寨卡病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒三重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及评价 被引量：13

1

作者 龚雪蕊 李阿茜 +5 位作者 刘洋 李川 张全福 李德新 梁米芳 王世文 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期52-58,共7页

本研究旨在建立寨卡病毒（ZIKV virus,ZIKV）、登革病毒（Dengue virus,DENV）以及基孔肯雅病毒（Chikungunya virus,CHIKV）三种病毒快速筛查、诊断的核酸检测技术。选用ZIKV的NS1基因、DENV的NS5蛋白基因以及CHIKV的E1蛋白基因作为靶... 本研究旨在建立寨卡病毒（ZIKV virus,ZIKV）、登革病毒（Dengue virus,DENV）以及基孔肯雅病毒（Chikungunya virus,CHIKV）三种病毒快速筛查、诊断的核酸检测技术。选用ZIKV的NS1基因、DENV的NS5蛋白基因以及CHIKV的E1蛋白基因作为靶标区域设计三组特异性引物探针,建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法。用ZIKV、DENV、CHIKV病毒体外转录RNA和病毒细胞培养物对该方法的灵敏性、特异性、重复性等方面进行评价,最后临床样本以及模拟标本验证。结果显示：三重实时荧光定量RT-PCR检测方法扩增效率均可达到90%以上,三种病毒体外转录RNA最低检测限均低于15拷贝/PCR,病毒培养物最低检出限均低于10PFU/mL且与单重检测方法无明显差异。与其他病毒无交叉反应,变异系数均在2%以内。临床标本及模拟标本检出率均可达95%以上。本研究建立的检测寨卡病毒、登革病毒以及基孔肯雅病毒的三重实时荧光RT-PCR方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于寨卡病毒病等相关临床标本的检测。 展开更多

关键词 三重实时荧光定量RT-PCR 寨卡病毒(ZIKV) 登革病毒(denv) 基孔肯雅病毒(CHIKV)

原文传递

云南省瑞丽市2016年登革病毒包膜蛋白基因进化特征分析 被引量：12

2

作者 胡挺松 刘永华 +6 位作者 张海林 尹小雄 李萍 杨召兰 余静 张富强 范泉水 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期854-860,共7页

为阐明云南省德宏州瑞丽市2016年登革病毒(Dengue virus,DENV)流行株包膜蛋白(Envelope protein,E)基因进化特征及其血清型、基因型和流行病学特点。采集登革热患者急性期血清标本,用RT-PCR法检测DENV核酸,用C6/36细胞培养法分离病毒,... 为阐明云南省德宏州瑞丽市2016年登革病毒(Dengue virus,DENV)流行株包膜蛋白(Envelope protein,E)基因进化特征及其血清型、基因型和流行病学特点。采集登革热患者急性期血清标本,用RT-PCR法检测DENV核酸,用C6/36细胞培养法分离病毒,并进行DENV C/PrM和E基因核苷酸序列测定,用MEGA6.0软件邻接法(Neighbor-Joining)进行E基因系统进化分析。结果从瑞丽市2016年登革热患者血清中分离到25株DENV(本地感染病例15株和缅甸输入性病例10株),并获得这25株病毒的E基因核苷酸序列,系统进化分析表明,14株为DENV血清型1型(DENV-1)的基因I型,2株为DENV-2亚洲基因I型,5株为DENV-3基因I型,4株为DENV-4基因I型。这些新分离株与2013~2015年瑞丽市(11DENV-1、4DENV-2和2DENV-4)和临沧市(2DENV-1)相同血清型DENV代表株的基因型和进化群相一致,而与西双版纳州2013年DENV-3基因II型和2015年DENV-2全球基因型不同。所有瑞丽市DENV流行株均与缅甸等东南亚国家流行株具有较近的亲缘关系。这4种血清型DENV广泛分布于中缅两侧边境地区。本研究证实,2016年我国瑞丽市存在着4种血清型DENV的流行,其中DENV-1、DENV-2和DENV-4与2013~2015年瑞丽市同血清型流行株的基因型及其进化群相同,DENV-3为2016年首次出现本地流行。所有血清型病毒的传播来源均为缅甸北部边境地区,应加强中缅两侧边境地区登革热联防联控工作。 展开更多

