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蛋白质印迹法中免染技术和总蛋白定量方法的研究进展 被引量：1
1
作者 韩欣霖 杨佳儒 +1 位作者 宝福凯 柳爱华 《生物技术通讯》 CAS 2017年第5期709-714,共6页
当含有蛋白质的SDS-PAGE胶浸泡在三氯乙酸或氯仿中时,经三氯化合物的作用,使得蛋白质中的色氨酸经紫外光照射会发出可见光,因而可在SDS-PAGE凝胶上实现对蛋白质条带的定位与定性。免染技术即是基于此原理而发明的。基于免染技术,我们可... 当含有蛋白质的SDS-PAGE胶浸泡在三氯乙酸或氯仿中时,经三氯化合物的作用,使得蛋白质中的色氨酸经紫外光照射会发出可见光,因而可在SDS-PAGE凝胶上实现对蛋白质条带的定位与定性。免染技术即是基于此原理而发明的。基于免染技术,我们可以检测到待测样品中的总蛋白条带的光密度,进而利用目的蛋白条带光密度与总蛋白条带光密度的比值对目的蛋白进行定量。本文就蛋白质印迹法技术中的免染技术和总蛋白定量方法的原理和优势进行简要综述。 展开更多
关键词 免染技术 β肌动蛋白(β-actin) β微管蛋白(β-tublin) 甘油醛3-磷酸脱氢酶(gapdh) 总蛋白定量
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植物中磷酸甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)在氧化胁迫下的生理功能 被引量：14
2
作者 梁颖 李玉花 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1027-1032,共6页
文章介绍植物中持家蛋白磷酸甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)在氧化胁迫下抑制活性氧生成、诱发磷酸化过程从而激活MAPK信号级联反应、诱导聚合体形成、参与谷胱甘肽修饰和控制电子转运中的生理功能研究进展。
关键词 氧化胁迫 磷酸甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh) 生理功能 植物
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杧果MGAPDH同源基因的克隆及其表达分析 被引量：11
3
作者 罗聪 何新华 +2 位作者 胡颖 谭超 欧世金 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1019-1024,F0003,共7页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码401个氨基酸。利用分子生物学软件对MGAPDH蛋白进行生物信息学分析,结果显示:MGAPDH蛋白分子量为42.8 ku,等电点为8.9;该蛋白包含2个功能域,即NADB_Rossmannsuperfamily和Gp_dh_C superfamily;MGAPDH蛋白不含信号肽序列和跨膜结构,是非分泌蛋白,位于叶绿体中。氨基酸序列进化分析结果显示,杧果MGAPDH蛋白可能与光合作用有关。半定量分析显示,杧果MGAPDH同源基因在杧果不同组织中均表达,并且表达水平差异不明显,说明杧果MGAPDH同源基因可作为杧果基因差异表达的内参基因。 展开更多
关键词 杧果 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh) 表达分析 序列分析
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管家基因GAPDH在肿瘤与衰老组织中作为内参应慎重 被引量：5
4
作者 郑琳 郑慧玲 刘新光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期385-389,共5页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是糖酵解过程中的一个酶,编码该酶的基因为管家基因,几乎在所有组织中呈高水平、恒定表达,常用作蛋白质、RNA、DNA等分子生物学相关实验的标准化内参。但近年来,GA... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是糖酵解过程中的一个酶,编码该酶的基因为管家基因,几乎在所有组织中呈高水平、恒定表达,常用作蛋白质、RNA、DNA等分子生物学相关实验的标准化内参。但近年来,GAPDH作为内参受到质疑,特别是在肿瘤组织、衰老组织。大量研究证实,GAPDH在多种肿瘤中表达上调,衰老的骨骼肌中下调。其中GAPDH在肿瘤中的高表达可能与肿瘤的侵袭性转移和细胞增殖相关。本文就GAPDH在肿瘤、衰老组织或细胞中的表达情况以及可能机制作一综述,旨在更全面地了解管家基因GAPDH在肿瘤与衰老组织、细胞中是否恒定表达,以便在研究中可以选择最优的内参做参照。 展开更多
关键词 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh) 肿瘤 衰老
