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福辛普利联合非诺贝特对DM小鼠视网膜Nrf2及HRD1表达的影响
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作者 高亚丰 祁军利 高莉 《海南医学》 CAS 2019年第13期1647-1651,共5页
目的探讨福辛普利联合非诺贝特对糖尿病(DM)小鼠视网膜核因子E2相关因子2 (Nrf2)及甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1 (HRD1)表达的影响。方法选择150只SD雄性小鼠,采用随机数表法分为空白对照组(假造模)、模型对照组(DM模型)、福辛普利... 目的探讨福辛普利联合非诺贝特对糖尿病(DM)小鼠视网膜核因子E2相关因子2 (Nrf2)及甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1 (HRD1)表达的影响。方法选择150只SD雄性小鼠,采用随机数表法分为空白对照组(假造模)、模型对照组(DM模型)、福辛普利给药组(20 mg·kg^-1·d^-1福辛普利干预)、非诺贝特给药组(400 mg·kg^-1·d^-1非诺贝特干预)和联合给药组(20 mg·kg^-1·d^-1福辛普利与400 mg·kg^-1·d^-1非诺贝特联合干预),每组30只。采用裂隙灯检查各组小鼠的晶状体浑浊程度,采用实时荧光定量PCR检测视网膜Nrf2及HRD1 mRNA的表达水平,采用Western blot方法检测视网膜Nrf2及HRD1蛋白表达水平,采用TUNEL染色法检测视网膜组织细胞凋亡TUNEL指数,视网膜丙二醛(MDA)、血管内皮生长因子(VEGF)浓度与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)酶活性采用ELISA法检测。对五组小鼠检测的指标进行比较。结果空白对照组小鼠晶状体无浑浊,其余四组小鼠晶状体均可见不同程度浑浊,五组小鼠晶状体浑浊程度比较差异有统计学意义(P<0.05);五组小鼠视网膜中Nrf2及HRD1 mRNA表达及其蛋白水平比较差异均有统计学意义(P<0.05),其中,空白对照组表达最高,联合给药组次之,单药给药组再次,模型对照组表达最低;五组小鼠视网膜组织细胞凋亡TUNEL指数比较差异有统计学意义(P<0.05),其中模型对照组最高,随后从高至低依次为福辛普利给药组、非诺贝特给药组、联合给药组和空白对照组;五组小鼠视网膜组织中的MDA、VEGF浓度与GSH-PX、SOD、ROS酶活性比较差异均有统计学意义(P<0.05),GSH-PX、SOD在空白对照组中活性最高,MDA、VEGF浓度、ROS活性最低,联合给药组次之,单药给药组再次,模型对照组最高或最低。结论福辛普利联合非诺贝特可通过有效增加DM小鼠视网膜Nrf2和HRD1的表达水平来降低氧化应激损伤和内质网应 展开更多
关键词 视网膜 福辛普利 非诺贝特 核因子E2相关因子2 甲基辅酶A还原酶降解蛋白1
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人参皂苷Rb1激活HRD1信号通路对动脉粥样硬化内皮细胞凋亡的影响 被引量:6
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作者 任丽 吴锡骅 +2 位作者 刘婷 梅益彰 苏施雅 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第7期779-784,795,共7页
目的探讨人参皂苷Rb1(GRb1)激活羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HRD1)通路对动脉粥样硬化介导的内皮细胞凋亡的影响。方法将人主动脉内皮细胞(HAECs)分为正常对照组(NC组)、模型组[氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),100 mg/L]、GRb1组(50μm... 目的探讨人参皂苷Rb1(GRb1)激活羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HRD1)通路对动脉粥样硬化介导的内皮细胞凋亡的影响。方法将人主动脉内皮细胞(HAECs)分为正常对照组(NC组)、模型组[氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),100 mg/L]、GRb1组(50μmol/L)、GRb1+si-NC组(si-HRD1阴性对照)和GRb1+si-HRD1组,比较各组HAECs的细胞活力、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平、细胞凋亡、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)及HRD1蛋白表达。结果与NC组比较,模型组细胞活力、SOD水平、Bcl-2及HRD1蛋白降低,ROS、MDA水平、细胞凋亡率、Caspase-3及Bax蛋白升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,GRb1组细胞活力、SOD水平、Bcl-2及HRD1显著升高,ROS、MDA水平、细胞凋亡率、Caspase-3及Bax蛋白降低,差异有统计学意义(P<0.05);沉默HRD1逆转了GRb1对ox-LDL诱导的动脉粥样硬化内皮细胞的影响。结论GRb1可能通过激活HRD1通路抑制ox-LDL诱导的动脉粥样硬化内皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 人参皂苷RB1 氧化应激 细胞凋亡 甲基辅酶A还原酶降解蛋白1
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紫外线及黄芪甲苷对人皮肤成纤维细胞E3连接酶Hrd1表达的影响 被引量:5
