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不明原因复发性自然流产患者HVEM基因多态性检测研究 被引量:6
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作者 肖海 娄桂予 +6 位作者 张倩 郭谦楠 张照婧 吴东 张梦汀 高越 廖世秀 《重庆医学》 CAS 2019年第16期2808-2810,共3页
目的检测河南汉族不明原因复发性自然流产(URSA)患者疱疹病毒侵入介质(HVEM)基因rs1886730和rs2234167位点的多态性。方法采用一代测序方法检测河南汉族246例URSA患者(病例组)和256例健康人(对照组)HVEM基因rs1886730和rs2234167位点的... 目的检测河南汉族不明原因复发性自然流产(URSA)患者疱疹病毒侵入介质(HVEM)基因rs1886730和rs2234167位点的多态性。方法采用一代测序方法检测河南汉族246例URSA患者(病例组)和256例健康人(对照组)HVEM基因rs1886730和rs2234167位点的多态性,并进行基因频率、等位基因频率的比较。结果河南汉族人群中HVEM基因rs2234167位点多态性与URSA无明显相关性(P>0.05);rs1886730位点T等位基因频率在病例组和对照组间差异有统计学意义(t=14.007,P<0.01),CT、TT基因型频率在病例组和对照组间差异有统计学意义(t=14.236,P<0.01;t=14.420,P<0.01)。结论HVEM基因rs2234167位点多态性与河南汉族人群URSA无关,rs1886730位点T等位基因、CT基因型、TT基因型与河南汉族人群URSA有关。 展开更多
关键词 河南 汉族 流产 习惯性 多态性 单核苷酸 疱疹病毒侵入介质
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负性共刺激分子BTLA/HVEM抑制肺结核患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞增殖 被引量:2
2
作者 杨晨晨 如克亚木·阿不都沙拉木 +2 位作者 戴凡超 甫拉提·热西提 徐茜 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2022年第1期29-36,43,共9页
目的研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒进入中介体(herpesvirus entry mediator,HVEM)在肺结核患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞(CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg)中的表达及其... 目的研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒进入中介体(herpesvirus entry mediator,HVEM)在肺结核患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞(CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg)中的表达及其与患者临床特征的关系。方法选取肺结核患者30例(肺结核组)和20例健康体检者(健康对照组),通过流式细胞术检测2组外周血淋巴细胞CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg细胞的阳性率,以及检测BTLA/HVEM在肺结核患者外周血和淋巴细胞上的表达;利用蛋白芯片法检测结核抗体;通过影像检测结果判断肺结核进展程度;采用罗氏培养法培养结核分枝杆菌。结果结核组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg所占比例为(9.14±2.66)%,健康对照组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg所占比例为(6.39±1.73)%,相对于健康对照组,肺结核组患者外周血中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg比率明显增高;健康对照组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上BTLA和HVEM的表达率高于肺结核组;BTLA、HVEM在肺结核组患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上的表达呈正相关;BTLA、HVEM在CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上的表达在痰涂阳性患者组中更低,而与其他临床特征无关。结论肺结核患者体内的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg增高,可能是抗结核免疫应答被抑制的原因,提示过度扩增导致数量异常增高的Treg是免疫应答不足和MTB逃逸的一个重要因素。负性共刺激信号BTLA/HVEM在结核患者体内下调提示其参与对CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg的增殖的抑制作用。 展开更多
关键词 负性共刺激分子 B、T淋巴细胞衰减因子 疱疹病毒侵入介质 活动性肺结核 CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞
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可溶性HVEM-Ig融合蛋白的真核表达、鉴定、纯化及生物学活性检测 被引量:1
3
作者 秦琴 张鹏 +1 位作者 唐古生 沈茜 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期322-325,共4页