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探索结直肠癌血清外泌体有效分子标志物 被引量：1
5
作者 杨钊 邹鲁飞 《生物医学工程与临床》 CAS 2023年第6期785-795,共11页
目的基于血清外泌体数据结合加权基因共表达算法(WGCNA)和蛋白-蛋白互作分析(PPI)筛选结直肠癌(CRC)患者有效血清标志物,为预测CRC的发生提供帮助。方法从外泌体数据库(http://www.exorbase.org/)中下载健康人群和CRC患者血清外泌体基... 目的基于血清外泌体数据结合加权基因共表达算法(WGCNA)和蛋白-蛋白互作分析(PPI)筛选结直肠癌(CRC)患者有效血清标志物,为预测CRC的发生提供帮助。方法从外泌体数据库(http://www.exorbase.org/)中下载健康人群和CRC患者血清外泌体基因表达数据,采用WGCNA和PPI对由118例健康人群和35例CRC患者组成的数据集进行分析,并利用外部的癌症基因组图谱(TCGA)数据库、GEO(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)数据库中GSE192667和GSE24549数据集、R2预后平台(https://hgserver1.amc.nl/cgi-bin/r2/main.cgi)、CancerSEA(http://biocc.hrbmu.edu.cn/CancerSEA/)单细胞数据集和TIMER(https://cistrome.shinyapps.io/timer/)网站分析和验证核心分子。结果外泌体数据库中CRC患者较健康人群上调基因有5078个,下调基因有13004个。基于WGCNA和PPI算法获得了甘油醛3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)和微管蛋白α-1B基因(TUBA1B)作为核心分子。并通过内部数据集验证GAPDH和TUBA1B表达与CRC发生相关,可以作为有效的血清外泌体分子标志物。同时,外部TCGA数据集中上述两个基因在肿瘤组织中均高表达,在R2生存平台中高表达GAPDH和TUBA1B患者预后更差。同时在GSE192667和GSE24549数据集也获得了相似的结果。基于GSE192667数据集构建并验证了生存风险模型[生存风险模型得分=GAPDH表达量×0.0015+TUBA1B表达量×(-0.0002)]。利用CancerSEA网站和TIMER网站并结合基因集富集分析(GSEA)发现核心分子涉及了多个肿瘤相关通路和功能。结论利用血清外泌体数据库结合WGCNA和PPI算法,筛选获得的GAPDH和TUBA1B可以作为CRC患者有效的血清外泌体分子标志物。 展开更多
关键词 结直肠癌 血清外泌体 基因加权共表达算法(WGCNA) 甘油醛3-磷酸脱氢酶基因(gapdh) 微管蛋白α-1B基因(TUBA1B)
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微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶的定位及活性检测
6
作者 邹贝贝 王东强 +1 位作者 尹继刚 朱冠 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2023年第3期137-142,共6页
本研究以微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Cryptosporidium parvum glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,CpGAPDH)为对象,研究其亚细胞定位和酶动力学特征。设计特异性抗原多肽并免疫家兔,获得多克隆抗体,利用亲和纯化法获特异... 本研究以微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Cryptosporidium parvum glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,CpGAPDH)为对象,研究其亚细胞定位和酶动力学特征。设计特异性抗原多肽并免疫家兔,获得多克隆抗体,利用亲和纯化法获特异性抗体;经Western blot方法验证该抗体特异性,再通过间接免疫荧光法(IFA)进行蛋白定位。通过原核表达获得GST重组蛋白(GST-CpGAPDH),基于GAPDH的酶促反应利用辅酶NAD(H)或NADP(H)为电子受体或供体的原理,通过吸光度比色法监测反应中NAD(H)/NADP(H)的增加或减少鉴定其酶活性。结果显示,成功获得并纯化抗CpGAPDH抗体;Western blot分析显示该抗体可识别条带大小为40 kDa;IFA结果表明该蛋白主要分布于子孢子胞浆内,部分呈现颗粒状。利用重组蛋白确定了CpGAPDH的酶活性;在两种辅酶中,CpGAPDH更倾向于使用NAD(H)进行酶活反应。结果表明,本研究确定了CpGAPDH在虫体细胞的定位及酶活性检测,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 糖酵解途径 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh) 酶活动力学 蛋白定位
