六种动物虫媒病病原检测方法研究进展 被引量：1

1

作者 王晶 王慧煜 +2 位作者 贾广乐 胡永婷 韩雪清 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期90-94,共5页

虫媒病是由嗜血节肢动物通过吸血传播的一类传染病,随着经济全球化的不断发展及动物和动物产品国际贸易量的迅猛增长,此类疫病随进境商品传入我国的风险越来越高。虫媒病分子检测方法有很多,其中基因芯片是可以一次对多种疾病或多生物... 虫媒病是由嗜血节肢动物通过吸血传播的一类传染病,随着经济全球化的不断发展及动物和动物产品国际贸易量的迅猛增长,此类疫病随进境商品传入我国的风险越来越高。虫媒病分子检测方法有很多,其中基因芯片是可以一次对多种疾病或多生物样品进行检测分析的快速、高效的新型检测技术。论文从西尼罗热、水疱性口炎、非洲猪瘟、蓝舌病、莱姆病、鹿流行性出血热病等6种动物虫媒病的病原学、分子诊断以及基因芯片检测技术等方面的最新研究进展进行综述,为虫媒病诊断、预防和控制提供理论依据,并为不同虫媒携带多种病原的高通量生物芯片筛查方法的建立提供资料。 展开更多

关键词 虫媒病 病原基因 检测方法 基因芯片

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重症肺炎行有创机械通气患者ICU死亡的多因素分析及风险模型建立 被引量：13

2

作者 罗松平 刘单霞 +4 位作者 韦兆吉 董文星 孙鑫 翟红瑞 李拥军 《中国急救医学》 CAS CSCD 2023年第4期268-272,共5页

目的分析重症肺炎行有创机械通气患者ICU死亡的危险因素,制定风险预警模型。方法回顾性收集2019年3月至2021年3月开封市中心医院EICU收治的138例重症肺炎行有创机械通气患者的25项资料:包括一般资料[年龄、性别、体重指数(BMI)]和入院... 目的分析重症肺炎行有创机械通气患者ICU死亡的危险因素,制定风险预警模型。方法回顾性收集2019年3月至2021年3月开封市中心医院EICU收治的138例重症肺炎行有创机械通气患者的25项资料:包括一般资料[年龄、性别、体重指数(BMI)]和入院时相关指标[体温(T)、呼吸频率(R)、心率(HR)、平均动脉压(MAP)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、血红蛋白(Hb)、血清钾(K^(+))、血清钠(Na^(+))、血清氯(Cl-)、动脉氢离子浓度指数(pH)、氧合指数(OI)、血乳酸(LAC)、D-二聚体、血肌酐(SCr)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、C-反应蛋白(CRP)、脑尿钠肽(pro-BNP)、降钙素原(PCT)、GCS评分、是否行病原体宏基因组学(mNGS)检测等]。根据患者在ICU治疗最终是否死亡分为存活组和死亡组,比较两组间各项指标的差异,对差异有统计学意义的指标应用二元Logistic回归分析,判断其与患者死亡的相关性,明确独立危险因素并建立死亡风险模型。结果存活组和死亡组BMI、T、Na^(+)、D-二聚体、SCr、PCT、是否行mNGS检测等7项指标差异有统计学意义(P<0.05),进一步多因素Logistic回归分析结果显示,BMI、SCr、是否行mNGS检测是患者死亡结局的独立危险因素,建立风险模型logit P=In(P/1-P)=-2.939+1.313×(BMI≤18.5)+1.725×(SCr>133μmol/L)+1.294×(未行mNGS检测),当P>0.39时患者死亡风险高,敏感度和特异度分别为72.7%和76.1%。结论BMI、SCr、是否行mNGS检测三者联合可较好地预测重症肺炎行有创机械通气患者的ICU预后。 展开更多

关键词 重症肺炎 有创机械通气 死亡 风险模型 病原体宏基因组学(mNGS)

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病原宏基因组高通量测序技术质量控制与评价的挑战和思考 被引量：16

