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癌胚抗原(CEA)启动子在肿瘤细胞中的特异表达及介异bak基因诱发凋亡 被引量：4
1
作者 杨涛 祝华斌 齐义鹏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期723-730,共8页
构建由癌胚抗原 (CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)表达的重组表达质粒pCEA EGFP .用转染细胞后检测荧光的方法对CEA阳性细胞进行简便、直观的检测 ,并结合流式细胞计数对CEA启动子在人结直肠腺癌细胞LS 1 74T、结肠癌... 构建由癌胚抗原 (CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)表达的重组表达质粒pCEA EGFP .用转染细胞后检测荧光的方法对CEA阳性细胞进行简便、直观的检测 ,并结合流式细胞计数对CEA启动子在人结直肠腺癌细胞LS 1 74T、结肠癌细胞SW 4 80、肺腺癌细胞A5 49、人宫颈癌细胞HeLa和人喉癌细胞HEp 2中的活性进行了分析 ,发现其在SW4 80、LS 1 74T、A5 49中活性较强 ,而在HeLa和HEp 2中无活性 .构建由CEA启动子控制凋亡基因bak表达的重组表达质粒pCEA bak ,转染HeLa及SW 4 80细胞 ,用Hoechst332 5 8染色及PI染色 流式细胞计数分析的方法证明 ,pCEA bak转染能够特异性引起SW 4 80细胞的凋亡 .结果表明 ,CEA启动子具有很好的特异性 ,CEA介导bak基因的方法可望用于CEA阳性癌细胞的靶向性基因治疗 . 展开更多
关键词 癌胚抗原启动子 增强型绿色荧光蛋白 细胞凋亡 基因治疗 肿瘤细胞
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5HRE联合CEAp靶向调控RASSF1A基因对SGC7901胃癌细胞株抑制作用的研究 被引量：1
2
作者 周培华 孙学军 +8 位作者 郑见宝 王炜 王孝珑 陈南征 魏光兵 范渊 李孝彬 王训凯 禄韶英 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2015年第10期1201-1208,共8页
目的探讨人5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控元件的靶向性及调控RAS相关区域家族1A(RASSF1A)抑癌基因的慢病毒载体对SGC7901胃癌细胞的抑制作用。方法 1分别采用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学SP染色及West... 目的探讨人5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控元件的靶向性及调控RAS相关区域家族1A(RASSF1A)抑癌基因的慢病毒载体对SGC7901胃癌细胞的抑制作用。方法 1分别采用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学SP染色及Western blot法检测SGC7901、MKN28和MCF-10A细胞株中癌胚抗原(CEA)mRNA及其蛋白,以及RASSF1A蛋白的表达水平,以确定实验细胞和阴性对照细胞。2构建p GL4.20-5HRE-CEAp-Luc载体以转染SGC7901、MKN28和MCF-10A细胞株,将各细胞株分为2组,分别加入(缺氧组)或不加入CoCl2(常氧组),比较各细胞株中缺氧组和常氧组细胞的启动活性。3将重组慢病毒载体(p LV-5HRE-CEAp-RASSF1A)及相应空病毒载体包装成病毒颗粒LV-5HC-RASSF1A(感染组)和LV-NC(阴性对照组),感染SGC7901细胞。以未感染任何病毒的SGC7901细胞作为空白对照组,将该3组细胞再分为2个亚组,分别加入(缺氧组)或不加入CoCl2(常氧组),比较缺氧组和常氧组细胞中RASSF1A蛋白的表达水平和细胞增殖抑制率。结果 1 q RT-PCR结果显示:SGC7901细胞株中CEA m RNA的表达水平高于MKN28及MCF-10A细胞株(P<0.05);免疫组织化学染色结果显示:CEA的表达水平在SGC7901、MKN28及MCF-10A细胞株中依次递减,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示:在SGC7901及MKN28细胞株中未检测到RASSF1A蛋白的电泳条带,而在MCF-10A细胞株中可检测到。据此确定SGC7901细胞株为实验细胞,MKN28细胞株为阴性对照细胞。2转染p GL4.20-5HRE-CEAp-Luc载体后,在SGC7901及MKN28细胞株中,同种细胞株内与常氧组比较,缺氧组细胞的活性倍数均升高(P<0.01);而在MCF-10A细胞株中,常氧组和缺氧组细胞的活性倍数比较差异无统计学意义(P>0.05)。在不加入CoCl2条件和加入CoCl2条件下,同等条件下与SGC7901细胞株比较,MKN28及MCF-10A细胞株的活性倍数均较低(P<0.05);与MKN28细胞株比较,MCF-10A细胞株的活性倍数� 展开更多
关键词 5拷贝低氧反应元件 癌胚抗原启动子 RAS相关区域家族1A基因 胃癌 基因治疗
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慢病毒介导5HRE-CEAp调控RASSF1A表达对胃癌细胞SGC7901抑制的研究 被引量：1
3
作者 周培华 赵玉生 +6 位作者 郑新 宋鸣 朱委 王威 王志 冯伟 孙学军 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第13期1989-1993,共5页
