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番茄黑环病毒分子生物学检测方法及分离物序列分析 被引量:10
1
作者 杨翠云 于翠 +1 位作者 宋绍祎 陶庭典 《植物检疫》 2006年第5期275-278,共4页
根据TBRV运动蛋白基因的保守序列设计引物,RT-PCR和IC-RT-PCR能从6个TBRV的分离物中分别扩增到与预期大小相同的DNA条带,序列测定和分析表明所测定的序列为TBRV运动蛋白基因的部分序列,在系统关系树上与TBRV的其它分离物形成一簇,表明... 根据TBRV运动蛋白基因的保守序列设计引物,RT-PCR和IC-RT-PCR能从6个TBRV的分离物中分别扩增到与预期大小相同的DNA条带,序列测定和分析表明所测定的序列为TBRV运动蛋白基因的部分序列,在系统关系树上与TBRV的其它分离物形成一簇,表明所建立的RT-PCR和IC-RT-PCR检测方法是可靠的。 展开更多
关键词 番茄病毒 RT-PCR IC-RT-PCR
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番茄黑环病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:6
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作者 辛言言 刘洪义 +3 位作者 杨长志 刘忠梅 杨立群 张永江 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第4期88-92,共5页
为了快速有效地检测出植物样品中的番茄黑环病毒(tomato black ring virus,TBRV),根据TBRV的保守序列设计RT-LAMP反应的特异引物,通过试验成功建立了TBRV的RT-LAMP特异性检测方法。该方法检测快速,约27 min即可检测到扩增曲线;特异性强... 为了快速有效地检测出植物样品中的番茄黑环病毒(tomato black ring virus,TBRV),根据TBRV的保守序列设计RT-LAMP反应的特异引物,通过试验成功建立了TBRV的RT-LAMP特异性检测方法。该方法检测快速,约27 min即可检测到扩增曲线;特异性强,可有效区分同样侵染马铃薯的马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯Y病毒(PVY)、番茄斑萎病毒(TSWV)及番茄环斑病毒(ToRSV);灵敏度高,比普通RT-PCR灵敏度至少高10倍;并可通过肉眼观察反应颜色的变化直接进行结果判断。该方法适用于TBRV的快速检测。 展开更多
关键词 番茄病毒 反转录-介导等温扩增 检测
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应用IMS-RT-PCR方法检测番茄黑环病毒 被引量:4
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作者 崔学慧 陈舜胜 +2 位作者 胡亚萍 于翠 杨翠云 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2011年第4期21-24,37,共5页
以番茄黑环病毒为研究对象,用免疫磁珠分离(Immunomagnetic separation,IMS)结合RT-PCR方法,建立了检测番茄黑环病毒的IMS-RT-PCR方法。结果表明,该方法能够检测到较低浓度的病毒,灵敏度比普通RT-PCR的灵敏度高出10倍。
关键词 IMS-RT-PCR 番茄病毒 检测
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番茄黑环病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达 被引量:2
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作者 魏晓棠 李伟涛 +4 位作者 陈宏 彭青 尼秀媚 白桦 张京宣 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期727-731,共5页