3

作者 刘东来 张春涛 +1 位作者 王佑春 许四宏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2598-2609,共12页

病原宏基因组高通量测序技术理论上能够检测几乎所有病原体基因组核酸,且适用于几乎所有类型的临床样本,尤其适用于病原不明的疑难感染性疾病的诊断。因此该技术正逐渐成为实验室常规检测方法的重要补充和不可替代的项目。然而,基于该... 病原宏基因组高通量测序技术理论上能够检测几乎所有病原体基因组核酸,且适用于几乎所有类型的临床样本,尤其适用于病原不明的疑难感染性疾病的诊断。因此该技术正逐渐成为实验室常规检测方法的重要补充和不可替代的项目。然而,基于该技术的诊断试剂不仅检测流程繁琐复杂、技术更新迭代速度较快,同时相关质量控制与评价的方法和标准也有待明确,这些因素均给该技术的临床转化应用、行业发展以及监管带来挑战和不确定性。文中简述了该技术的原理和优势,以及检测流程和关键质量控制环节,最后着重介绍了关于该技术的质量评价方法和标准的相关思考。 展开更多

关键词 病原宏基因组 高通量测序 质量控制与评价

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呼吸道病原菌基因检测法诊断儿童肺炎链球菌感染的临床价值 被引量：12

4

作者 钱婧 朱春梅 曹玲 《中华全科医学》 2018年第9期1512-1514,1525,共4页

目的探讨呼吸道病原菌基因检测法对诊断儿童肺炎链球菌感染的应用价值。方法收集2016年6月—2017年6月在首都儿科研究所附属儿童医院呼吸科住院的初诊细菌性肺炎患儿224例,每位病例采集深部痰或支气管肺泡灌洗液标本,按传统病原菌培养... 目的探讨呼吸道病原菌基因检测法对诊断儿童肺炎链球菌感染的应用价值。方法收集2016年6月—2017年6月在首都儿科研究所附属儿童医院呼吸科住院的初诊细菌性肺炎患儿224例,每位病例采集深部痰或支气管肺泡灌洗液标本,按传统病原菌培养是否分离到肺炎链球菌分为非肺炎链球菌组136例和肺炎链球菌组88例。用呼吸道病原菌核酸检测试剂盒(恒温扩增芯片法)检测2组病例中的病原菌,应用SPSS 17.0统计软件及Kappa检验来对比2种检测方法的检出效能。结果非肺炎链球菌组应用呼吸道病原菌基因检测法检出肺炎链球菌40例,其中深部痰标本检出32例,支气管肺泡灌洗液标本检出8例;肺炎链球菌组应用呼吸道病原菌基因检测法检出肺炎链球菌80例,其中深部痰标本检出52例,支气管肺泡灌洗液标本检出28例。与传统病原学培养对比,呼吸道病原菌基因检测肺炎链球菌的灵敏度、特异度、总符合率、阳性预测值、阴性预测值分别为90.9%、74.4%、80.3%、66.7%、92.3%。2种检测方法对肺炎链球菌的检出率具有较好的一致性(Kappa>0.4)。结论呼吸道病原菌基因检测具有快速、特异、灵敏的优势,与传统的病原学分离培养检验有较高的一致性及总符合率,能为临床医生提供可靠的诊疗依据。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 呼吸道病原菌基因检测 儿童

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用聚合酶链方法对北京林区莱姆病疫源地及莱姆病病原体基因型的探索性研究 被引量：7

5

作者 李建民 曹务春 +6 位作者 张习坦 吴晓明 张泮河 赵秋敏 杨红 董振英 蔡胜利 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期209-212,共4页