关键词 登革病毒(denv) 包膜蛋白 基因 系统进化分析

原文传递

登革病毒感染的检测技术研究进展 被引量：7

3

作者 王艳红 宝福凯 柳爱华 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期78-85,共8页

登革病毒(dengue virus,DENV)是引起登革热(dengue fever,DF)的病原体,经蚊叮咬而传播疾病.DF主要流行于热带和亚热带地区.目前,DF已经发展成一个日益严重的全球性公共卫生问题.2012年,DF被列为全球最重要的蚊虫传播性疾病.快速而准确... 登革病毒(dengue virus,DENV)是引起登革热(dengue fever,DF)的病原体,经蚊叮咬而传播疾病.DF主要流行于热带和亚热带地区.目前,DF已经发展成一个日益严重的全球性公共卫生问题.2012年,DF被列为全球最重要的蚊虫传播性疾病.快速而准确的针对DENV感染的检测技术能够有效地控制DF的爆发及减少死亡病例.目前DENV感染的检测技术主要有病毒分离培养、分子生物学诊断及血清学诊断三类,三类检测技术各有优缺点,应该根据具体情况选用适当的检测手段. 展开更多

关键词 登革病毒(denv) 诊断 病毒分离培养 血清学诊断 分子生物学诊断

下载PDF 职称材料

福建省白纹伊蚊中登革病毒的分离与鉴定 被引量：4

4

作者 阚乃鹏 翁育伟 +3 位作者 林琦 陈佳锐 游丽斌 王金章 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期71-76,共6页

近年来福建省登革热(Dengue fever,DF)输入性病例持续存在,且登革热的主要传播媒介白纹伊蚊在全省内广泛分布,为了解福建省福州市登革热的媒介白纹伊蚊携带登革病毒(Dengue virus,DENV)状况,2017年10月7日在福州市台江区元一花园小区内... 近年来福建省登革热(Dengue fever,DF)输入性病例持续存在,且登革热的主要传播媒介白纹伊蚊在全省内广泛分布,为了解福建省福州市登革热的媒介白纹伊蚊携带登革病毒(Dengue virus,DENV)状况,2017年10月7日在福州市台江区元一花园小区内开展伊蚊监测,采用双层叠帐法捕获255只白纹伊蚊蚊体研磨液上清提取核酸后用实时荧光RT-PCR法检测DENV特异性核酸,将检测阳性的蚊体研磨液上清接种C6/36细胞进行病毒分离,成功分离到1株DENV病毒株mosquito13/Fujian/2017;经实时荧光RT-PCR法鉴定所分离病毒株的血清型为I型;利用型特异性引物通过RT-PCR扩增病毒E基因并测序进行分子遗传特性分析;E基因核苷酸和氨基酸同源性分析显示,该毒株与2017年10月17日同小区本地登革热病例血清中分离得到的登革毒株E基因序列完全一致,与越南2014年分离株KT825033/Vietnam/2014核苷酸(99.7%)和氨基酸(99.8%)同源性最高;系统进化树分析表明所分离登革病毒毒株的基因型为I型,与东南亚地区的越南,泰国,柬埔寨等国家进化关系相近,可能输入来源于东南亚国家。本研究证实了登革热外潜伏期的存在以及白纹伊蚊在登革热疫情传播过程中的媒介作用,提示在登革热的防控工作中媒介登革病毒监测、检测的重要性,也提示福建省需要加强输入来源监测,特别是东南亚入境人员的监测。 展开更多

关键词 登革热(DF) 登革病毒(denv) 白纹伊蚊 系统进化树 同源性分析

原文传递

寨卡和登革病毒流行病学相似性分析 被引量：4

5

作者 刘荣飞 陈盈 陆家海 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期508-511,共4页

寨卡病毒(ZIKV)和登革病毒(DENV)在分子结构和流行特征方面具有很多相似性,登革热疫情现在已经作为很多模型预测寨卡流行的参考。全面综合和对比ZIKV和DENV在宿主、传播途径、易感人群方面的异同,对了解2者的关系有重要意义。同时结合... 寨卡病毒(ZIKV)和登革病毒(DENV)在分子结构和流行特征方面具有很多相似性,登革热疫情现在已经作为很多模型预测寨卡流行的参考。全面综合和对比ZIKV和DENV在宿主、传播途径、易感人群方面的异同,对了解2者的关系有重要意义。同时结合广东省登革热疫情、寨卡疫情,分析2者在广东省的流行情况,为防控提供参考意见。 展开更多

