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豆油在红霉素发酵中的作用及作用机制的研究 被引量：11
1
作者 沈兆兵 陈国豪 陈长华 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期657-660,共4页
红色糖多孢菌D在15L发酵罐的基础培养基和发酵过程中补加豆油,当基础培养基中豆油量加倍时,效价提高43.1%;发酵过程补加豆油罐的红霉素效价、生产强度和Yp/s比不补豆油的分别提高了69.7%、69.6%和63.8%。通过实验测定发现,发酵过程补加... 红色糖多孢菌D在15L发酵罐的基础培养基和发酵过程中补加豆油,当基础培养基中豆油量加倍时,效价提高43.1%;发酵过程补加豆油罐的红霉素效价、生产强度和Yp/s比不补豆油的分别提高了69.7%、69.6%和63.8%。通过实验测定发现,发酵过程补加豆油后,异柠檬酸脱氢酶、甲基丙二酰CoA异构酶的比活以及α-酮戊二酸的量均高于不补加豆油时的值,而琥珀酸的量低于不补加豆油时的值。推测豆油经过红色糖多孢菌代谢后进入红霉素合成的一条可能途径:豆油经过代谢后进入TCA循环,并强化了TCA循环的通量,产生了大量α-酮戊二酸,再生成琥珀酰CoA,琥珀酰CoA在甲基丙二酰CoA异构酶的作用下生成甲基丙二酰CoA作为红霉素合成的前体。 展开更多
关键词 豆油 红色糖多孢菌 红霉素发酵 Α-酮戊二酸 甲基丙二酰coa 琥珀酸
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力复霉素前体甲基丙二酰CoA合成途径的研究 被引量：6
2
作者 张蔚文 焦瑞身 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期276-283,共8页
力复霉素合成的碳前体之一(2R)—甲基丙二酰CoA至少可以有三条酶学合成途径。三条途径中的关键酶分别为甲基丙二酰CoA转羧基酶、丙二酰CoA羧化酶、甲基丙二酰CoA变位酶和甲基丙二酰CoA消旋酶。通过比较各个酶活性的时间进程和力复霉素... 力复霉素合成的碳前体之一(2R)—甲基丙二酰CoA至少可以有三条酶学合成途径。三条途径中的关键酶分别为甲基丙二酰CoA转羧基酶、丙二酰CoA羧化酶、甲基丙二酰CoA变位酶和甲基丙二酰CoA消旋酶。通过比较各个酶活性的时间进程和力复霉素合成时间的相关性,以及各个酶的底物亲合力,对它们在地中海拟无枝酸菌(Amycolatopsis mediterranei)甲基丙二酰CoA合成中的贡献作了排序,发现甲基丙二酰CoA变位酶途径是主要负责酶系。但是各个途径的贡献排序并不是固定不变的,能受到环境因素的调控,丙酸盐的加入将抑制甲基丙二酰CoA变位酶活力,而使得甲基丙二酰CoA转羧基酶成为主要酶系。甲基丙二酰CoA合成途径的多样性有助于细胞对环境变化的灵活反应。此外,对各个酶的调控特性也进行了研究。 展开更多
关键词 力复霉素 甲基丙二酰coa 合成途径 发酵
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地中海拟无枝酸杆菌甲基丙二酰CoA变位酶和消旋酶的纯化及性质 被引量：2
3
作者 张蔚文 焦瑞身 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期199-207,共9页
采用原生质体裂解方法确定甲基丙二酰CoA变位酶(MCM)和消旋酶(MCR)均是胞浆内酶。各经过四步纯化得到电泳纯酶。纯化MCM酶的比活力为12.84u/mg,纯化倍数为528,酶活回收为60％,纯化的MCM酶服从典型的米氏底物饱和曲线,对琥珀酰CoA和辅酶B... 采用原生质体裂解方法确定甲基丙二酰CoA变位酶(MCM)和消旋酶(MCR)均是胞浆内酶。各经过四步纯化得到电泳纯酶。纯化MCM酶的比活力为12.84u/mg,纯化倍数为528,酶活回收为60％,纯化的MCM酶服从典型的米氏底物饱和曲线,对琥珀酰CoA和辅酶B_(12)的K_m值分别为9.723#mol/L和0.1277#mol/L。经SephadexG-150测定MCM分子量约为134.000±2000,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条分子量分别为67000和65000的蛋白带,说明该酶由两个大小不等亚基组成。吸收光谱测定每摩尔纯化全酶含两摩尔辅酶B_(12)。纯化MCR酶比活力为2.305u/mg,纯化倍数96,酶活回收46.7％。MCR酶由两个分子量均为17500的亚基组成。MCR酶活性能被二价金属离子Cu^(2+)、Co^(2+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)和Fe^(2+)所促进。两酶的酶学性质和其他生物来源的MCM、MCR酶明显相似。 展开更多