目的　进一步明确北京林区是否存在莱姆病的自然疫源地及其分布。方法　基于莱姆病螺旋体外膜蛋白A基因建立半巢式聚合酶链式反应 (polymerasechainreaction ,PCR)方法 ,对从北京 6个林区采集的蜱和鼠进行检测和基因分型 ,选择阳性标本... 目的　进一步明确北京林区是否存在莱姆病的自然疫源地及其分布。方法　基于莱姆病螺旋体外膜蛋白A基因建立半巢式聚合酶链式反应 (polymerasechainreaction ,PCR)方法 ,对从北京 6个林区采集的蜱和鼠进行检测和基因分型 ,选择阳性标本进行克隆和序列测定 ,与已知序列进行同源性比较。间接免疫荧光法检测抗莱姆病螺旋体IgG抗体 ,从长角血蜱中分离莱姆病螺旋体。结果　从门头沟区东灵山采集的标本中检测到莱姆病螺旋体DNA片段 ,3只游离全沟硬蜱 1只检测阳性 ,5 7只寄生全沟硬蜱若蜱中 1只检测阳性 ;119只野鼠中 9只检测阳性 ,其中 8只B .garinii阳性 ,1只B .afzelii阳性。 5 0份野鼠血清有 5份莱姆病螺旋体IgG抗体阳性 ,采集的 16 0只长角血蜱(2 0只 /组 )未分离到莱姆病螺旋体菌株。结论　北京门头沟区东灵山可能存在莱姆病的自然疫源地 ,包括两个基因型 ,全沟硬蜱可能是莱姆病的传播媒介 ,野鼠可能是贮存宿主。 展开更多

关键词 半巢式聚合酶链反应 北京林区 莱姆病 病原体基因型 分子流行病学 疫源地

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病原宏基因组高通量测序临床本地化检测规范专家共识 被引量：1

6

作者 中国药师协会 中华医学会细菌感染与耐药防治分会 +18 位作者 国家卫生健康委临床抗微生物药物敏感性折点研究和标准制定专家委员会 杨启文 王明贵 马筱玲 张建中 李轶 吴文娟 杨继勇 韩东升 李家斌 罗燕萍 周华 谷丽 张西京 李敏 单斌 胡付品 刘正印 周海健 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期454-465,共12页

感染性疾病严重危害人类生命健康,快速准确检测病原体是有效治疗和精准防控感染性疾病的关键环节。传统的病原学检验技术覆盖的微生物种类少,难以满足临床需求。宏基因组高通量测序(mNGS)理论上可同时检测所有已知基因序列的病原体,在... 感染性疾病严重危害人类生命健康,快速准确检测病原体是有效治疗和精准防控感染性疾病的关键环节。传统的病原学检验技术覆盖的微生物种类少,难以满足临床需求。宏基因组高通量测序(mNGS)理论上可同时检测所有已知基因序列的病原体,在很大程度上提高了临床疑难危重感染、罕见和新发病原体感染的诊断水平和救治能力。在个体化医疗需求的大背景下,新技术的实验室自建检测(LDT)能够持续提高临床诊治水平。由于mNGS技术平台研发起点高、操作流程复杂,为了保证该技术合理应用,保障患者医疗安全,本文在临床检验、感染、危重症及体外诊断等领域的专家就mNGS-LDT的流程搭建、性能确认、质量控制、报告审核等方面形成共识并提出规范要求和建议。 展开更多

关键词 病原宏基因组测序 实验室自建检测 性能确认 质量控制

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高质量临床微生物基因组参考数据库构建的思考

7

作者 刘东来 吴林寰 +3 位作者 关文达 庞慧芳 胡松年 许四宏 《中国食品药品监管》 2024年第6期32-39,共8页

病原宏基因组高通量测序(mNGS)技术因其检测时间短、分辨率高,能识别罕见、新发病原体引发的感染或者混合感染等优势,已经被广泛地应用于临床疑难感染的辅助诊断。然而,由于目前尚缺乏标准化生物信息学分析流程和高质量临床微生物基因... 病原宏基因组高通量测序(mNGS)技术因其检测时间短、分辨率高,能识别罕见、新发病原体引发的感染或者混合感染等优势,已经被广泛地应用于临床疑难感染的辅助诊断。然而,由于目前尚缺乏标准化生物信息学分析流程和高质量临床微生物基因组参考数据库等问题,一定程度上制约了该技术临床应用的进一步发展。本文介绍了高质量临床微生物基因组参考数据库建设现状,探讨了高质量临床微生物基因组参考数据库构建的技术要求、质量控制过程和实现方式,并提出相关思考和建议。 展开更多