目的:构建含鼠疱疹病毒侵入介质(herpesvirus entry mediator,HVEM)胞外区和IgG2aFc段重组表达质粒,真核表达HVEM-Ig融合蛋白,鉴定、纯化,并检测其生物学活性。方法:通过RT-PCR从BALB/c小鼠脾细胞总RNA中扩增HVEM胞外区片段,WT-1杂交瘤... 目的:构建含鼠疱疹病毒侵入介质(herpesvirus entry mediator,HVEM)胞外区和IgG2aFc段重组表达质粒,真核表达HVEM-Ig融合蛋白,鉴定、纯化,并检测其生物学活性。方法:通过RT-PCR从BALB/c小鼠脾细胞总RNA中扩增HVEM胞外区片段,WT-1杂交瘤细胞总RNA中扩增鼠IgG2aFc片段,克隆入真核分泌型表达载体pSecTag2A,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),表达产物用rProteinA凝胶进行亲和层析纯化,获得目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western印迹分析。在单向混合淋巴细胞反应中加入不同浓度的HVEM-Ig融合蛋白作为处理组,同时以加入IgG蛋白的作为阴性对照和未处理的混合淋巴细胞作为空白对照,分别采用[3H]-TdR掺入法和ELISA法观察淋巴细胞增殖程度和细胞因子分泌情况。结果:成功构建重组质粒pSecTag2A-HVEM-Ig,表达及纯化HVEM-Ig融合蛋白,并对蛋白的理化性质进行了鉴定。[3H]-TdR掺入法和ELISA法结果显示:与对照组相比,该融合蛋白呈剂量依赖性抑制淋巴细胞增殖和IFN-γ、TNF-α、IL-2等细胞因子的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建了HVEM-Ig融合蛋白真核表达体系,融合蛋白具有预期的抑制淋巴细胞活性及细胞因子分泌的功能,为后续研究该分子在自身免疫和移植免疫反应中的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 疱疹病毒侵入介质 免疫球蛋白G 融合蛋白 转染
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宣白承气汤对急性呼吸窘迫综合征大鼠BTLA/HVEM通路及肺功能的影响 被引量:3
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作者 张轶强 李咏红 +1 位作者 向丹 张玉沛 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期1229-1233,共5页
目的探究宣白承气汤对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺功能及B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)/单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM)通路的影响。方法60只大鼠,取12只为空白组,其余大鼠通过气管内滴入脂多糖(LPS)造模。将造模大鼠分为模型组、宣白承气... 目的探究宣白承气汤对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺功能及B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)/单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM)通路的影响。方法60只大鼠,取12只为空白组,其余大鼠通过气管内滴入脂多糖(LPS)造模。将造模大鼠分为模型组、宣白承气汤高、中、低剂量组(22.8、11.4、5.7 g/kg),每组12只。宣白承气汤高、中、低剂量组给予相应的药液,共给药7 d,1次/d。观察大鼠一般状态;血气分析仪测定动脉血中的氧分压(PaO_(2))和二氧化碳分压(PaCO_(2)),计算氧合指数(P/F)和肺泡-动脉血氧分压差[P(A-a)O_(2)];计算肺湿/干比(W/D),苏木素-伊红(HE)染色观察肺部病理学变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺匀浆中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-10水平;流式细胞术鉴定大鼠外周血T淋巴细胞亚群比例和BTLA、HVEM在大鼠外周血CD4^(+)和CD8^(+)T细胞表面的表达。结果与空白组相比,模型组精神萎靡,肺体积增大,肺组织结构严重受损;PaO_(2)、P/F、外周血中CD3^(+)、CD4^(+)T比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值、肺匀浆中IL-2水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),P(A-a)O_(2)、W/D、肺匀浆中TNF-α、IL-1β、IL-10水平、外周血中CD8^(+)T值、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞表面BTLA、HVEM表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,宣白承气汤高、中剂量组一般状态明显改善,肺组织损伤程度明显减轻,少量炎性细胞浸润;PaO_(2)、P/F、CD3^(+)、CD4^(+)T比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值、IL-2、IL-10水平明显升高(P<0.05),P(A-a)O_(2)、W/D比、TNF-α、IL-1β水平、CD8^(+)T值、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞表面BTLA、HVEM表达明显降低(P<0.05)。结论宣白承气汤可ARDS大鼠增强T淋巴细胞免疫功能,改善肺损伤;其机制可能与BTLA/HVEM的表达下调有关。 展开更多
