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重组人白细胞介素15融合蛋白的表达、纯化及免疫原性检测
被引量：
2
1
作者
李佳林
张存
+4 位作者
高源
郝强
王舒宁
张伟
张英起
《生物技术通讯》
CAS
2014年第3期349-352,共4页
目的:以白细胞介素15(IL-15)为靶点,研制类风湿性关节炎免疫治疗蛋白疫苗。方法:将N端融合破伤风类毒素(TT)表位的人IL-15基因克隆至带有His标签的原核表达载体pQE-30上,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,获得重组人TT-IL-15融合蛋白(简...
目的:以白细胞介素15(IL-15)为靶点,研制类风湿性关节炎免疫治疗蛋白疫苗。方法:将N端融合破伤风类毒素(TT)表位的人IL-15基因克隆至带有His标签的原核表达载体pQE-30上,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,获得重组人TT-IL-15融合蛋白(简称rtIL-15);目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后,用Western印迹和HPLC进行鉴定;将rtIL-15与氢氧化铝佐剂混合,免疫BALB/c小鼠,检测疫苗的免疫原性。结果:双酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明重组融合表达质粒pQE-30-TT-IL-15构建正确,重组蛋白的表达量达到菌体总蛋白的20%,主要以包涵体形式表达,经过纯化、复性后,目的蛋白纯度达到95%以上;蛋白疫苗免疫小鼠后,能诱导高滴度的特异性的IL-15抗体。结论:在大肠杆菌中表达了重组人IL-15融合蛋白疫苗,并具有良好的免疫原性。
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关键词
白细胞介素
15
融合
蛋白
疫苗
原核表达
类风湿性关节炎
下载PDF
职称材料
真核表达重组小鼠IL-15/Fc融合蛋白的制备和活性鉴定
2
作者
孔祥丽
冯云
+3 位作者
李燕
李小玉
陈思秀
张平
《华西药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期639-642,共4页
目的制备真核表达小鼠白细胞介素15(IL-15)和IgGγ1Fc段融合蛋白,并探讨其对抗原特异性CD8+T细胞的作用。方法运用RT-PCR方法,从B6小鼠脾细胞中分离小鼠IL-15和IgGγ1绞链区-CH2-CH3Fc cDNA。在IL-153′端和Fc5′端引入BamHI酶切位点,将...
目的制备真核表达小鼠白细胞介素15(IL-15)和IgGγ1Fc段融合蛋白,并探讨其对抗原特异性CD8+T细胞的作用。方法运用RT-PCR方法,从B6小鼠脾细胞中分离小鼠IL-15和IgGγ1绞链区-CH2-CH3Fc cDNA。在IL-153′端和Fc5′端引入BamHI酶切位点,将IL-15和Fc直接连接,构建小鼠IL-15/Fc融合蛋白基因,再连接到真核表达质粒载体pcDNA3.1(a+)上,转化CHO-S细胞表达、纯化后,研究其活性。结果融合蛋白486bp的编码由162个氨基酸组成,其中含48个信号肽氨基酸的小鼠IL-15前体蛋白和由681bp编码227个氨基酸的IgGγ1-CH2-CH3功能区构成;表达蛋白在IL-15信号肽引导下能高效分泌到培养液中,有二聚体和三聚体两种天然结构,单体分子量约50kDa,能特异性的结合IL-15R并抑制抗原诱导的CD8+T细胞的增殖反应。结论成功构建了小鼠IL-15/Fc融合蛋白真核表达载体,并在CHO-S细胞中得到高效表达。此融合蛋白具有较高的生物学活性,可有效地抑制抗原特异性CD8+T细胞的增殖反应。
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关键词
白细胞介素
15
/Fc
融合
蛋白
真核表达
白细胞介素
15
CD8^+T
细胞
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职称材料
题名
重组人白细胞介素15融合蛋白的表达、纯化及免疫原性检测
被引量：
2
1
作者
李佳林
张存
高源
郝强
王舒宁
张伟
张英起
机构
肿瘤生物学国家重点实验室
第四军医大学药学系生物制药学教研室
出处
《生物技术通讯》
CAS
2014年第3期349-352,共4页
基金
国家自然科学基金(81001182)
文摘
目的:以白细胞介素15(IL-15)为靶点,研制类风湿性关节炎免疫治疗蛋白疫苗。方法:将N端融合破伤风类毒素(TT)表位的人IL-15基因克隆至带有His标签的原核表达载体pQE-30上,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,获得重组人TT-IL-15融合蛋白(简称rtIL-15);目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后,用Western印迹和HPLC进行鉴定;将rtIL-15与氢氧化铝佐剂混合,免疫BALB/c小鼠,检测疫苗的免疫原性。结果:双酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明重组融合表达质粒pQE-30-TT-IL-15构建正确,重组蛋白的表达量达到菌体总蛋白的20%,主要以包涵体形式表达,经过纯化、复性后,目的蛋白纯度达到95%以上;蛋白疫苗免疫小鼠后,能诱导高滴度的特异性的IL-15抗体。结论:在大肠杆菌中表达了重组人IL-15融合蛋白疫苗,并具有良好的免疫原性。
关键词
白细胞介素
15
融合
蛋白
疫苗
原核表达
类风湿性关节炎
Keywords
interleukin-
15
fusion protein
vaccine
prokaryotic expression
rheumatoid arthritis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
真核表达重组小鼠IL-15/Fc融合蛋白的制备和活性鉴定
2
作者
孔祥丽
冯云
李燕
李小玉
陈思秀
张平
机构
四川大学口腔疾病研究国家重点实验室
出处
《华西药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期639-642,共4页
文摘
目的制备真核表达小鼠白细胞介素15(IL-15)和IgGγ1Fc段融合蛋白,并探讨其对抗原特异性CD8+T细胞的作用。方法运用RT-PCR方法,从B6小鼠脾细胞中分离小鼠IL-15和IgGγ1绞链区-CH2-CH3Fc cDNA。在IL-153′端和Fc5′端引入BamHI酶切位点,将IL-15和Fc直接连接,构建小鼠IL-15/Fc融合蛋白基因,再连接到真核表达质粒载体pcDNA3.1(a+)上,转化CHO-S细胞表达、纯化后,研究其活性。结果融合蛋白486bp的编码由162个氨基酸组成,其中含48个信号肽氨基酸的小鼠IL-15前体蛋白和由681bp编码227个氨基酸的IgGγ1-CH2-CH3功能区构成;表达蛋白在IL-15信号肽引导下能高效分泌到培养液中,有二聚体和三聚体两种天然结构,单体分子量约50kDa,能特异性的结合IL-15R并抑制抗原诱导的CD8+T细胞的增殖反应。结论成功构建了小鼠IL-15/Fc融合蛋白真核表达载体,并在CHO-S细胞中得到高效表达。此融合蛋白具有较高的生物学活性,可有效地抑制抗原特异性CD8+T细胞的增殖反应。
关键词
白细胞介素
15
/Fc
融合
蛋白
真核表达
白细胞介素
15
CD8^+T
细胞
Keywords
Eukaryotie expression
IL -
15
IL -
15
/Fc fusion protein
CD8^＋ T cell
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人白细胞介素15融合蛋白的表达、纯化及免疫原性检测
李佳林
张存
高源
郝强
王舒宁
张伟
张英起
《生物技术通讯》
CAS
2014
2
下载PDF
职称材料
2
真核表达重组小鼠IL-15/Fc融合蛋白的制备和活性鉴定
孔祥丽
冯云
李燕
李小玉
陈思秀
张平
《华西药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
已选择
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