关键词 病原宏基因组高通量测序 生物信息学分析 微生物基因组参考数据库 建设现状 技术要求

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病原宏基因组测序对肺部感染病原体检测价值以及影响因素分析 被引量：5

8

作者 李江蕾 施勇 +2 位作者 任鸿芋 刘玲艳 樊亚雄 《云南医药》 2022年第2期21-24,共4页

目的探讨mNGS对肺部感染病原体检测价值以及影响因素分析。方法收集2021年1月-2021年6月本院住院并送检mNGS的肺部感染者19例,记录患者临床资料、mNGS结果以及传统病原学检测结果。结果mNGS检测阳性率为73.68%,显著高于传统培养(47.37%,... 目的探讨mNGS对肺部感染病原体检测价值以及影响因素分析。方法收集2021年1月-2021年6月本院住院并送检mNGS的肺部感染者19例,记录患者临床资料、mNGS结果以及传统病原学检测结果。结果mNGS检测阳性率为73.68%,显著高于传统培养(47.37%,P<0.05);mNGS检测出2种及2种以上的病原体比例为52.63%,主要为铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、人类疱疹病毒4型、人类疱疹病毒7型、细环病毒、星座链球菌、肺炎链球菌和白色念球菌。多因素Logistic回归分析显示未发现影响mNGS检测阳性率的因素。结论mNGS对肺部感染病原体检出率高,受干扰小,具有很高的临床应用价值。 展开更多

关键词 病原宏基因组测序 肺部感染 肺泡灌洗液 抗生素

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病原宏基因组高通量测序生物信息学分析质量评价的研究现状与思考

9

作者 刘东来 关文达 +3 位作者 吴林寰 王浩 杨子峰 许四宏 《中国食品药品监管》 2024年第5期34-41,共8页

病原宏基因组高通量测序(mNGS)技术已成为感染病原学诊断的新工具,由实验操作(湿实验)和生物信息学分析(干实验)两部分组成。干实验由算法和数据库构成,其功能是对湿实验产生的测序数据进行分析处理后输出检测结果。干实验的性能受到测... 病原宏基因组高通量测序(mNGS)技术已成为感染病原学诊断的新工具,由实验操作(湿实验)和生物信息学分析(干实验)两部分组成。干实验由算法和数据库构成,其功能是对湿实验产生的测序数据进行分析处理后输出检测结果。干实验的性能受到测序数据中复杂多变的干扰因素的影响,包括临床样本中大量的人源核酸、试剂与耗材携带的微生物核酸、采样与湿实验引入的环境微生物核酸、数据库中基因组质量不均一或不同物种基因组之间的相似性过高导致的错误比对与注释,以及算法与参数差异对分类鉴定的影响等。上述干扰因素可能来自mNGS检测各个环节,不仅可能导致干实验输出错误的物种鉴定和微生物检测结果,也给干实验的质量控制与评价带来较大挑战。本文综述了mNGS干实验质量控制的关键问题以及关于质量评价方法的思考。 展开更多

关键词 病原宏基因组高通量测序 生物信息学分析 质量评价 数字参考品

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miR-146a通过调节IPr1基因对结核分枝杆菌感染的AEC Ⅱ型细胞活性作用机制

