目的探讨1L-27对支气管哮喘（简称哮喘）患者干扰素y（lFN-γ）及1L-33的调节作用。方法选择56例非细菌性感染所致中-重度哮喘患者为试验病例组，整群匹配方法选择30名正常者为对照组，酶联免疫吸附试验法检测1L-27、干扰素y（IFN-y）、...目的探讨1L-27对支气管哮喘（简称哮喘）患者干扰素y（lFN-γ）及1L-33的调节作用。方法选择56例非细菌性感染所致中-重度哮喘患者为试验病例组，整群匹配方法选择30名正常者为对照组，酶联免疫吸附试验法检测1L-27、干扰素y（IFN-y）、1L-33水平，全血细胞分析仪检测白细胞数、中性校细胞绝对值、嗜酸粒细胞绝对值;同时收集哮喘组患者外周血单个核细胞（PBMC）.加入不同浓度的（5μgiL或0.5μgiL）重组人白介素27（rh1L-27）进行体外培养12 h.酶联免疫吸附试验法检测其培养 上清1FN-y及1L-33浓度;探讨1L-27对1FN-γ、1L-33的影响及各指标间的相关性。结果哮喘组患者血清1L-33较对照组明显升高（t=34. 53. P 〈0. 05）.哮喘组1FN-γ、1L-27水平较对照组明显降低 （ t IFN-γ=27.52. P IFNγ〈0.01; t IL-27 = 32.77 ？ P IL-27 〈0.01） ;不同浓度的rh1L-27刺激PBMC后进行体 外培养后.IFN-y表达分别为[（85.9±12. 1）μgiL.（19.6± 3.2）μgl日，较细胞剌激素组（11. 3±2. 7）μgiL 均有显著升高（t = 34.57. P 〈0. 01; t = 11. 39. P 〈0. OIL 5μgiL rh 1L-27组1L-33表达较对照组有 明显降低[（33.2士11.8）μgiL vs 016.9土17.的μgiL. t =22.69. P 〈0. 01];哮喘患者1FNγ水平变 化与rh1L-27应用剂量呈正相关性（ r = 0. 949. P 〈 0. 0日，而rh 1L-27与1L-33呈负相关性（r = 0.89. P 〈0. 05）。结论 1L-27、1FN-y、1L-33表达水平间存在一定关联强度。展开更多
目的:构建小鼠白介素27(Interleukin 27,IL-27)单链融合基因的真核表达载体并检验其在RAW264.7细胞中的表达情况。方法:提取小鼠脾细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出小鼠EBI3和p28 c DNA。采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,...目的:构建小鼠白介素27(Interleukin 27,IL-27)单链融合基因的真核表达载体并检验其在RAW264.7细胞中的表达情况。方法:提取小鼠脾细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出小鼠EBI3和p28 c DNA。采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)通过编码疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列连接小鼠EBI3和p28基因片段,构建小鼠IL-27单链融合基因(mouse single chain IL-27,msc IL-27),并将其克隆至pc DNA3.1(+)载体。通过酶切和测序鉴定阳性重组载体,将重组质粒pc DNA3.1-IL-27通过脂质体转染法转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,通过RT-PCR方法检测目的基因的表达。结果:测序分析表明,小鼠IL-27单链融合基因中EBI3、linker和p28的连接顺序、方向及碱基序列与预期相符。在转染后的RAW264.7细胞中检测到了小鼠IL-27 m RNA的表达。结论:成功构建了小鼠IL-27单链融合基因及其真核表达载体,并在RAW264.7细胞中实现表达,为进一步探讨IL-27的生物学功能奠定了基础。展开更多
文摘目的探讨1L-27对支气管哮喘（简称哮喘）患者干扰素y（lFN-γ）及1L-33的调节作用。方法选择56例非细菌性感染所致中-重度哮喘患者为试验病例组，整群匹配方法选择30名正常者为对照组，酶联免疫吸附试验法检测1L-27、干扰素y（IFN-y）、1L-33水平，全血细胞分析仪检测白细胞数、中性校细胞绝对值、嗜酸粒细胞绝对值;同时收集哮喘组患者外周血单个核细胞（PBMC）.加入不同浓度的（5μgiL或0.5μgiL）重组人白介素27（rh1L-27）进行体外培养12 h.酶联免疫吸附试验法检测其培养 上清1FN-y及1L-33浓度;探讨1L-27对1FN-γ、1L-33的影响及各指标间的相关性。结果哮喘组患者血清1L-33较对照组明显升高（t=34. 53. P 〈0. 05）.哮喘组1FN-γ、1L-27水平较对照组明显降低 （ t IFN-γ=27.52. P IFNγ〈0.01; t IL-27 = 32.77 ？ P IL-27 〈0.01） ;不同浓度的rh1L-27刺激PBMC后进行体 外培养后.IFN-y表达分别为[（85.9±12. 1）μgiL.（19.6± 3.2）μgl日，较细胞剌激素组（11. 3±2. 7）μgiL 均有显著升高（t = 34.57. P 〈0. 01; t = 11. 39. P 〈0. OIL 5μgiL rh 1L-27组1L-33表达较对照组有 明显降低[（33.2士11.8）μgiL vs 016.9土17.的μgiL. t =22.69. P 〈0. 01];哮喘患者1FNγ水平变 化与rh1L-27应用剂量呈正相关性（ r = 0. 949. P 〈 0. 0日，而rh 1L-27与1L-33呈负相关性（r = 0.89. P 〈0. 05）。结论 1L-27、1FN-y、1L-33表达水平间存在一定关联强度。
文摘目的:构建小鼠白介素27(Interleukin 27,IL-27)单链融合基因的真核表达载体并检验其在RAW264.7细胞中的表达情况。方法:提取小鼠脾细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出小鼠EBI3和p28 c DNA。采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)通过编码疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列连接小鼠EBI3和p28基因片段,构建小鼠IL-27单链融合基因(mouse single chain IL-27,msc IL-27),并将其克隆至pc DNA3.1(+)载体。通过酶切和测序鉴定阳性重组载体,将重组质粒pc DNA3.1-IL-27通过脂质体转染法转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,通过RT-PCR方法检测目的基因的表达。结果:测序分析表明,小鼠IL-27单链融合基因中EBI3、linker和p28的连接顺序、方向及碱基序列与预期相符。在转染后的RAW264.7细胞中检测到了小鼠IL-27 m RNA的表达。结论:成功构建了小鼠IL-27单链融合基因及其真核表达载体,并在RAW264.7细胞中实现表达,为进一步探讨IL-27的生物学功能奠定了基础。