利用RT-PCR方法获得了番茄黑环病毒(TBRV)外壳蛋白(coat protein,CP)基因,将CP基因克隆到pMD19-T Simple载体,并进行测序,大小为1 399 bp。与GenBank中已报道的TBRV的CP基因核苷酸相似度达99%以上。将TBRV CP基因定向插入双酶切的pET30a... 利用RT-PCR方法获得了番茄黑环病毒(TBRV)外壳蛋白(coat protein,CP)基因,将CP基因克隆到pMD19-T Simple载体,并进行测序,大小为1 399 bp。与GenBank中已报道的TBRV的CP基因核苷酸相似度达99%以上。将TBRV CP基因定向插入双酶切的pET30a中,成功构建了原核表达载体pET30a-TBRVCP,转化大肠杆菌BL-21,表达重组蛋白。SDS-PAGE电泳分析发现,通过诱导条件的优化,重组蛋白在37℃,1.0 mmol/L IPTG、4 h条件下表达量最高。 展开更多
关键词 番茄病毒 外壳蛋白基因 克隆 原核表达
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葡萄传毒线虫及其防治
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作者 于春池 《河北果树》 1990年第4期25-26,共2页
线虫是动物界种类和数量仅次于昆虫的第二大类群,在自然界分布相当广泛,有的寄生于人或动物,有的寄生于植物体,有的自由生活在土壤和水中。在植物体上寄生的线虫叫植物寄生性线虫,多为肉眼看不到的多细胞无环节圆体蠕虫,长0.3—5 mm,宽0... 线虫是动物界种类和数量仅次于昆虫的第二大类群,在自然界分布相当广泛,有的寄生于人或动物,有的寄生于植物体,有的自由生活在土壤和水中。在植物体上寄生的线虫叫植物寄生性线虫,多为肉眼看不到的多细胞无环节圆体蠕虫,长0.3—5 mm,宽0.015—0.01mm。通常生活在土壤中,靠吻针刺入植物根部吸取营养,为害植物而引起线虫病害。植物寄生线虫的部分种类可以传染病毒,引起植物的病毒病害,现已发现的能够传染植物病毒的线虫有剑线虫属(Xiphinema sp.)、长针线虫属(Longido- 展开更多
关键词 传毒 植物病毒 剑线虫属 长针线虫属 病毒病害 吻针 悬钩子病毒 番茄病毒 南芥菜花叶病毒 植物根部
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进境黄瓜种子携带番茄黑环病毒的检测与鉴定 被引量:1
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作者 甘琴华 陈长法 +3 位作者 王英超 纪瑛 吴兴海 邵秀玲 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2013年第22期88-90,共3页
番茄黑环病毒属于检疫性有害生物,其寄主范围广泛、危害严重。本文利用DAS-ELISA方法从意大利进境的黄瓜种子中初步筛选出疑似感染有番茄黑环病毒的样品,进而对阳性样品进行RT-PCR检测,得到723 bp特异性扩增片段;确认我们在进境的黄瓜... 番茄黑环病毒属于检疫性有害生物,其寄主范围广泛、危害严重。本文利用DAS-ELISA方法从意大利进境的黄瓜种子中初步筛选出疑似感染有番茄黑环病毒的样品,进而对阳性样品进行RT-PCR检测,得到723 bp特异性扩增片段;确认我们在进境的黄瓜种子中检出了检疫性有害生物番茄黑环病毒。此前该病毒未有在国内分布的报道,是系统内首次在意大利进境的黄瓜种子上截获该病毒。 展开更多
关键词 进境黄瓜种子 番茄病毒 检测鉴定
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侵染葡萄的病毒(病害)简介
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作者 孟保中 《河北果树》 1991年第3期16-20,共5页
迄今为止,已见报道的葡萄病毒(病害)达40余种,有些已明确病原,有些则尚未搞清,有些病害公布广,经济为害严重,有些则地区性严重发生或为害较小。下面从病原学、传染方式及分布等方面对这类病害做一简述。一、病原已知的病毒病1.葡萄扇叶... 迄今为止,已见报道的葡萄病毒(病害)达40余种,有些已明确病原,有些则尚未搞清,有些病害公布广,经济为害严重,有些则地区性严重发生或为害较小。下面从病原学、传染方式及分布等方面对这类病害做一简述。一、病原已知的病毒病1.葡萄扇叶病(Grapevine fanleaf disease):是最严重的葡萄病毒病之一,世界分布。Rozier(1800)首次报道,Hewitt(1950)确认它为病毒病,1956年分离成功,病原为葡萄扇叶病毒(GFLV)。属线虫传多面体病毒组(Nepoviruses)。摩擦接种传染多种草本植物。Xiphinema index为主要传毒线虫,有人报道X.vuittenezi,X.italiae也可传毒;花粉传毒。侵染所有欧亚品种,引入欧洲的北美种群许多品种及其杂交种和亚洲的观赏葡萄。 展开更多
关键词 葡萄扇叶病 葡萄品种 传毒 病毒 多面体病 世界分布 传染方式 番茄病毒 甜菜黄化病毒 类菌质体