10

作者 许明昭 林清香 +1 位作者 寇昌伟 汪求真 《西部医学》 2024年第3期333-337,共5页

目的 探讨miR-146a通过调节IPr1基因观察对结核分枝杆菌(Mtb)感染的肺泡II型上皮细胞(AEC II)活性的作用机制。方法 采用Mtb感染AECⅡ细胞。将AECⅡ细胞分为结核组(感染Mtb)、 NC组(模型+转染miR-146a NC)、转染组(模型+转染miR-146a mi... 目的 探讨miR-146a通过调节IPr1基因观察对结核分枝杆菌(Mtb)感染的肺泡II型上皮细胞(AEC II)活性的作用机制。方法 采用Mtb感染AECⅡ细胞。将AECⅡ细胞分为结核组(感染Mtb)、 NC组(模型+转染miR-146a NC)、转染组(模型+转染miR-146a mimics)。RT-PCR检测AECⅡ细胞miR-146a、Ipr1基因表达;CCK8检测AECⅡ细胞增殖;流式细胞仪检测AECⅡ细胞凋亡;双荧光素酶报告测定Ipr1与miR-146a靶向关系。结果 DIO荧光染色的Mtb在感染人AECⅡ细胞12 h内会进入细胞质基质中,并围绕细胞核分布,表明建立的结核分枝杆菌感染模型成功;结核组与NC组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达比较无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达水平升高(P<0.05);结核组与NC组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值比较均无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值均升高(P<0.05);结核组AECⅡ细胞凋亡率与NC组相比无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞凋亡率显著降低(P<0.001)。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-146a后野生型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性升高(P<0.05),突变型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性无明显变化(P>0.05),表明Ipr1是miR-146a的靶基因。结论 过表达的miR-146a可增加Mtb感染的AECⅡ细胞活性,降低凋亡,研究机制认为可能与通过激活Ipr1水平相关。Ipr1是miR-146a靶基因,可通过激活表达而发挥减少Mtb对AECⅡ细胞活性的损伤。 展开更多

关键词 MIR-146A 肺结核 胞内病原体抗性基因1 结核分枝杆菌 肺泡Ⅱ型上皮细胞 增殖 凋亡

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鹦鹉热衣原体重症肺炎的胸部HRCT特征 被引量：1

11

作者 刘靖 刘海峰 +9 位作者 张东友 范学鹏 胡述立 吴艳霞 阳义 龙斌 柏玉涵 姜琼 尹龙 赵明 《放射学实践》 CSCD 北大核心 2023年第5期571-575,共5页

目的:总结分析鹦鹉热衣原体重症肺炎的临床及胸部HRCT影像特征。方法:回顾性分析2021年5月-2022年2月基于病原宏基因组学检测诊断的5例鹦鹉热衣原体重症肺炎患者的临床及影像资料,并复习相关文献。结果:5例患者临床均以高热为初期表现,... 目的:总结分析鹦鹉热衣原体重症肺炎的临床及胸部HRCT影像特征。方法:回顾性分析2021年5月-2022年2月基于病原宏基因组学检测诊断的5例鹦鹉热衣原体重症肺炎患者的临床及影像资料,并复习相关文献。结果:5例患者临床均以高热为初期表现,早期白细胞(WBC)正常或升高[(4.53~16.3)×109/L],中性粒细胞(NEUT)百分比升高(69.4%~87.6%),淋巴细胞(LYM)百分比降低(7.0%~35.6%),C反应蛋白(CRP)与DD二聚体进行性升高(CPR 78~207 mg/L,DD 1.13~8.69 mg/L),部分心肌酶谱升高(100~268 IU/L),肝功能减低(ALT 33~122 IU/L,AST 48~376 IU/L)。胸部HRCT主要表现为早期单侧肺叶实变伴磨玻璃样改变,均可见含气支气管征;进展期病灶发展快速,很快累及整个或双侧多个肺叶,可出现散在磨玻璃斑片影,可伴有纵隔淋巴结增大,双侧胸腔积液伴随病程发展出现,针对性抗生素治疗后病灶吸收明显。结论:鹦鹉热衣原体重症肺炎的胸部HRCT主要表现为实变及磨玻璃影,影像特异性差,病原学诊疗不明时病灶进展迅速,容易发展为重症,针对性抗生素治疗效果明显,需结合临床接触史及基因组学检测尽快发现病原体。 展开更多