目的:探讨5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控抑癌基因RAS相关域家族1A(RASSF1A)的慢病毒载体(LV-5HRE-CEAp-RASSF1A)对胃癌细胞SGC7901的体外抑制作用。方法:采用qRT-PCR方法检测空白对照组细胞SGC7901、阴性对照组... 目的:探讨5拷贝低氧反应元件(5HRE)联合癌胚抗原启动子(CEAp)调控抑癌基因RAS相关域家族1A(RASSF1A)的慢病毒载体(LV-5HRE-CEAp-RASSF1A)对胃癌细胞SGC7901的体外抑制作用。方法:采用qRT-PCR方法检测空白对照组细胞SGC7901、阴性对照组细胞SGC7901/NC及慢病毒载体感染的实验组细胞SGC7901/5HRE-CEAp-RASSF1A中RASSF1A mRNA表达水平;通过CCK-8实验检测各组细胞的生长曲线;通过流式细胞技术检测各细胞的凋亡及细胞周期。结果:qRT-PCR结果显示,与其他组比较,实验组细胞的RASSF1A mRNA水平在低氧条件下明显升高(P<0.01);CCK-8实验结果显示从第3天开始,低氧条件下实验组细胞的OD值开始低于其它各组细胞(P<0.05);流式细胞检测结果显示与其它各组细胞比较,低氧条件下实验组细胞凋亡比例明显增加(P<0.01),并且其细胞周期G1期的细胞百分比明显增加(P<0.05)。结论:慢病毒载体LV-5HRE-CEAp-RASSF1A具有在低氧诱导下显著抑制胃癌细胞株SGC7901增殖的作用。 展开更多
关键词 5拷贝低氧反应元件 癌胚抗原启动子 RAS相关域家族1A基因 胃癌 基因治疗
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癌胚抗原启动子控制基因靶向表达研究
4
作者 邱源 何建行 +3 位作者 李富骊 刘启才 陈汉章 钟琰 《现代临床医学生物工程学杂志》 2006年第6期484-487,共4页
目的构建由癌胚抗原(CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的重组表达质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP。了解CEA启动子靶向驱动的含目的基因的重组质粒的效率。方法构建重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP,以PCR,DNA测序及酶切进行鉴... 目的构建由癌胚抗原(CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的重组表达质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP。了解CEA启动子靶向驱动的含目的基因的重组质粒的效率。方法构建重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP,以PCR,DNA测序及酶切进行鉴定。通过脂质体介导重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP体外分别转染A549细胞(CEA阳性)和16HBE(CEA阴性)细胞,进行绿色荧光蛋白检测分析基因表达的靶向性。结果CMVE-pCEA-IRES-EGFP分别用VSPⅠ,VSPⅠ/NheⅠ酶切后电泳分别出现大小约405bp,372bp和4110bp的片断,与预计各片断大小相符。以CMVE-pCEA-IRES-EGFP为模板PCR扩增得到CMV和CEA片段,分别连于T载体(pMD18-T)并测序,结果正确。嵌合启动子CMVE-pCEA能特异地驱动下游报告基因在CEA阳性肺癌细胞株绿色荧光表达阳性,而CEA阴性细胞株16HBE表达阴性。结论成功构建了嵌合启动子CMVE-pCEA驱动的CMVE-pCEA-IRES-EGFP重组质粒,并能在转染的CEA阳性细胞株中表达,为靶向启动双基因表达载体构件提供了实验依据。 展开更多
关键词 癌胚抗原启动子 肿瘤 靶向表达 巨细胞病毒增强子
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CEA启动子启动双自杀基因与单自杀基因对Lovo细胞杀伤作用的比较 被引量：5
5
作者 王天宝 汪建平 +2 位作者 董文广 钟女奇 周军 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期308-311,共4页
【目的】探讨CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosinedeaminase,CD)与胸苷激酶(thymidinekinase,TK)组织特异性对Lovo结肠癌细胞杀伤作用是否优于单一自杀基因。【方法】以带有Cp、CD与TK的重组腺病毒转染的L... 【目的】探讨CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosinedeaminase,CD)与胸苷激酶(thymidinekinase,TK)组织特异性对Lovo结肠癌细胞杀伤作用是否优于单一自杀基因。【方法】以带有Cp、CD与TK的重组腺病毒转染的Lovo细胞作为实验组,未转染者为对照组,5鄄氟胞嘧啶(5鄄fluorocytosine,5鄄Fc)组系列质量浓度:10、8、6、4、2、0滋g/mL;更昔洛韦(ganciclovir,GCV)组系列质量浓度:5、4、3、2、1、0滋g/mL;两药联合应用的系列质量浓度:(10+5)、(8+4)、(6+3)、(4+2)、(2+1)、0滋g/mL。光镜观察细胞形态,噻唑蓝法测定细胞生长抑制率(growthinhibitionrate,GIR)及半数抑制浓度(IC50)。病毒转染的Lovo细胞与未转染的Lovo细胞按不同比例混合培养,给予5鄄Fc5滋g/mL或/和GCV10滋g/mL,噻唑蓝法测定细胞GIR。【结果】对照组5鄄Fc与GCV对细胞的生长抑制作用极低,5鄄Fc组IC50为2400滋g/mL,GCV组为3500滋g/mL。实验组随5鄄Fc与GCV剂量增加,对细胞的杀伤作用明显增加,5鄄Fc组IC50为5.75滋g/mL,GCV组为3.50滋g/mL,两者同时应用相当于5鄄Fc1.90滋g/mL+GCV0.95滋g/mL,细胞对5鄄Fc的敏感性提高417.4倍,对GCV的敏感性提高1000倍。病毒杀伤Lovo细胞具有明显的“旁观者”效应,联合应药组的“旁观者”效应明显高于单独应用组。【结论】双自杀基因细胞毒效应以及“旁观者”效应均高于单一自杀基因。 展开更多