关键词 拟无枝酸杆菌 地中海菌 甲基丙二酰coa 变位酶
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缬氨酸对必特螺旋霉素生物合成的影响 被引量：1
4
作者 江维 王永红 +2 位作者 庄英萍 郝玉有 储炬 《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期53-59,共7页
在必特螺旋霉素基因工程链霉菌WSJ～1—195发酵生产必特螺旋霉素的摇瓶实验中，发酵36h时向合成培养基中添加0．5g／L的缬氨酸对必特螺旋霉素效价和组分的影响最为显著。实验结果表明：添加缬氨酸后，菌体在发酵48～60h糖耗加快，达到1... 在必特螺旋霉素基因工程链霉菌WSJ～1—195发酵生产必特螺旋霉素的摇瓶实验中，发酵36h时向合成培养基中添加0．5g／L的缬氨酸对必特螺旋霉素效价和组分的影响最为显著。实验结果表明：添加缬氨酸后，菌体在发酵48～60h糖耗加快，达到1g／（L·h），发酵液中丙酸和丁酸浓度先增后降，而发酵液中丙酮酸在胞内积累，丙酮酸羧化酶活性在48h和60h时分别增加20％和95％。由于糖耗加快，更多碳流可以通过甲基丙二酰CoA转羧基酶途径（MCT途径）将缬氨酸分解生成的丙酰CoA和丁酰CoA转化为内酯环合成所需要的直接三碳前体，最终效价比对照高出45．3％。添加缬氨酸后，由于大环合成增多，侧链前体的供应无法满足内酯环增加的需求，导致酰化组分含量总体下降，其中总异戊酰组分降低23％，乙酰螺旋霉素Ⅲ降低30．8％，丙酰螺旋霉素Ⅱ降低33％，丙酰螺旋霉素Ⅲ降低48．8％。同时缬氨酸代谢生成的丁酸也有可能会影响异戊酰基转移酶的活性。 展开更多
关键词 必特螺旋霉素 缬氨酸 丙酮酸羧化酶 甲基丙二酰coa
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丙酸血症11例基因突变分析 被引量：11
5
作者 胡宇慧 韩连书 +7 位作者 叶军 邱文娟 张雅芬 杨艳玲 刘丽 麻宏伟 高晓岚 顾学范 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期416-420,共5页
目的研究丙酸血症患儿丙酰辅酶A羧化酶PCCA和PCCB基因突变情况.方法应用PCR扩增和直接测序对11例丙酸血症患儿PCCA和PCCB基因的各个外显子及其两侧侧翼序列进行突变检测,并对部分患儿父母进行相应突变基因检测.结果6例为PCCA突变,5例为P... 目的研究丙酸血症患儿丙酰辅酶A羧化酶PCCA和PCCB基因突变情况.方法应用PCR扩增和直接测序对11例丙酸血症患儿PCCA和PCCB基因的各个外显子及其两侧侧翼序列进行突变检测,并对部分患儿父母进行相应突变基因检测.结果6例为PCCA突变,5例为PCCB突变.共发现13种突变,其中10种突变未见文献报道,突变类型包括错义突变、缺失突变、剪切位点突变和复杂型插入缺失突变,错义突变为最常见类型.167-179dell3insl复杂型插入缺失突变在2例中为纯合突变.结论在11例内酸血症患儿中检测到13种突变,其中10种为新突变类型,为今后有关丙酸血症的发病机制研究提供理论依据. 展开更多
关键词 丙酸类 甲基丙二酰coa脱羟酶 基因 突变
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利用代谢工程技术强化肉桂地链霉菌莫能菌素的生物合成
6
作者 刘旻炜 张善飞 +2 位作者 黄子瑄 邢浩博 孙付保 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3521-3532,共12页