关键词 鹦鹉热衣原体 重症肺炎 病原宏基因组学 体层摄影术 X线计算机 胸部

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R-Avr基因互作介导的植物抗病性 被引量：2

12

作者 李汝刚 范云六 +1 位作者 伍宁丰 李茂林 《生物技术通报》 CAS CSCD 1998年第1期10-15,共6页

Ｒ－Ａｖｒ基因互作介导的植物抗病性李汝刚范云六伍宁丰李茂林（中国农业科学院生物技术研究中心，北京１０００８１）植物在整个生长发育周期中面临着种类繁多的病原微生物袭击，但真正能引起植物病害的病原并不多，这表明植物能抵抗... Ｒ－Ａｖｒ基因互作介导的植物抗病性李汝刚范云六伍宁丰李茂林（中国农业科学院生物技术研究中心，北京１０００８１）植物在整个生长发育周期中面临着种类繁多的病原微生物袭击，但真正能引起植物病害的病原并不多，这表明植物能抵抗大多数病原微生物袭击，表现非亲合性... 展开更多

关键词 病原无毒基因 基因互作 植物抗病性 介导

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泛病原体芯片在小儿重症肺炎病因学诊断中的应用 被引量：3

13

作者 黄淑君 周帅 +2 位作者 周香城 陈秋平 张亮 《广州医科大学学报》 2018年第6期33-36,47,共5页

目的:探讨泛病原体基因芯片EOPM在小儿重症肺炎病因学诊断中的应用价值。方法:收集2018年3月广东省妇幼保健院儿科收治的常规临床方法病原体检测结果为阴性的5例重症肺炎患儿的血清、痰液或肺泡灌洗液标本,行核酸提取、基因芯片杂交、... 目的:探讨泛病原体基因芯片EOPM在小儿重症肺炎病因学诊断中的应用价值。方法:收集2018年3月广东省妇幼保健院儿科收治的常规临床方法病原体检测结果为阴性的5例重症肺炎患儿的血清、痰液或肺泡灌洗液标本,行核酸提取、基因芯片杂交、测序验证实验进行病原体检测。结果:5例小儿重症肺炎芯片检出病原体依次分别为呼吸道合胞病毒、呼吸道合胞病毒与鼻病毒共感染、副流感病毒伴随链球菌共感染、副流感病毒、腺病毒,经PCR及测序验证与芯片结果一致。结论:泛病原体基因芯片能有效检测出不明病因小儿重症肺炎的致病原,为针对性临床治疗提供了重要依据。 展开更多

关键词 泛病原体基因芯片 小儿重症肺炎 病原体诊断

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急性Q热伴噬血细胞综合征1例报道并文献复习 被引量：4

14

作者 朱华民 林柏杏 +1 位作者 包世杰 孙志强 《现代医药卫生》 2020年第11期1772-1774,共3页

由伯氏立克次氏体(柯克斯体Coxiella burnetii)引起的Q热是一种发热性人畜共患病,在世界范围内分布。该病具有多种表现,包括急性自限性流感样综合征、急性肺炎或肝炎和慢性感染(主要表现为心内膜炎)[1]。噬血细胞综合征,更恰当地称为噬... 由伯氏立克次氏体(柯克斯体Coxiella burnetii)引起的Q热是一种发热性人畜共患病,在世界范围内分布。该病具有多种表现,包括急性自限性流感样综合征、急性肺炎或肝炎和慢性感染(主要表现为心内膜炎)[1]。噬血细胞综合征,更恰当地称为噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH),是单核吞噬细胞系统的反应性疾病,其特征在于过度的组织细胞增殖和活化,具有显著的噬血细胞增多表现。噬血细胞综合征由原发性和继发性HLH组成,可能与感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾病或药物有关[2-6]。 展开更多