关键词 寨卡病毒(ZIKV) 登革病毒(denv) 流行

原文传递

登革病毒(DENV)基因组的5’和3’末端所蕴含的生物调控信息 被引量：2

6

作者 任凯 陈利民 李世林 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期328-335,共8页

登革病毒(Dengue virus,DENV)为正链RNA黄病毒,其基因组进入宿主细胞后经历了蛋白翻译和正链-负链-正链的RNA复制过程,病毒基因组的5’末端区域和3’末端区域的RNA序列和结构在上述过程中发挥不同的功能,病毒自身因此能更好地完成其生... 登革病毒(Dengue virus,DENV)为正链RNA黄病毒,其基因组进入宿主细胞后经历了蛋白翻译和正链-负链-正链的RNA复制过程,病毒基因组的5’末端区域和3’末端区域的RNA序列和结构在上述过程中发挥不同的功能,病毒自身因此能更好地完成其生命活动。本文对DENV基因组末端区域各个序列和结构的基本功能,帽子结构依赖或非经典的非帽非IRES依赖的蛋白翻译,以环化为核心的5’–3’RNA长程相互作用的复制方式和3’UTR进化出的重复序列及串联结构在适应不同宿主所发挥的功能进行综述。 展开更多

关键词 登革病毒(denv) 翻译 复制 环化 重复序列 串联结构

原文传递

表达2型登革病毒NS1重组麻疹病毒的拯救及鉴定 被引量：2

7

作者 张勇侠 陈宗香 +5 位作者 高雅丽 罗心梅 丛聪 康庄 赵婷 刘兰军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期860-868,共9页

以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×... 以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×His,最后构建获得插入了外源基因DENV2 NS1 6×His的载体pT7MVS191-DENV2NS1 6×His。质粒pT7MVS191-DENV2NS1 6×His与表达麻疹病毒N、P、L蛋白的辅助质粒共转染BSRT7细胞完成病毒包装后,在Vero细胞内增殖,完成重组病毒的拯救。重组病毒在Vero细胞上传至第4代,基因测序证明重组病毒中成功插入了外源基因DENV2NS1 6×His;Western Blot、原位免疫荧光反应可检测到重组病毒中麻疹病毒N蛋白及外源抗原DENV2NS1 6×His的表达;重组病毒增值特性与疫苗株MVS191相似;P1至P4代的重组病毒滴度稳定在6log10CCID50/mL～6.5log10CCID50/mL之间;P4代重组病毒免疫家兔,兔抗血清中麻疹病毒中和抗体效价大于1∶160;Western Blot可检测到免疫兔血清中DENV2NS1的抗体。本文成功构建了以麻疹病毒为载体,表达外源抗原DENV2NS1的重组病毒,为以麻疹病毒为载体的登革疫苗研发奠定基础。 展开更多

关键词 麻疹病毒沪-191疫苗株 登革病毒(denv) 非结构蛋白NS1 重组病毒 原位免疫荧光

原文传递

四种血清型登革病毒包膜蛋白结构域Ⅲ(EDⅢ)中和抗体的制备及鉴定

8

作者 丁细霞 丘立文 +1 位作者 陈月 温坤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期748-753,共6页

目的制备四种血清型交叉反应性的登革病毒包膜蛋白结构域Ⅲ(DENV-EDⅢ)特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性及体外中和活性。方法通过毕赤酵母表达具有良好抗原性的1~4型DENV-EDⅢ蛋白,并以四种DENV血清型EDⅢ蛋白混合免疫BALB/c小鼠... 目的制备四种血清型交叉反应性的登革病毒包膜蛋白结构域Ⅲ(DENV-EDⅢ)特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性及体外中和活性。方法通过毕赤酵母表达具有良好抗原性的1~4型DENV-EDⅢ蛋白,并以四种DENV血清型EDⅢ蛋白混合免疫BALB/c小鼠,采用聚乙二醇融合技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出稳定分泌抗DENV-EDⅢ抗体的杂交瘤细胞,进一步通过间接免疫荧光法对所获得mAb的特异性进行鉴定,并通过改良的酶联免疫斑点微中和实验对所获得的mAb进行体外中和活性测定。结果获得6株特异性针对1~4型DENV-EDⅢ蛋白的mAb和11株特异性针对某一血清型DENV的EDⅢmAb,其中有1株mAb同时对四种血清型DENV有均衡的体外强中和活性,其对四种血清型DENV的半数抑制剂量(IC)分别为(0.05、1.89、0.02、3.91)μg/mL。结论成功筛选获得了一株可同时中和四种血清型DENV的EDⅢ特异性mAb。 展开更多

关键词 登革病毒(denv) 包膜蛋白结构域Ⅲ(EDⅢ) 单克隆抗体(mAb)

下载PDF 职称材料

登革病毒交叉反应性单克隆抗体的制备及特异性研究

9

作者 巩沅鑫 郭红霞 +3 位作者 叶楠 邱民月 杨茂成 李晋涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期44-54,共11页