【目的】莫能菌素(monensin)是由肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)产生的聚醚类抗生素。本研究以肉桂地链霉菌2110为研究材料,利用代谢工程技术开展其重要前体甲基丙二酰CoA合成途径强化的研究,以此提高莫能菌素产量。【方法... 【目的】莫能菌素(monensin)是由肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)产生的聚醚类抗生素。本研究以肉桂地链霉菌2110为研究材料,利用代谢工程技术开展其重要前体甲基丙二酰CoA合成途径强化的研究,以此提高莫能菌素产量。【方法】首先过表达巴豆酰CoA还原酶(crotonyl-CoA reductase,CCR)强化乙酰乙酰CoA途径,接着过表达甲基丙二酰CoA变位酶(methylmalonyl-CoA mutase,MCM)强化琥珀酰CoA途径,最后串联过表达CCR和MCM并评估工程菌株的发酵性能。【结果】过表达CCR能促进菌体生长,同时提高莫能菌素产量,摇瓶发酵10 d后过表达菌株的生物量和发酵效价分别提高10.4%和19.0%;过表达MCM未能促进菌体生长,但提高了莫能菌素产量,过表达菌株摇瓶发酵10 d时效价提升9.9%;串联过表达CCR和MCM也使菌株的生物量和发酵效价提高,工程菌株2110-CCR-MCM在摇瓶发酵10d时生物量和发酵效价分别提升9.4%和26.8%,在5L罐上发酵6 d时达到最高的生物量和发酵效价分别为54.6 g/L和11.3 kU/mL,比原始菌株分别增加12.7%和36.2%。【结论】CCR和MCM的确介导了莫能菌素生物合成的关键代谢途径,串联过表达CCR和MCM更有效地促进了莫能菌素的合成。本研究为其他聚酮类化合物高产工程菌株的构建提供技术借鉴。 展开更多
关键词 肉桂地链霉菌 莫能菌素 巴豆酰coa还原酶 甲基丙二酰coa变位酶 前体供应 串联过表达
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Co^(2+)对红霉素生物合成过程的影响 被引量：1
7
作者 杜雯 陈长华 《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1280-1284,共5页
研究了红霉素生物合成过程中糖代谢相关的关键酶:己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、磷酸果糖激酶和异柠檬酸脱氢酶,以及合成红霉内酯环前体甲基丙二酰CoA相关的酶:甲基丙二酰CoA异构酶和甲基丙二酰CoA羧基转移酶的时序变化,并测定了过程... 研究了红霉素生物合成过程中糖代谢相关的关键酶:己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、磷酸果糖激酶和异柠檬酸脱氢酶,以及合成红霉内酯环前体甲基丙二酰CoA相关的酶:甲基丙二酰CoA异构酶和甲基丙二酰CoA羧基转移酶的时序变化,并测定了过程中有机酸的含量变化。实验表明:Co2+能大幅提高红霉素效价。这可能与Co2+能明显提高甲基丙二酰CoA异构酶与甲基丙二酰CoA羧基转移酶的比活,并在一定程度上促进糖代谢有关。 展开更多
关键词 红霉素 糖代谢 甲基丙二酰coa异构酶 甲基丙二酰coa羧基转移酶 有机酸
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两例丙酸血症患儿的临床表型及致病基因突变分析 被引量：1
8
作者 杨佩颖 孙云 +4 位作者 马定远 王彦云 张志蕾 程威 蒋涛 《中华围产医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期120-125,共6页
