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猪三种细胞因子基因的克隆与序列测定 被引量：3
1
作者 陈国华 孙世铎 +3 位作者 景志忠 罗启慧 窦永喜 蒙学莲 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第6期432-436,共5页
利用RTPCR技术,从植物凝集素(PHA)、脂多糖(LPS)诱导的猪外周血淋巴细胞(PBMC)中成功地克隆了IL2、IL4、IFNα1基因,诱导后第6～24h细胞因子转录基因量最丰富;诱导剂LPS和PHA联合使用的效果优于LPS或PHA单独使用的诱导效果。序列测定与... 利用RTPCR技术,从植物凝集素(PHA)、脂多糖(LPS)诱导的猪外周血淋巴细胞(PBMC)中成功地克隆了IL2、IL4、IFNα1基因,诱导后第6～24h细胞因子转录基因量最丰富;诱导剂LPS和PHA联合使用的效果优于LPS或PHA单独使用的诱导效果。序列测定与分析表明,克隆的IL2、IL4和IFNα1基因与相应的参考序列的同源性分别是98.5%、99.0%和97.6%。 展开更多
关键词 克隆 猪 白介素-2基因 白介素-4基因 α1-干扰素基因 脂多糖 植物凝集素
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pPIC9K-IL-2重组质粒的构建及其在毕赤酵母中的表达 被引量：1
2
作者 刘斌 祁光宇 +4 位作者 陈晓宇 王宇 牟克斌 黄银君 刘学荣 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期32-36,共5页
根据Ovis aries interleukin(IL-2)序列设计1对引物,用PCR法扩增的目的基因进行克隆,将测序正确的IL-2基因片段和表达载体pPIC9K同时双酶切后相连,构建pPIC9K-IL-2重组表达载体.将线性化的载体pPIC9K-IL-2电转化毕赤酵母GS115,对重组酵... 根据Ovis aries interleukin(IL-2)序列设计1对引物,用PCR法扩增的目的基因进行克隆,将测序正确的IL-2基因片段和表达载体pPIC9K同时双酶切后相连,构建pPIC9K-IL-2重组表达载体.将线性化的载体pPIC9K-IL-2电转化毕赤酵母GS115,对重组酵母转化子经MD平板筛选和PCR分析鉴定后,用G418(4g/L)筛选到多拷贝菌株,进行不同条件下甲醇诱导表达.结果表明:经PCR鉴定IL-2基因已整合到酵母基因组中,表达产物经SDS-PAGE电泳分析发现相对分子质量约为18ku目的蛋白表达条带,本研究成功构建了高效表达重组羊IL-2毕赤酵母菌株,为新型细胞因子佐剂的研发奠定了基础. 展开更多
关键词 绵羊 白介素-2基因 毕氏酵母 基因表达 SDS-PAGE
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人白介素-2重组基因的T载体和pET28a表达载体的构建 被引量：3
3
作者 云妙英 王涛 +1 位作者 张京文 覃筱燕 《中央民族大学学报（自然科学版）》 2008年第2期48-51,93,共5页
从人单核细胞中提取总RNA,利用RT-PCR方法构建cDNA-mRNA杂交链,然后用人白介素-2基因的特异引物进行PCR,PCR产物回收后与T载体连接,经过转化、质粒酶切、测序等一系列手段对插入情况和序列是否正确进行鉴定.鉴定正确后用另一组带有酶切... 从人单核细胞中提取总RNA,利用RT-PCR方法构建cDNA-mRNA杂交链,然后用人白介素-2基因的特异引物进行PCR,PCR产物回收后与T载体连接,经过转化、质粒酶切、测序等一系列手段对插入情况和序列是否正确进行鉴定.鉴定正确后用另一组带有酶切位点的引物和pfu酶进行PCR,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切PCR回收片段及pET28a表达载体,二者经过连接、转化、质粒酶切、测序等手段重新鉴定序列是否正确.结果表明,插入到T载体和pET28a载体中的序列为402 bp的不带信号肽的基因片段,此序列和GenBank中公布的IL-2序列相一致.故从人单核细胞中提取mRNA后,利用RT-PCR构建的人IL-2基因序列完全正确,为下一步的工作提供了基础. 展开更多
关键词 人白介素-2基因 载体 序列鉴定
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