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猪繁殖与呼吸综合征病毒HH08株NSP2蛋白多克隆抗体的制备及其生物学功能的研究 被引量：4
1
作者 马玲 李广兴 +2 位作者 洪琴 任玉东 任晓峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期377-383,共7页
利用RT-PCR和SOE PCR技术扩增得到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HH08株NSP2全长基因,经抗原性和亲水性分析,将NSP2部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-NSP2转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经诱导... 利用RT-PCR和SOE PCR技术扩增得到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HH08株NSP2全长基因,经抗原性和亲水性分析,将NSP2部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-NSP2转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经诱导表达获得107ku的重组NSP2蛋白。Western-blot检测表明,重组蛋白能够与PRRSV参考阳性血清反应。以纯化的重组NSP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,其ELISA效价达到1∶1015以上;Western-blot试验表明,其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验显示,用抗NSP2多克隆抗体可以检测到PVAX-NSP2转染BHK-21细胞所表达的NSP2蛋白,且与经典型和高致病型PRRSV毒株均有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明,多抗血清对PRRSV经典和高致病性毒株的抑制率可达到68%和53%。上述研究结果为PRRSV检测及NSP2蛋白功能的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2 多克隆抗体 间接免疫荧光试验 病毒感染抑制试验
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利用DNA Shuffling技术构建重组PRRSV ORF5基因 被引量：1
2
作者 刘建奎 魏春华 +3 位作者 黄春芳 陈小燕 戴爱玲 杨小燕 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期888-896,共9页
通过DNA shuffling技术对PRRSV ORF5基因进行改组,研究其对异源毒株交叉中和能力。将获得的嵌合基因△2ORF5与载体pET-32a连接,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21中,经诱导表达获得约42 kDa重组蛋白。将纯化的重组△2ORF5蛋白免疫BAL... 通过DNA shuffling技术对PRRSV ORF5基因进行改组,研究其对异源毒株交叉中和能力。将获得的嵌合基因△2ORF5与载体pET-32a连接,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21中,经诱导表达获得约42 kDa重组蛋白。将纯化的重组△2ORF5蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,Western blotting试验表明其与4株亲本毒株重组ORF5蛋白具有良好的反应性。病毒感染抑制试验结果表明,多克隆抗体对4株亲本毒株具有较高的抑制率(>53%)。研究结果为研制新型PRRSV疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 PRRSV ORF5基因 DNA SHUFFLING 多克隆抗体 病毒感染抑制试验
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