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作者 钱雯 陈斌 +1 位作者 蒋辉莉 苏东明 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期201-205,共5页
目的:探讨紫外线(UV)对人皮肤成纤维细胞中E3连接酶Hrd1表达的影响及黄芪甲苷的干预作用。方法:分离培养人原代成纤维细胞,分别以10J/cm^2UVA和30mJ/cm^2 UVB进行照射,黄芪甲苷进行干预处理。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓... 目的:探讨紫外线(UV)对人皮肤成纤维细胞中E3连接酶Hrd1表达的影响及黄芪甲苷的干预作用。方法:分离培养人原代成纤维细胞,分别以10J/cm^2UVA和30mJ/cm^2 UVB进行照射,黄芪甲苷进行干预处理。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的黄芪甲苷对成纤维细胞增殖活性的影响;荧光定量PCR法检测成纤维细胞中Hrd1的mRNA表达;免疫组化法观察成纤维细胞Hrd1的蛋白表达。结果:MTT结果示:在适宜浓度下,黄芪甲苷对体外培养的成纤维细胞有显著的促增殖作用,药物浓度为10、20、30mg/L时最为明显(P<0.001);荧光定量PCR结果示:UVA、UVB照射组成纤维细胞Hrd1 mRNA表达量明显高于正常对照组,而黄芪甲苷可显著抑制UV辐射后成纤维细胞中Hrd1的表达(P<0.001);免疫组化结果示:UV照射(UVA或UVB)可增加Hrd1的蛋白表达,黄芪甲苷可显著抑制UV照射后成纤维细胞中Hrd1的蛋白表达。结论:UV辐射可以上调人皮肤成纤维细胞中E3连接酶Hrd1的表达,而黄芪甲苷对这一现象具有逆转作用。 展开更多
关键词 紫外线 人皮肤成纤维细胞 E3连接 甲基辅酶A还原酶降解蛋白1 黄芪甲苷
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紫外线对人皮肤成纤维细胞中Hrd1及Nrf2表达的影响 被引量:3
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作者 金轶 陈斌 +4 位作者 丁帆 成仙叶 李谢伦 陈芳 苏东明 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2020年第2期120-125,共6页
目的探讨紫外线(UV)照射对人皮肤成纤维细胞中羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白(Hrd)1及核因子E2相关因子(Nrf)2表达的影响及可能机制。方法共收集12份人皮肤组织标本,曝光及非曝光部位标本各6份,免疫组化检测2组Hrd1及Nrf2的表达。将... 目的探讨紫外线(UV)照射对人皮肤成纤维细胞中羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白(Hrd)1及核因子E2相关因子(Nrf)2表达的影响及可能机制。方法共收集12份人皮肤组织标本,曝光及非曝光部位标本各6份,免疫组化检测2组Hrd1及Nrf2的表达。将体外培养人皮肤成纤维细胞分为对照组、UVA组、UVB组,照光后用Western blot法检测各组成纤维细胞中Hrd1及Nrf2的表达。应用Hrd1-siRNA转染体外培养人皮肤成纤维细胞,下调细胞中Hrd1的表达后,Western blot检测成纤维细胞Nrf2的表达。应用免疫荧光分析检测细胞中Hrd1与Nrf2在细胞中的共定位情况,应用免疫共沉淀检测体外培养人成纤维细胞中Hrd1与Nrf2是否存在内源性结合。结果临床标本实验中,曝光部位皮肤组织中Hrd1表达(0.4756±0.0785)明显高于避光部位(0.1270±0.0253,t=7.317,P<0.05),曝光部位皮肤组织中Nrf2表达(0.1190±0.0217)明显低于避光部位(0.2629±0.0263,t=7.306,P<0.05)。体外培养成纤维细胞实验中,经紫外线照射后,UVA组与对照组相比,Hrd1蛋白表达水平明显增高(t=7.227,P<0.05),Nrf2蛋白表达水平明显下降(t=6.456,P<0.05);同样,UVB组与对照组相比,Hrd1蛋白表达水平明显增高(t=2.980,P<0.05),Nrf2蛋白表达水平明显下降(t=13.52,P<0.05)。应用Hrd1-SiRNA下调体外培养人纤维细胞中Hrd1的表达后,无论是经UVA照射还是UVB照射,被下调Hrd1组细胞内Nrf2的表达较未下调组明显升高。免疫荧光分析结果显示Hrd1与Nrf2在体外培养人皮肤成纤维细胞中的均有表达,并且在细胞中存在Hrd1与Nrf2共定位。免疫共沉淀验证了Hrd1与Nrf2在体外培养人皮肤成纤维细胞中存在内源性结合。结论Hrd1与Nrf2在人皮肤成纤维细胞中存在结合,紫外线照射可通过增加细胞中Hrd1的表达从而抑制Nrf2的表达。 展开更多
关键词 紫外线 成纤维细胞 甲基辅酶A还原酶降解蛋白1 核因子E2相关因子2
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Hrd1转基因小鼠的构建与验证 被引量:1
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作者 杨硕 刘磊 +5 位作者 万幸 王文丰 王娟 贺恒 雷蕾 李斌 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期115-117,共3页