关键词 伯氏立克次氏体 Q热 噬血细胞综合征 感染病原高通量基因检测 病例报告

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病原宏基因组高通量测序技术质量评价参考品的建立 被引量：2

15

作者 刘东来 沈舒 +3 位作者 田颖新 周海卫 张樱 许四宏 《分子诊断与治疗杂志》 2022年第5期727-730,共4页

目的建立医疗机构病原宏基因组高通量测序(mNGS)本地化检测质量评价所需参考品。方法10种微生物按1∶10梯度稀释3个浓度水平后,分别与临床样本相近的人源细胞浓度混合。人源细胞按1∶10梯度稀释3个浓度水平后,分别与低浓度微生物混合。... 目的建立医疗机构病原宏基因组高通量测序(mNGS)本地化检测质量评价所需参考品。方法10种微生物按1∶10梯度稀释3个浓度水平后,分别与临床样本相近的人源细胞浓度混合。人源细胞按1∶10梯度稀释3个浓度水平后,分别与低浓度微生物混合。对参考品冻融稳定性进行研究。结果D1系列参考品包含:人源细胞为10^(5) cells/mL,微生物约为10^(5)~10^(3) CFU/mL的D1⁃1~D1⁃3以及不含微生物的D0;微生物约为10^(3) CFU/mL,人源细胞为10^(5)~10^(3) cells/mL的D1⁃3、D1⁃2(10)和D1⁃1(100)。D2系列参考品与D1系列设置相同。对参考品进行检测(以D1系列为例):D1⁃1~D1⁃3各检测1次,参考品中微生物均检出、其他微生物未检出;D1⁃2重复检测3次,各微生物检出序列数的变异系数为18%~49%;D1⁃1~D1⁃3以及D1⁃3、D1⁃2(10)和D1⁃1(100)两组参考品中各微生物检出的序列数的线性相关系数|r|为0.86~0.96。参考品冻融2次后检测,各微生物的检出序列数均下降。结论建立了包含10种微生物的参考品及其使用方法,可用于医疗机构mNGS本地化检测质量评价。 展开更多

关键词 病原宏基因组高通量测序 质量评价 参考品

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PPE68/Ipr1真核共表达质粒的构建及鉴定 被引量：3

16

作者 靳志栋 张丹 +4 位作者 何永林 徐蕾 佘茜 张壮苗 杨春 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期410-413,共4页

目的构建结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠胞内病原体抗性基因1(Intracellular pathogen resistance 1,Ipr1)的真核共表达质粒,并在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠Ipr1基因分别亚克隆至含多启动子的共表达... 目的构建结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠胞内病原体抗性基因1(Intracellular pathogen resistance 1,Ipr1)的真核共表达质粒,并在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠Ipr1基因分别亚克隆至含多启动子的共表达载体pBudCE4.1中,构建真核共表达质粒pBud68-Ipr1,转染RAW264.7细胞,通过RT-PCR及Western blot法检测PPE68和Ipr1基因的转录和表达。结果重组表达质粒pBud68-Ipr1经PCR、双酶切及测序证实,插入的PPE68和Ipr1基因片段序列正确;质粒转染RAW264.7细胞后,PPE68和Ipr1基因进行了转录和表达,基因编码产物相对分子质量分别为37 000和50 000。结论已成功构建了真核共表达质粒pBud68-Ipr1,并在RAW264.7细胞中获得表达,为PPE68/Ipr1重组BCG的构建及其免疫保护作用的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 结核病 PPE68 胞内病原体抗性基因1 巨噬细胞

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稳定表达细胞内病原体抗性基因1的RAW264.7细胞克隆的建立 被引量：3

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作者 王瑜伟 朱道银 李娜 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第2期122-125,共4页