近年来全球登革疫情严峻,而针对登革疫苗的研究一直进展缓慢,尚无有效的疫苗或治疗性药物,被动免疫逐渐成为研究热点。本研究旨在通过制备登革病毒(Dengue virus,DENV)交叉反应性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)并鉴定其特异性,期... 近年来全球登革疫情严峻,而针对登革疫苗的研究一直进展缓慢,尚无有效的疫苗或治疗性药物,被动免疫逐渐成为研究热点。本研究旨在通过制备登革病毒(Dengue virus,DENV)交叉反应性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)并鉴定其特异性,期望为登革病毒的被动免疫治疗及疫苗的研发提供一定的物质基础和参考。本研究采用4种DENV联合免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用有限稀释法对阳性孔细胞进行筛选,获得DENV交叉反应性mAb。采用腹水诱生法对其中的一株mAb进行了大量制备和纯化,鉴定其Ig亚类,通过间接法酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测了mAb对4种血清型DENV的有效滴度,通过间接免疫荧光试验(Immunofluorence assay,IFA)和蛋白质印迹(Western Blot,WB)对其特异性进行鉴定,通过噬斑减少中和试验(Plaque reduction neutralization test,PRNT)检测了mAb的中和能力。结果显示成功获得3株DENV交叉反应性mAb,分别为1G2、2F1、3G9。其中1G2株抗体的Ig亚类为IgG2b,纯化后抗体对DENV1~DENV4的有效滴度分别为1∶640、1∶640、1∶320、1∶320。IFA实验表明所获得的单抗1G2是针对DENV的特异性抗体,与黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)、西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)和寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)之间无交叉反应性;WB结果表明单抗1G2识别的目的蛋白是E蛋白(55~60kD)。PRNT结果表明单抗1G2对4种血清型DENV具有一定的中和活性,DENV1至DENV4的PRNT50分别为1∶80、1∶80、1∶80和1∶40。本研究成功筛选并鉴定到一株可交叉识别4种登革病毒E蛋白的mAb。 展开更多

关键词 登革病毒(denv) 单克隆抗体(mAb) 间接法酶联免疫吸附试验(ELISA) 间接免疫荧光试验(IFA) 蛋白质印迹(WB)

原文传递

Ⅲ型登革病毒在THP-1细胞上的ADE模型建立

10

作者 姜黎明 杨佳佳 +3 位作者 罗佳 叶超 文送娇 孙强明 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第5期429-432,共4页

登革热(dengue fever,DF)是由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型登革病毒(dengue virus,DENV)引起的急性传染病,抗体依赖增强感染(antibody-dependent enhancement,ADE)是自限性的登革热以及危及生命的登革出血热(dengue hemorrhagic fever,DHF)或登革... 登革热(dengue fever,DF)是由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型登革病毒(dengue virus,DENV)引起的急性传染病,抗体依赖增强感染(antibody-dependent enhancement,ADE)是自限性的登革热以及危及生命的登革出血热(dengue hemorrhagic fever,DHF)或登革休克综合症(dengue shock syndrome,DSS)等重症的主要原因。采用不同稀释度的Ⅱ型登革病毒prM前膜抗体与分离自云南西双版纳重症病人的Ⅲ型登革病毒复合感染THP-1细胞,通过实时荧光定量PCR发现亚中和浓度prM前膜抗体诱发THP-1细胞液中更高浓度的病毒载量。在THP-1细胞系上的研究可为后续研究登革病毒ADE打下坚实的基础。 展开更多