关键词 结肠癌 癌胚抗原基因启动子 胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶
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CEA启动子特异性启动双自杀基因CD与TK在CEA^+恶性肿瘤中表达 被引量：2
6
作者 王天宝 董文广 汪建平 《中华普通外科学文献（电子版）》 2008年第1期21-22,53,共3页
目的探讨CEA启动子(CEA promoter,Cp)在肿瘤细胞特异性启动双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)与胸苷激酶(thymidine kinase,TK)的作用。方法培养Lovo与Hela细胞,传代冻存。10μl带有Cp.CD.TK重组腺病毒(recombi-nant adeno... 目的探讨CEA启动子(CEA promoter,Cp)在肿瘤细胞特异性启动双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)与胸苷激酶(thymidine kinase,TK)的作用。方法培养Lovo与Hela细胞,传代冻存。10μl带有Cp.CD.TK重组腺病毒(recombi-nant adenovirus with Cp.CD.TK,RA-Cp.CD.TK)病毒液转染Lovo与Hela,荧光显微镜观察,收集细胞提取总RNA,PCR扩增Cp、CD与TK,电泳鉴定。病毒转染Lovo与Hela传代接种96孔培养板,每株细胞分两组,每组24孔:第一组给予5-氟胞嘧啶(5-fluorocy-tosine,5-Fc)10mg/L培养液,第二组给予更昔洛韦(ganciclovir,GCV)5mg/L培养液,光镜观察细胞形态,台盼蓝染色检测细胞活力。结果转染病毒的Lovo细胞及Hela细胞均可见绿色荧光,PCR均可扩增出Cp、CD和TK。5-Fc和GCV对Lovo细胞具有很强的杀伤作用,对Hela细胞则微弱,5-Fc实验组Lovo细胞活力平均为8.54%±1.34%,Hela细胞平均为95.05%±2.18%(P<0.01)。GCV实验组Lovo细胞活力平均为8.38%±1.22%,Hela细胞平均为95.39%±1.64%(P<0.01)。结论RA-Cp.C.T靶向性杀伤CEA+的Lovo结肠癌细胞,而对CEA-的Hela子宫颈癌细胞生长无影响。 展开更多
关键词 人结肠癌 癌胚抗原基因启动子 胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶
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靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK构建的初步研究 被引量：1
7
作者 罗琪 熊宇 卢毅卓 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期983-987,共5页
目的构建由癌胚抗原启动子(CEA promoter,Cp)驱动的靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK,并观察其在CEA阳性大肠癌细胞中专一性表达和对增殖的影响。方法采用PCR分别扩增出Cp、CD、TK三种目的基因并采用双酶切、连接依次将Cp... 目的构建由癌胚抗原启动子(CEA promoter,Cp)驱动的靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK,并观察其在CEA阳性大肠癌细胞中专一性表达和对增殖的影响。方法采用PCR分别扩增出Cp、CD、TK三种目的基因并采用双酶切、连接依次将Cp、CD、TK基因插入pcDNA3.1(-)质粒;将靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK分别转染CEA阳性的人大肠癌SW480细胞和CEA阴性的Hela细胞,采用RT-PCR检测CD-TK基因的表达。用MTT法检测转染pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK后的SW480细胞对化疗前药5-氟胞嘧啶(5-Fc)和丙氧鸟苷(GCV)的敏感性。结果Cp基因片段、CD基因片段和TK基因均克隆正确。靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK经凝胶电泳和DNA测序证实构建正确。转染了靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK的SW480细胞经过RT-PCR鉴定证实有CD-TK基因的表达,CEA阴性Hela细胞则没有CD-TK基因的表达。细胞培养试验中,转染了靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK的SW480细胞对前药5-Fc和GCV敏感。结论正确构建了靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK,靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK能够使CD-TK基因在CEA阳性细胞中专一性表达,达到靶向杀伤大肠癌细胞目的。 展开更多
关键词 双自杀基因 癌胚抗原基因启动子 CD TK 大肠癌
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