背景 内质网应激在糖尿病视网膜病变(DR)中发挥着重要作用.羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(Hrd1,又名Syvn1)作为一种内质网相关蛋白降解(ERAD)途径中的核心蛋白,能够减少内质网应激. 目的 构建Hrd1高表达小鼠,为今后研究Hrd1... 背景 内质网应激在糖尿病视网膜病变(DR)中发挥着重要作用.羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(Hrd1,又名Syvn1)作为一种内质网相关蛋白降解(ERAD)途径中的核心蛋白,能够减少内质网应激. 目的 构建Hrd1高表达小鼠,为今后研究Hrd1在DR中的作用提供动物模型. 方法 构建Hrd1系统表达重组质粒,酶切、测序后显微注射3 p1到685枚C57BL/6小鼠受精卵中,移植到代孕母鼠,得到Hrd1转基因小鼠.利用鼠尾PCR检测法鉴定F0代小鼠的基因型.得到Hrd1基因检测阳性鼠后,使其分别与野生型鼠杂交,得到F1代Hrd1转基因小鼠,取鼠尾组织,用PCR检测法再次鉴定F1代小鼠基因型. 结果 成功构建了Hrd1重组载体,重组质粒pRP.ExBi-EF1 a-Syvn1-IRES-eGFP的全序列测定结果显示,cDNA序列均正确.接受了Hrd1-pcDNA显微注射的685枚受精卵中成活598枚.将存活的受精卵移植到代孕母鼠后共产子鼠41只,获F0代子鼠8只,生理活动均良好.PCR电泳显示339 bp处阳性条带,该基因型可以传递到子代F1.结论 成功构建了Hrd1转基因小鼠. 展开更多
关键词 甲基辅酶A还原酶降解蛋白1 小鼠/转基因 内质网应激 糖尿病视网膜病变 HYDROXYMETHYL glutaric ACYL COENZYME A REDUCTASE degradation protein 1
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HRD1在肝脏糖异生中的作用 被引量:1
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作者 杨珣 苏东明 《江苏医药》 CAS 2017年第13期908-911,共4页
目的观察羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HRD1)在肝脏糖异生中的作用。方法采用Western blot法检测5只饥饿小鼠、4只高脂饮食小鼠、4只糖尿病小鼠及其分别对应的正常对照小鼠(5、4、4只)肝脏组织磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和HRD... 目的观察羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HRD1)在肝脏糖异生中的作用。方法采用Western blot法检测5只饥饿小鼠、4只高脂饮食小鼠、4只糖尿病小鼠及其分别对应的正常对照小鼠(5、4、4只)肝脏组织磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和HRD1的表达。分别使用毛喉素0、5和20μmol/L处理人肝癌细胞株HepG2,Western blot检测其PEPCK和HRD1表达。用腺病毒感染HepG2细胞以过表达HRD1,用Western blot检测其PEPCK和真核翻译起始因子2α(eIF2α)的表达。结果与对照组比较,饥饿小鼠肝脏组织中PEPCK和HRD1蛋白表达升高(P<0.05)。与各自对照组比较,高脂饮食及糖尿病小鼠肝脏组织PEPCK蛋白表达升高,而HRD1蛋白表达降低(P<0.05)。随着毛喉素浓度增加,HepG2细胞PEPCK和HRD1蛋白表达增高(P<0.05)。HRD1过表达可降低PEPCK和eIF2α蛋白表达量(P<0.05)。结论肝脏糖异生过程中HRD1高表达,过表达的HRD1通过抑制eIF2α负反馈抑制肝脏糖异生。 展开更多
关键词 糖异生 甲基辅酶A还原酶降解蛋白1 磷酸烯醇式丙酮酸羧激
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HRD1对人乳腺癌细胞增殖迁移的影响及其机制初步研究 被引量:1
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作者 洪晔 蔡宏伟 苏东明 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期898-902,914,共6页
目的:研究羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HMG-Co A reductase degradation protein 1,HRD1)对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,初步探讨其潜在机制。方法:通过Western blot和免疫组织化学实验检测HRD1和乳酸脱氢酶B(lactate dehydro... 目的:研究羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HMG-Co A reductase degradation protein 1,HRD1)对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,初步探讨其潜在机制。方法:通过Western blot和免疫组织化学实验检测HRD1和乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)在乳腺癌组织和相应癌旁组织中的表达。用腺病毒感染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7以过表达HRD1,观察HRD1和LDHB的表达水平,MTT实验和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果:与癌组织相比,HRD1在配对的癌旁组织中高表达,LDHB则呈低表达(P<0.05);过表达HRD1能够显著降低MDA-MB-231和MCF-7的增殖和迁移能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达HRD1可以降低乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能是通过下调LDHB蛋白的表达实现。 展开更多
关键词 乳腺癌 甲基辅酶A还原酶降解蛋白1 乳酸脱氢B
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