关键词 登革病毒(denv) 登革热(DF) 抗体依赖增强感染(ADE) THP-1细胞 体外感染模型

下载PDF 职称材料

广东省东莞市2017—2018年登革病毒E基因进化分析 被引量：5

11

作者 陈仲威 张莉萍 +2 位作者 方昌勇 黄勇 李艳芬 《中国热带医学》 CAS 2019年第10期963-971,共9页

目的测定广东省东莞市2017—2018年Ⅰ~Ⅳ型登革病毒(DENV-1~DENV-4)的E基因序列,分析其系统进化情况及流行基因亚型,从分子水平探讨病毒来源。方法收集东莞市2017—2018年140例可疑登革热患者急性期血清,用实时荧光PCR方法检测病毒核酸... 目的测定广东省东莞市2017—2018年Ⅰ~Ⅳ型登革病毒(DENV-1~DENV-4)的E基因序列,分析其系统进化情况及流行基因亚型,从分子水平探讨病毒来源。方法收集东莞市2017—2018年140例可疑登革热患者急性期血清,用实时荧光PCR方法检测病毒核酸,阳性血清用C6/36细胞分离培养登革病毒,测定分离株E基因序列,绘制系统进化树,结合流行病学资料进行分子流行病学分析。结果140份急性期血清中DENV核酸阳性54份,阳性率38.6%,DENV-1阳性占53.7%。分离得到17株毒株。序列比对和系统进化分析显示,10株DENV-1分离株间核苷酸同源性为90.0%~99.9%,氨基酸同源性为96.6%~99.8%,分属基因Ⅰ型和基因Ⅴ型。7株基因Ⅰ型分离株与泰国2015年、缅甸2015年、中山2015年及越南2016年流行株核苷酸同源性较高(99.3%~99.9%),其中2018年本地株D2018078与2017年输入株D2017008核苷酸同源性达99.8%;3株基因Ⅴ型分离株与印度2014年、2017年株及新加坡2014年流行株核苷酸同源性较高(97.7%~99.1%)。4株DENV-2分离株间核苷酸同源性为91.0%~98.6%,推导氨基酸同源性为97.6%~99.8%,分属混合型和亚洲Ⅰ型,2株混合型分离株与马来西亚2014年、台湾2015年流行株核苷酸同源性较高(99.6%~99.7%);2株亚洲Ⅰ型分离株分别与越南2015年、泰国2011年流行株核苷酸同源性较高(99.3%~99.5%)。2株DENV-3分离株间核苷酸同源性为98.4%,氨基酸同源性为99.4%,均属基因Ⅰ型,与缅甸2017年、马来西亚2015年流行株核苷酸同源性较高(99.3%~99.7%)。1株DENV-4分离株与越南2013、2016年流行株同源性较高(99.3%~99.5%),属基因Ⅰ型。结论2017—2018年东莞市登革热的病原体主要为DENV-1,其次是DENV-2,各至少有2种基因亚型同时在流行;DENV-3和DENV-4各至少有1种基因亚型在流行。流行方式主要为南亚和东南亚国家及我国中山、台湾等地输入病例引起的本地暴发流行,存在输入引起本地感染的风险。 展开更多

关键词 Ⅰ~Ⅳ型登革病毒(denv-1~denv-4) E基因 基因亚型 序列同源性 进化分析

原文传递

东莞市2014—2017年Ⅰ型登革病毒流行情况及E基因序列分析 被引量：4

12

作者 陈仲威 张莉萍 +3 位作者 方昌勇 黄勇 李艳芬 张欣 《中国热带医学》 CAS 2018年第10期1016-1020,共5页

目的研究2014—2017年东莞市Ⅰ型登革病毒(DENV-1)流行情况,分析其可能的地域来源及基因特征。方法采用实时荧光PCR方法对2014—2017年东莞市疾病预防控制中心收到的登革热疫情样本进行核酸检测分型,阳性标本进行病毒分离及鉴定,扩增并... 目的研究2014—2017年东莞市Ⅰ型登革病毒(DENV-1)流行情况,分析其可能的地域来源及基因特征。方法采用实时荧光PCR方法对2014—2017年东莞市疾病预防控制中心收到的登革热疫情样本进行核酸检测分型,阳性标本进行病毒分离及鉴定,扩增并测定部分分离株E基因序列,共得到8株DENV-1及其E基因序列,与Genebank中选取的世界各地DENV-1流行株及原型株进行参考对比,用DNASTAR软件进行核苷酸、氨基酸序列分析和同源性比较,用Mega4.0.2软件进行分子分型和系统进化树构建。结果 665份标本中DENV阳性251份,其中DENV-1阳性占90.0%。以9月、10月为发病高峰期,占86.7%;男女比例为0.92∶1,20～<70岁年龄组发病例数最多,占75.1%;DENV-1阳性本地病例以虎门、麻涌、南城、厚街和莞城五个镇街最多,占76.4%。序列比对显示,8株DENV-1的E基因序列核苷酸同源性为90.2%～99.6%,氨基酸同源性为96.4%～100.0%,与选取的近年世界各地流行株的核苷酸与氨基酸同源性分别为89.2%～100.0%和90.2%～100.0%。系统进化树分析显示,2014—2017年东莞8株DENV-1分离株与我国广州、深圳及新加坡、马来西亚等东南亚国家当年或往年DENV-1流行株同源性较高,分属基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ型,但以基因Ⅰ、Ⅴ型为主。所有8株分离株与原型株进化距离较远。结论 2014—2017年东莞市登革病毒流行以DENV-1为主,流行基因亚型主要为基因Ⅰ型和基因Ⅴ型,流行方式为广深等周边地市及新加坡、马来西亚等东南亚各国输入病例引起的本地暴发流行。 展开更多

关键词 Ⅰ型登革病毒(denv-1) E基因 基因亚型 序列同源性 进化分析

原文传递