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环状RNA_PLEKHM3通过miR-320/KLF4轴调控宫颈癌细胞上皮间质转化
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作者 张亚男 崔莹 +1 位作者 王天娇 杜忠蕾 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期403-412,共10页
目的探讨环状RNA含普列克底物蛋白同源域的家族M3成员(PLEKHM3)(circRNA_PLEKHM3)通过调控微小RNA-320(miR-320)/畸变样因子4(KLF4)轴在宫颈癌细胞上皮间质转化(EMT)行为中的作用与机制。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈癌细胞H... 目的探讨环状RNA含普列克底物蛋白同源域的家族M3成员(PLEKHM3)(circRNA_PLEKHM3)通过调控微小RNA-320(miR-320)/畸变样因子4(KLF4)轴在宫颈癌细胞上皮间质转化(EMT)行为中的作用与机制。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈癌细胞Hela和CaSki中circRNA_PLEKHM3的表达水平;RNA荧光原位杂交检测circRNA_PLEKHM3在人宫颈癌上皮细胞CaSki中的定位;双荧光素酶报告基因实验检测circRNA_PLEKHM3和miR-320的靶向关系,以及miR-320和KLF4的靶向关系;对CaSki细胞过表达circRNA_PLEKHM3;另外设置三组,分别为在过表达circRNA_PLEKHM3的基础上过表达miR-320、沉默KLF4,以及在过表达miR-320的基础上沉默KLF4。qRT-PCR检测CaSki中miR-320的表达水平;Western blot检测CaSki细胞中KLF4和EMT标志物上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达;Transwell实验检测细胞迁移数和侵袭细胞数。结果circRNA_PLEKHM3在Hela和CaSki中的表达均降低(P<0.05),其主要定位在细胞质中;双荧光素酶报告基因实验显示miR-320和circRNA_PLEKHM3存在靶向关系,KLF4和miR-320存在靶向关系;过表达circRNA_PLEKHM3抑制miR-320和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达,上调E-cadherin的蛋白表达,减少细胞迁移和侵袭数(P<0.05);在过表达circRNA_PLEKHM3的基础上过表达miR-320或沉默KLF4均能够促进miR-320和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达,上调E-cadherin蛋白的表达,减少迁移和侵袭细胞数(P<0.05);然而在过表达miR-320的基础上沉默KLF4,KLF4和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达受到抑制,E-cadherin蛋白的表达上调,细胞迁移和侵袭数减少(P<0.05)。结论circRNA_PLEKHM3过表达可能通过miR-320/KLF4轴调控宫颈癌细胞的EMT。 展开更多
关键词 cirRNA_PLEKHM3 miRNA-320 畸变样因子4 宫颈癌细胞 上皮间质转化 迁移 侵袭
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