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柯萨奇病毒A组2型VP1和VP3蛋白原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：1
1
作者 胡岗 靳卫平 +6 位作者 卢佳 吴杰 周金戈 王文辉 王泽鋆 孟胜利 申硕 《微生物学免疫学进展》 2020年第4期22-28,共7页
目的制备柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)兔抗病毒蛋白质1(viral protein 1,VP1)和病毒蛋白质3(viral protein 3,VP3)多克隆抗体,为CV-A2相关研究制备定性、定量试剂。方法用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)分... 目的制备柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)兔抗病毒蛋白质1(viral protein 1,VP1)和病毒蛋白质3(viral protein 3,VP3)多克隆抗体,为CV-A2相关研究制备定性、定量试剂。方法用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)分别扩增CV-A2 VP1、VP3基因片段(612、420个碱基),并将其克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN43、pGEX-6P-1-VP3-ΔN8。将其转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达N端带有谷胱甘肽S移换酶(glutathione S-transferase,GST)标签的重组蛋白,并对其进行纯化。将纯化的GST-CV-A2-VP1-ΔN43、GST-CV-A2-VP3-ΔN8融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗血清,并通过ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescent assay,IFA)进行鉴定。结果重组表达载体构建成功,目的蛋白是以不可溶的包涵体存在。ELISA结果显示,CV-A2-VP1-ΔN43所制备的免疫血清最大稀释倍数为106时,免疫血清的A450 nm值为免疫前血清的2.0倍;CV-A2-VP3-ΔN8制备的免疫血清最大稀释倍数为107时,免疫血清的A450值为免疫前血清的6.0倍。Western blot结果显示,所制备的多克隆抗体可特异性识别CV-A2-VP1、VP3。IFA结果显示,抗GST-VP1-ΔN43、GST-VP3-ΔN8多克隆抗体可特异性识别CV-A2 VP1、VP3蛋白。结论成功制备了特异性识别原核表达的CV-A2重组蛋白及天然CV-A2病毒颗粒中的VP1、VP3蛋白的多克隆抗体。该抗体的成功制备为结构蛋白VP1、VP3的功能研究及病毒定性定量分析奠定了基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组2型 病毒蛋白质1 病毒蛋白质3 多克隆抗体 原核表达
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LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1癌基因微小RNA表达谱的影响 被引量：4
2
作者 肖胜军 曾思恩 +2 位作者 方宇 张小玲 韦敏怡 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期705-708,共4页
目的:比较鼻咽癌细胞系CNE1与其EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)稳定转染细胞系CNE1-LMP1的癌基因微小RNA(oncomiRs)表达谱的差异,探讨LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1 oncomiRs表达的影响。方法:采用包含132个oncomiRs分子的microRNA芯片分析CNE1与CNE... 目的:比较鼻咽癌细胞系CNE1与其EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)稳定转染细胞系CNE1-LMP1的癌基因微小RNA(oncomiRs)表达谱的差异,探讨LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1 oncomiRs表达的影响。方法:采用包含132个oncomiRs分子的microRNA芯片分析CNE1与CNE1-LMP1的表达差异,并采用荧光定量PCR验证差异表达明显的oncomiRs分子。结果:二者共检出30个miRNA分子,CNE1中检出miRNA分子19个;其中11个为CNE1-LMP1特异性表达。在共同表达的19个miRNA分子中,在CNE1-LMP1中表达升高2倍以上的miRNA分子有6个:hsa-miR-19b、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-22、hsa-miR-149、hsa-miR-150和hsa-miR-188。没有表达降低2倍以上的分子。在CNE1-LMP1特异性表达的11个miRNA中,hsa-miR-122a呈高水平表达,其表达水平超过内对照。通过荧光定量PCR验证6个差异分子的表达,发现改变倍数与芯片结果一致(P<0.01)。结论:LMP1能影响oncomiRs表达谱,可能是LMP1作为病毒癌基因发挥作用的另一重要途径。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 基因 CNE1 EB病毒潜伏膜蛋白质1 miRNA
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细小病毒H-1抗肿瘤作用的研究进展
3
作者 施慧(综述) 刘炯(审校) 汪芳裕(审校) 《肿瘤研究与临床》 CAS 2013年第4期281-284,共4页
细小病毒（PV）在感染人体后没有明显症状，将其用于抗肿瘤治疗获得了较好的疗效。H-1PV对于多形性胶质母细胞瘤（GBM）、伯基特淋巴瘤、肝癌、胰腺导管腺癌（PDAC）、乳腺癌、结肠癌都有治疗效果，其抗肿瘤作用主要通过直接溶瘤活性、... 细小病毒（PV）在感染人体后没有明显症状，将其用于抗肿瘤治疗获得了较好的疗效。H-1PV对于多形性胶质母细胞瘤（GBM）、伯基特淋巴瘤、肝癌、胰腺导管腺癌（PDAC）、乳腺癌、结肠癌都有治疗效果，其抗肿瘤作用主要通过直接溶瘤活性、NS1蛋白和免疫调节实现。 展开更多
关键词 H-1细小病毒 胶质母细胞瘤 伯基特淋巴瘤 肝肿瘤 胰腺导管腺癌 病毒非结构蛋白质1
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