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番茄黑环病毒检测方法的建立 被引量:4
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作者 高焕利 杨翠云 +3 位作者 周国梁 于翠 乔艳艳 马青 《植物检疫》 2007年第3期149-152,共4页
通过汁液摩擦接种的方法接种几种鉴别寄主,筛选出检测番茄黑环病毒(TBRV)的一套鉴别寄主。同时建立了免疫学电镜检测方法。根据TBRV外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,应用RT-PCR均能从TBRV的6个分离物中扩增到与预期大小相同的DNA片... 通过汁液摩擦接种的方法接种几种鉴别寄主,筛选出检测番茄黑环病毒(TBRV)的一套鉴别寄主。同时建立了免疫学电镜检测方法。根据TBRV外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,应用RT-PCR均能从TBRV的6个分离物中扩增到与预期大小相同的DNA片段。利用抽提的质粒研究了RT-PCR方法检测TBRV的灵敏度。 展开更多
关键词 番茄病毒(TBRV) 鉴别寄主反应 免疫电镜 RT-PCR 灵敏度
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非洲菊三种病毒的快速检测及其组培脱毒方法 被引量:1
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作者 张丽莉 杨翠云 +2 位作者 于翠 袁文辉 马青 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期239-245,共7页
利用感染了番茄黑环病毒、烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的非洲菊叶片,建立同步检测非洲菊3种病毒的多重RT-PCR和实时荧光RT-PCR,多重RT-PCR可一次性扩增出3种病毒的DNA条带,最低可检测到相当于1μg的带毒叶片;实时荧光RT-PCR可分别检测... 利用感染了番茄黑环病毒、烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的非洲菊叶片,建立同步检测非洲菊3种病毒的多重RT-PCR和实时荧光RT-PCR,多重RT-PCR可一次性扩增出3种病毒的DNA条带,最低可检测到相当于1μg的带毒叶片;实时荧光RT-PCR可分别检测相当于1ng、1ng和100pg的带毒叶片。同时采用茎尖、叶片和花托组织培养脱毒并结合培养基添加病毒A的脱毒方法,对接种3种病毒的非洲菊进行外植体脱毒试验,获得非洲菊组培苗脱毒方法。用建立的多重RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测脱毒效果,茎尖脱毒率分别为75.0%和66.7%,花托脱毒率分别为52.0%和54.5%。 展开更多
关键词 番茄病毒(TBRV) 烟草花叶病毒(TMV) 黄瓜花叶病毒(CMV) RT—PCR 非洲菊脱毒
原文传递
番茄黑环病毒液相芯片快速检测方法的建立
10
作者 张永江 辛言言 +2 位作者 李桂芬 刘忠梅 刘洪义 《北方园艺》 CAS 北大核心 2013年第1期127-130,共4页
为建立番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)的液相芯片检测技术,对GenBank中的TBRV核苷酸序列进行分析,设计其特异性探针并用生物素标记。探针偶联荧光编码微球后与TBRV的RT-PCR产物进行杂交,用液相芯片检测仪检测荧光信号。结... 为建立番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)的液相芯片检测技术,对GenBank中的TBRV核苷酸序列进行分析,设计其特异性探针并用生物素标记。探针偶联荧光编码微球后与TBRV的RT-PCR产物进行杂交,用液相芯片检测仪检测荧光信号。结果表明:建立的方法具有良好的特异性,能够有效区分侵染马铃薯的TBRV、马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)、马铃薯A病毒(PVA)及番茄斑萎病毒(TSWV);检测灵敏度约为1pg/μL总RNA,与常规RT-PCR灵敏度相当。实际样品检测结果表明该方法可用于TBRV的日常检测。 展开更多
关键词 番茄病毒(TBRV) 液相芯片技术 检测
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