目的研究丙酸血症患儿的临床特征及致病基因突变情况。方法回顾性分析2017年5月至2018年6月南京医科大学附属妇产医院收治的2例丙酸血症患儿的临床资料。提取患儿及父母外周血基因组DNA,应用基于Ion Torrent半导体测序技术的遗传代谢病... 目的研究丙酸血症患儿的临床特征及致病基因突变情况。方法回顾性分析2017年5月至2018年6月南京医科大学附属妇产医院收治的2例丙酸血症患儿的临床资料。提取患儿及父母外周血基因组DNA,应用基于Ion Torrent半导体测序技术的遗传代谢病诊断基因包检测,对可疑致病突变进行Sanger测序验证。对研究数据采用描述性统计分析。结果例1生后次日因"嗜睡、拒乳"疑诊败血症收入院,串联质谱技术新生儿筛查结果提示丙酰肉碱及其比值增高,尿气相色谱质谱检测示3-羟基丙酸、甲基枸橼酸增高,基因检测发现PCCB基因c.331C>T(p.R111X)/c.1228C>T(p.R410W)复合杂合突变,丙酸血症诊断明确,给予特殊饮食辅以左卡尼丁治疗。患儿于3月龄无诱因突发呕吐昏迷夭折。例2于5月龄突发呕吐、嗜睡、精神差就诊,串联质谱检测结果提示丙酰肉碱及其比值增高,基因检测发现PCCB基因c.146delG(p.G49EfsX16)/c.1253C>T(p.A418V)复合杂合突变,其中c.146delG(p.G49EfsX16)为未被报道过的新突变,评估为致病性突变。给予特殊饮食辅以左卡尼丁治疗,患儿依从性差且治疗有间断,随访至3岁8个月,患儿重度发育落后。结论临床疑诊败血症新生儿应考虑丙酸血症可能,并应尽快进行串联质谱和基因检测以明确诊断。新发现基因突变位点的致病性和功能仍有待深入研究。 展开更多
关键词 丙酸血症 甲基丙二酰coa脱羧酶 遗传变异
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甲基丙二酰CoA羧基转移酶对泰乐星合成的影响
9
作者 戚薇 王建玲 +2 位作者 张晓静 路福平 杜连祥 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期19-21,共3页
对不同碳源条件下泰乐星发酵过程中甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶的活力进行了测定。发现发酵过程中甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶的比活力与泰乐星形成速率有关，即该酶的活力高，泰乐星的形成速率大，说明甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶是泰... 对不同碳源条件下泰乐星发酵过程中甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶的活力进行了测定。发现发酵过程中甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶的比活力与泰乐星形成速率有关，即该酶的活力高，泰乐星的形成速率大，说明甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶是泰乐星合成中的一种关键酶。另外，菜籽油为碳源条件下测得的甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶的活力比淀粉为碳源条件下该酶的活力高，此结果从酶活水平分析了菜籽油为碳源可提高泰乐星产量的原因。 展开更多
关键词 泰乐星 甲基丙二酰coa羧基转移酶 比活力 合成 抗生素
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PCCB基因突变一例
10
作者 郭琼 李军 李贵南 《中国医师杂志》 CAS 2017年第12期1907-1908,共2页
患儿,女,6 d,因'发现皮肤黄染3 d,鼻塞、喷嚏1 d'于2015年2月23日收入本院,精神反应欠佳,吸奶稍差. 母亲结婚8年未孕,患儿系G1P1,试管婴儿,双胎之大,孕37 周剖宫产,出生体重2. 4 kg. 否认宫内窘迫,Apgar评分1 min 9分. 生后第1... 患儿,女,6 d,因'发现皮肤黄染3 d,鼻塞、喷嚏1 d'于2015年2月23日收入本院,精神反应欠佳,吸奶稍差. 母亲结婚8年未孕,患儿系G1P1,试管婴儿,双胎之大,孕37 周剖宫产,出生体重2. 4 kg. 否认宫内窘迫,Apgar评分1 min 9分. 生后第1天开奶,足月配方奶喂养. 父亲36岁,母亲34岁,有1 弟弟、双胎之小,均体健;否认家族遗传代谢病史. 入院体格检查:体重2. 14 kg. 精神反应欠佳,哭声欠洪亮,皮肤黄染波及肘、膝关节,心肺腹未见异常,四肢肌力、肌张力正常. 展开更多
关键词 甲基丙二酰coa脱羧酶/遗传学 突变 病例报告
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