目的:构建携带细胞内病原体抗性基因1(Ipr1),以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导入鼠巨噬细胞RAW264.7中表达.方法:KpnⅠ和BamHⅠ双酶切重组质粒pET32a(+)-Ipr1及真核表达载体pEGFP-C1,Ipr1基因定向克隆入pEGFP-C1载... 目的:构建携带细胞内病原体抗性基因1(Ipr1),以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导入鼠巨噬细胞RAW264.7中表达.方法:KpnⅠ和BamHⅠ双酶切重组质粒pET32a(+)-Ipr1及真核表达载体pEGFP-C1,Ipr1基因定向克隆入pEGFP-C1载体,构建重组质粒载体pEGFP-C1-Ipr1.脂质法转染体培养的RAW264.7细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pEGFP-C1-Ipr1融合蛋白在细胞中的表达;PCR检测Ipr1基因转录水平的表达;West-ern Blot方法验证Ipr1蛋白水平的表达.结果:酶切鉴定获得一条约4700bp空载体条带及一条约1338bp目的片段,证明pEGFP-C1-Ipr1真核表达载体构建成功.pEGFP-C1-Ipr1转染RAW264.7细胞后,Western Blot可以检测到约Mr77×103的融合蛋白在RAW264.7细胞中表达,荧光显微镜下可观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达.结论:成功构建真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1-Ipr1,获得稳定的RAW264.7-Ipr1细胞克隆可表达Ipr1,为进一步研究Ipr1的功能奠定了基础. 展开更多

关键词 细胞内病原体抗性基因1 转染 脂质体 细胞克隆

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疟疾分子流行病学研究与应用 被引量：2

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作者 袁方玉 黄光全 张华勋 《公共卫生与预防医学》 2011年第5期75-77,共3页

分子流行病学是研究病原体基因型和基因表达在人群中传播和致病的关系,在常规流行病学基础上结合分子生物学信息,是常规流行病学分析的扩充;其目的是在分子基础上描述病原体种群差异以及在感染、致病机理、免疫和治疗反应中分子的和细... 分子流行病学是研究病原体基因型和基因表达在人群中传播和致病的关系,在常规流行病学基础上结合分子生物学信息,是常规流行病学分析的扩充;其目的是在分子基础上描述病原体种群差异以及在感染、致病机理、免疫和治疗反应中分子的和细胞的效用过程。随着疟疾分子生物学研究的深入,疟疾在预防。 展开更多

关键词 分子流行病学 疟疾 病原体基因型 分子生物学 应用 流行病学分析 致病机理 治疗反应

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植物抗菌基因工程的研究策略及进展 被引量：1

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作者 唐梅 《乐山师范学院学报》 2002年第4期56-58,共3页

植物抗菌基因工程是目前植物抗病育种的热点之一 .本文就近几年植物抗菌基因工程中植物抗病基因、病原菌无毒基因、植物防卫基因。

关键词 植物抗菌基因工程 研究策略 病原菌无毒基因 抗菌蛋白基因 抗病育种 研究进展 植物防卫基因

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甘蓝型油菜BnERF50的超表达增强了转基因拟南芥对核盘菌的抗性 被引量：2

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作者 汪承刚 李丹 +4 位作者 许李明 董彩华 黄军艳 方菊萍 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期427-432,共6页

从接种核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)后的甘蓝型油菜品种中双9号cDNA芯片中筛选出一个新的抗性相关基因BnERF50。序列分析表明该基因产物BnERF50蛋白含有一个典型的ERF(乙烯相应转录因子)保守结构域,属于ERF家族成员。接种核盘菌24h... 从接种核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)后的甘蓝型油菜品种中双9号cDNA芯片中筛选出一个新的抗性相关基因BnERF50。序列分析表明该基因产物BnERF50蛋白含有一个典型的ERF(乙烯相应转录因子)保守结构域,属于ERF家族成员。接种核盘菌24h后,该基因的表达量被诱导显著上调。在它的超表达转基因拟南芥中,病原相关蛋白(PR)防御素基因PDF1.2和几丁质酶基因ChiB的表达量升高,对腐生营养型真菌核盘菌的抗性显著增强。 展开更多

关键词 乙烯响应转录因子 BnERF50 病原相关蛋白基因 核盘菌

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