)中EPCR mRNA和蛋白的表达,筛选出EPCR高表达的细胞株;设计5对EPCR基因特异性短发夹RNA(shRNA)干扰片段pGPH1/GFP/Neo-EPCR,用Lipofectamine 2000将pGPH1/GFP/Neo-EPCR转染入EPCR高表达的人胃癌细胞,以pGPH1/GFP/Neo空载体作对照;转染后通过观察绿色荧光蛋白来判断转染的效率,选出最优质粒/脂质体比;转染后收集样本,采用RT-PCR及Western blot进行检测,筛选出有效的干扰片段。结果 EPCR在MGC803细胞中表达量最高;最佳质粒:脂质体比值为1μg︰1μL;pGPH1/GFP/Neo-EPCR-homo-555为最有效的干扰质粒。结论成功筛选出针对EPCR基因特异的shRNA干扰载体,转染细胞后可下调EPCR的表达,为进一步研究EPCR的功能和肿瘤的基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 内皮细胞蛋白C受体(EPCR)基因 胃癌细胞 短发夹rna(shrna) 转染条件

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敲低吲哚胺2,3双加氧酶2基因抑制荷黑素瘤小鼠肿瘤生长并增强其免疫功能

13

作者 刘燕玲 刘欢 +3 位作者 项颖卿 陈晓燕 徐萍 闵卫平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1605-1609,共5页

目的以吲哚胺2,3双加氧酶2(IDO2)作为治疗靶标,研究IDO2基因表达在肿瘤治疗中的作用及其对免疫应答的影响。方法采用B16-BL6细胞株构建小鼠黑素瘤种植模型,以携带IDO2小干扰RNA的质粒(IDO2-shRNA)及对照组质粒(scramble-shRNA)尾静脉高... 目的以吲哚胺2,3双加氧酶2(IDO2)作为治疗靶标,研究IDO2基因表达在肿瘤治疗中的作用及其对免疫应答的影响。方法采用B16-BL6细胞株构建小鼠黑素瘤种植模型,以携带IDO2小干扰RNA的质粒(IDO2-shRNA)及对照组质粒(scramble-shRNA)尾静脉高压注射法治疗小鼠黑素瘤;游标卡尺测量肿瘤大小;流式细胞术检测各组引流淋巴结内调节性T细胞(Treg)百分比、T细胞凋亡百分比,以及脾脏内树突状细胞(DC)表面共刺激分子CD80、CD86表达情况;乳酸脱氢酶法检测CD8+T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力;ELISA检测血清内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果 IDO2-shRNA治疗组肿瘤的形成时间较晚,肿瘤的生长速度缓慢,离体肿瘤质量明显减少;IDO2-shRNA治疗组引流淋巴结内的Treg减少,T细胞凋亡降低,脾脏DC表面共刺激分子CD80、CD86明显增加;CD8+T细胞杀伤B16-BL6的能力增强,血清内TNF-α、IFN-γ表达水平升高。结论敲低荷瘤小鼠体内IDO2可抑制黑素瘤生长,提高机体的抗肿瘤免疫反应。 展开更多

关键词 吲哚胺2 3双加氧酶2(IDO2) 短发夹rna(shrna) 黑素瘤 静脉高压注射法 肿瘤免疫

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靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响 被引量：1

14

作者 林灵 韩梅梅 +3 位作者 王芳 申华莉 余红秀 杨芃原 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期161-167,178,共8页

目的探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin R... 目的探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT-PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7shRNA-566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论 CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 肝细胞肝癌(HCC) CXCR7基因 短发夹状rna(shrna) 增殖能力 细胞凋亡

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敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G_1期阻滞 被引量：1

15

作者 陈凤花 李一荣 +1 位作者 王琳 胡丽华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期134-139,共6页

B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hai... B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体BMI-1shRNA2和BMI-1shRNA4,转染人宫颈癌细胞系HeLa并筛选稳定转染细胞株,Western印迹检测BMI-1蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR检测周期素依赖性激酶抑制剂p16INK4a(cyclin-dependentkinase inhibitor p16INK4a)、人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、同源盒A9(homeoboxA9,HOXA9)、同源盒B4(homeoboxB4,HOXB4)和同源盒C13(homeoboxC13,HOXC13)基因mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期变化.结果表明,在稳定转染BMI-1shRNA2、BMI-1shRNA4的HeLa细胞中,显著抑制BMI-1蛋白表达,上调p16INK4a、HOXA9和HOXC13三者mRNA表达,而hTERT和HOXB4两者mRNA的表达水平无明显改变,同时G1期细胞增加、S期细胞减少,提示敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G1期阻滞,BMI-1可能是宫颈癌基因治疗的靶分子. 展开更多

关键词 B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(BMI-1) 短发夹状rna(shrna) 周期素依赖性激酶抑制剂p16INK4a 同源盒A9 同源盒C13

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针对人蛋白激酶CK2α亚基的shRNA表达质粒的构建与鉴定

16

作者 朱汝森 刘新光 梁念慈 《广东医学院学报》 2006年第5期451-453,458,共4页

目的:构建针对人蛋白激酶CK 2α亚基的shRNA表达质粒。方法:以mU 6pro为载体,化学合成shRNA表达模板,并定向克隆到载体的U 6启动子下游,琼脂糖凝胶电泳法筛选阳性克隆,基因测序法检测插入模板序列的正确性。结果:获得了正确的重组质粒,... 目的:构建针对人蛋白激酶CK 2α亚基的shRNA表达质粒。方法:以mU 6pro为载体,化学合成shRNA表达模板,并定向克隆到载体的U 6启动子下游,琼脂糖凝胶电泳法筛选阳性克隆,基因测序法检测插入模板序列的正确性。结果:获得了正确的重组质粒,插入的转录模板序列完全正确。结论:成功构建了针对人蛋白激酶CK 2α亚基的RNA i体系。 展开更多

关键词 蛋白激酶CK2 rna干扰(rnaI) 短发夹状rna(shrna) 基因测序 转染

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RNA干扰技术应对肿瘤多药耐药现象

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作者 于海洋 刘鹏飞 《承德民族师专学报》 2007年第2期53-55,共3页

在细胞中导入dsRNA会引起体内同源基因特异性的沉默(silencing),这种现象被称为RNAi(RNA interference)．该技术经过十年的发展,逐步走向成熟,并引起了生物科学的一次新的革命。它被广泛应用于细胞信号转导、发育生物学、基因功能学及... 在细胞中导入dsRNA会引起体内同源基因特异性的沉默(silencing),这种现象被称为RNAi(RNA interference)．该技术经过十年的发展,逐步走向成熟,并引起了生物科学的一次新的革命。它被广泛应用于细胞信号转导、发育生物学、基因功能学及肿瘤的基因治疗等多个领域,并取得了一系列开创性的成果。肿瘤细胞对抗癌药物产生抗药性是化疗失败的一个主要原因。而多药耐药现象是系指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药性的同时,对其他多种结构不同、作用靶位不同的抗肿瘤药物也有耐药性的现象。利用RNAi技术研究和治疗肿瘤的多药耐药性为困扰医学界二十多年的难题找到了一个新的突破口。 展开更多

关键词 rna干扰(rnaI) 多药耐药(multidrug resistance MDR) 短发夹样rna(shrna)

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