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利用qPCR法检测OsPIMT1转基因水稻中的外源片段拷贝数 被引量：2
7
作者 魏毅东 罗曦 +5 位作者 吴方喜 林悦龙 何炜 连玲 谢华安 张建福 《福建稻麦科技》 2017年第4期39-42,共4页
水稻转化过程中,多个拷贝数整合到基因组中影响遗传稳定性和基因表达。传统的Southern杂交检测法鉴定费时费力,不适合目前高通量和自动化的检测要求。因此研究通过比较定量除草剂草铵膦抗性基因(bar)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH2,建立... 水稻转化过程中,多个拷贝数整合到基因组中影响遗传稳定性和基因表达。传统的Southern杂交检测法鉴定费时费力,不适合目前高通量和自动化的检测要求。因此研究通过比较定量除草剂草铵膦抗性基因(bar)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH2,建立了基于实时荧光定量PCR的拷贝数检测法。利用此体系对9个独立的异天冬氨酸甲基转移酶OsPIMT1转基因T0代植株进行了荧光定量分析,其中6个为单拷贝,3个为双拷贝,经过Southern杂交和分离比分析验证,表明该方法能够快速,准确的鉴定水稻含有草铵膦抗性基因的水稻转基因植株。 展开更多
关键词 水稻 转基因 草铵膦抗性基因(bar) 甘油醛-3-磷酸脱氢酶gapdh2 实时定量PCR 拷贝数
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半滑舌鳎GAPDH基因开放读码框的克隆及序列分析 被引量：1
8
作者 陈蓉 饶颖竹 +1 位作者 梁静真 邓富琳 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期126-130,共5页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)广泛存在于真核生物中,对许多生理活动具有重要作用。参考金头鲷和斑马鱼的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计一对简并引物,提取半滑舌鳎肌肉组织总RNA,采用RT-PCR技术对GAPDH基因进行克隆测序及序列... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)广泛存在于真核生物中,对许多生理活动具有重要作用。参考金头鲷和斑马鱼的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计一对简并引物,提取半滑舌鳎肌肉组织总RNA,采用RT-PCR技术对GAPDH基因进行克隆测序及序列分析。结果表明,从半滑舌鳎肌肉组织中成功克隆了GAPDH基因的开放读码框(ORF),序列全长1 002 bp,编码333个氨基酸,分子量为36.0235 ku,等电点PI为7.75。序列同源性分析显示,该序列与其他鱼类的GAPDH氨基酸序列具有较高的同源性。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh) 开放读码框(ORF) 克隆 序列分析
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SIRT5在非小细胞性肺癌中互作候选蛋白的研究
9
作者 陈蕾 黄文斐 +2 位作者 李燕 李勇军 何彬 《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》 2022年第8期34-36,共3页
SIRT5在多种肿瘤组织尤其是非小细胞性肺癌中过量表达,并且日益成为潜在的肿瘤治疗靶点之一,目前SIRT5在非小细胞性肺癌中的作用机制尚不清楚。于是选用肺腺癌A549细胞来确定与SIRT5相互作用的候选蛋白,通过蛋白质组学策略利用免疫共沉... SIRT5在多种肿瘤组织尤其是非小细胞性肺癌中过量表达,并且日益成为潜在的肿瘤治疗靶点之一,目前SIRT5在非小细胞性肺癌中的作用机制尚不清楚。于是选用肺腺癌A549细胞来确定与SIRT5相互作用的候选蛋白,通过蛋白质组学策略利用免疫共沉淀和蛋白质免疫印迹方法验证了候选蛋白GAPDH和ENOA是SIRT5的互作蛋白,并通过反向免疫共沉淀进一步确认GAPDH与SIRT5的相互作用,从而为SIRT5在非小细胞性肺癌中的作用机制探究奠定基础。 展开更多
关键词 人源沉默信息调节因子2亚型5(SIRT5) 非小细胞性肺癌(NSCLC) 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh) 互作蛋白
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