关键词 宣白承气汤 急性呼吸窘迫综合征 免疫 B和T淋巴细胞衰减子/单纯疱疹病毒侵入介质
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人LIGHT基因转染细胞株的建立及其对T细胞协同刺激作用的研究 被引量:2
5
作者 黄子逸 王雪峰 +3 位作者 齐嫄 朱耿超 胡振华 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期9-13,共5页
建立人协同刺激分子LIGHT的基因转染细胞株,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激作用。采用RT-PCR法从活化的人外周血T细胞中克隆人LIGHT编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建成pIRES2-EGFP-LIGH... 建立人协同刺激分子LIGHT的基因转染细胞株,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激作用。采用RT-PCR法从活化的人外周血T细胞中克隆人LIGHT编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建成pIRES2-EGFP-LIGHT重组子,脂质体法以重组质粒pIRES2-EGFP-LIGHT转染鼠L929细胞。经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析LIGHT分子在基因转染的L929细胞膜上的表达,MTT法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)探讨获得的基因转染细胞L929/LIGHT体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响。结果:流式细胞术检测转基因L929/LIGHT细胞膜上能稳定高表达人LIGHT分子。体外细胞共培养试验表明,与未转染LIGHT基因的L929/mock细胞相比,L929/LIGHT能显著地促进抗人CD3单抗(mAb)刺激的T细胞增殖;同时L929/LIGHT亦能明显促进T细胞对IL-2、IFN-γ和IL-10的分泌。建立了稳定高表达人LIGHT分子的基因转染细胞株,LIGHT介导的信号在体外对T细胞增殖和相关细胞因子的分泌具有显著地促进作用。 展开更多
关键词 与单纯疱疹病毒的糖蛋白D竞争结合HVEM的淋巴毒素类似物(LIGHT) 单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM) T细胞 协同刺激分子及协同刺激信号
原文传递
人膜型LIGHT分子对Mo-DC成熟和T细胞激活的调节作用
6
作者 曹丽娟 宋华峰 +3 位作者 朱耿超 黄子逸 王雪峰 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期89-93,共5页
利用我们建立的表达人膜型LIGHT分子的基因转染细胞(L929/LIGHT)探讨LIGHT/HVEM信号体外对Mo-DC诱导分化的影响,并进一步研究其对T细胞活化和抗凋亡的共刺激作用。从健康人外周血中分离的单核细胞经GM-CSF联合IL-4诱导形成Mo-DC,流式细... 利用我们建立的表达人膜型LIGHT分子的基因转染细胞(L929/LIGHT)探讨LIGHT/HVEM信号体外对Mo-DC诱导分化的影响,并进一步研究其对T细胞活化和抗凋亡的共刺激作用。从健康人外周血中分离的单核细胞经GM-CSF联合IL-4诱导形成Mo-DC,流式细胞术分析Mo-DC诱导过程中HVEM和LIGHT的表达;基因转染细胞L929/mock、L929/LIGHT、L929/CD40L或L929/LIGHT联合L929/CD40L,分别经丝裂霉素处理后,与GM-CSF联合IL-4诱导的Mo-DC共育,流式细胞术检测Mo-DC细胞表面成熟标志CD83和CD86的表达,利用FITC-Dextran分析Mo-DC对抗原的摄取能力;L929/LIGHT或L929/mock经丝裂霉素处理后,与抗人CD3单抗激发的T细胞共育,流式细胞术分析CD4+和CD8+T细胞表面活化标志CD25的表达,Annexin V和PI双标记分析T细胞的凋亡率。结果表明,高表达HVEM的单核细胞在诱导形成成熟Mo-D(iDC)的过程中下调了HVEM的表达,成熟Mo-DC(mDC)又上调表达HVEM,而LIGHT在Mo-DC分化过程中呈短暂的诱导性表达;基因转染细胞L929/LIGHT及其联合L929/CD40L能上调Mo-DC表面共刺激分子CD83和CD86的表达,并下调Mo-DC对FITC-Dextran的摄取能力;L929/LIGHT细胞能上调CD4+、CD8+T细胞CD25的表达,并增强T细胞抗凋亡能力。因此,基因转染细胞L929/LIGHT表面表达的人膜型LIGHT分子介导的LIGHT/HVEM共刺激信号对Mo-DC的诱导成熟和T细胞活化及抗凋亡能力具有促进作用。 展开更多
关键词 与单纯疱疹病毒的糖蛋白D竞争结合HVEM的淋巴毒素类似物(LIGHT) 单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM) T细胞 单核细胞来源的树突状细胞(Mo—DC) 共刺激
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人HVEM-Fc融合蛋白的制备及其生物学特性
7
作者 黄子逸 朱耿超 +1 位作者 王雪峰 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期18-22,共5页
为建立CHO/HVEM-Fc基因转染细胞株,使之能稳定分泌HVEM-Fc融合蛋白,采用常规PCR法分别从本单位已构建的重组载体pGEZ-Term/B7-H1-Fc和pIRES2-EGFP/HVEM上扩增人IgG1(Fc)恒定区和人HVEM胞外段编码基因,XhoⅠ和Bam HI双酶切人IgG1(Fc)恒... 为建立CHO/HVEM-Fc基因转染细胞株,使之能稳定分泌HVEM-Fc融合蛋白,采用常规PCR法分别从本单位已构建的重组载体pGEZ-Term/B7-H1-Fc和pIRES2-EGFP/HVEM上扩增人IgG1(Fc)恒定区和人HVEM胞外段编码基因,XhoⅠ和Bam HI双酶切人IgG1(Fc)恒定区及真核表达载体pIRES2-EGFP,将两种酶切的目的产物连接为pIRES2-EGFP/Fc,同时将获得的人HVEM胞外段基因片段经XhoⅠ和NheⅠ酶切后插入上述pIRES2-EGFP/Fc构建成pIRES2-EGFP/HVEM-Fc重组载体,通过脂质体转染仓鼠卵巢癌CHO细胞,培养基中添加G418长期筛选并将分泌目的蛋白的基因转染细胞株亚克隆化。流式细胞术检测HVEM-Fc融合蛋白的表达,收集含融合蛋白的基因转染细胞培养上清,Protein G亲和层析柱对其进行纯化,Western blot定性分析。MTT检测HVEM-Fc融合蛋白体外对抗人CD3单抗联合基因转染细胞L929/LIGHT刺激的T淋巴细胞增殖的影响。结果表明,基因转染细胞CHO/HVEM-Fc分泌的HVEM-Fc融合蛋白能与L929/LIGHT细胞有效结合,纯化后的蛋白经Western blot鉴定出现特异性清晰条带,并且HVEM-Fc融合蛋白对L929/LIGHT协同刺激的T细胞体外增殖具有抑制作用。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM) 融合蛋白 共刺激分子 T细胞
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一株鼠抗人HVEM单克隆抗体的研制及初步鉴定
8
作者 宋华峰 齐嫄 +4 位作者 黄子逸 吴妹英 胥萍 王雪峰 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期14-18,共5页
研制鼠抗人单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM)的功能性单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步分析。以高表达人HVEM分子的基因转染细胞L929/HVEM作为免疫原,常规免疫小鼠并进行融合,以L929/HVEM作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,筛选出分... 研制鼠抗人单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM)的功能性单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步分析。以高表达人HVEM分子的基因转染细胞L929/HVEM作为免疫原,常规免疫小鼠并进行融合,以L929/HVEM作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,筛选出分泌特异性鼠抗人HVEM单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用western blot、间接免疫荧光法和MTT增殖实验对单抗进行生物学特性的分析。结果显示,成功获得一株特异性鼠抗人HVEM的杂交瘤细胞株,命名为2B11。该单抗能够识别肿瘤细胞表达的HVEM分子,且在体外能够显著抑制HVEM介导的T细胞增殖和细胞因子的分泌,从而为进一步研究HVEM介导的免疫学效应提供了物质基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM) 共刺激分子 单克隆抗体 T细胞
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人BTLA-Fc融合蛋白的制备及其生物学活性的研究
9
作者 朱耿超 黄子逸 +3 位作者 曹丽娟 陈永井 王雪峰 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期363-367,共5页
为建立CHO/BTLA-Fc基因转染细胞株,使之能稳定分泌BTLA-Fc融合蛋白,采用PCR法从本单位构建的pEGZ-Term/B7-H1-Fc重组质粒中扩增人IgG1(Fc)恒定区,Xho I、BamH I双酶切后与真核表达载体pIRES2-EGFP连接为重组质粒pIRES2-EGFP-Fc,同时PCR... 为建立CHO/BTLA-Fc基因转染细胞株,使之能稳定分泌BTLA-Fc融合蛋白,采用PCR法从本单位构建的pEGZ-Term/B7-H1-Fc重组质粒中扩增人IgG1(Fc)恒定区,Xho I、BamH I双酶切后与真核表达载体pIRES2-EGFP连接为重组质粒pIRES2-EGFP-Fc,同时PCR法从pEGZ-Term/BTLA重组质粒中获得人BTLA胞外段基因片段,用Nhe I、Xho I双酶切插入上述pIRES2-EGFP-Fc构建重组载体pIRES2-EGFP/BTLA-Fc。脂质体法以该重组载体转染鼠CHO细胞,G418筛选并亚克隆化。Protein G亲和层析柱对上清中的融合蛋白进行纯化,Western blot作定性分析。CCK-8检测BTLA-Fc融合蛋白对抗人CD3单抗激发的T淋巴细胞增殖的影响。结果表明,基因转染CHO细胞培养上清中表达的BTLA-Fc融合蛋白能与L929/HVEM细胞有效结合,纯化的融合蛋白经Western blot鉴定有清晰的目的条带,而且BTLA-Fc融合蛋白对T细胞的体外增殖具有抑制作用。 展开更多
关键词 B、T淋巴细胞衰减子(BTLA) 融合蛋白 单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM) T细胞
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