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突变型环酰亚胺水解酶的底物专一性研究
被引量：
1
1
作者
陈云霞
钮利喜
+1 位作者
袁静明
石亚伟
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期46-50,共5页
目的:研究环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基对其底物专一性的影响。方法:通过缺失或替代获得了环酰亚胺水解酶C-末端剔除2个或3个氨基酸残基及C-末端两个Lys替代为两个Glu的突变型酶CIH291、CIH290以及KK292,293EE,用比色法与高效液...
目的:研究环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基对其底物专一性的影响。方法:通过缺失或替代获得了环酰亚胺水解酶C-末端剔除2个或3个氨基酸残基及C-末端两个Lys替代为两个Glu的突变型酶CIH291、CIH290以及KK292,293EE,用比色法与高效液相色谱法分析了重组野生型酶与突变型酶的底物专一性和动力学参数。结果:突变型酶与重组野生型酶相比,底物专一性未发生显著改变,最适底物仍为琥珀酰亚胺,然突变型酶对最适底物的亲和力略有降低,导致反应速度减小。结论:环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基的改变对其底物专一性的影响不大,但影响了酶对底物的亲和力。
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关键词
环
酰亚胺
水解酶
突变型
酶
动力学参数
底物专一性
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职称材料
环酰亚胺水解酶C末端区为该酶活性所必需
被引量：
1
2
作者
石亚伟
陈云霞
+1 位作者
崔丽方
袁静明
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期141-146,共6页
为了研究一个新环酰亚胺水解酶（CIH）C端区残基对酶分子构象及酶活性的影响，设计了C末端缺失1～4个氨基酸残基以及C-末端2个Lvs替代为2个Glu或2个Leu的突变酶，以野生型酶基因重组质粒pE—cih293为模板，在相应引物存在下，通过PCR扩...
为了研究一个新环酰亚胺水解酶（CIH）C端区残基对酶分子构象及酶活性的影响，设计了C末端缺失1～4个氨基酸残基以及C-末端2个Lvs替代为2个Glu或2个Leu的突变酶，以野生型酶基因重组质粒pE—cih293为模板，在相应引物存在下，通过PCR扩增获得突变的CIH基因片段．经克隆、表达与纯化，得到不同的突变酶蛋白．酶活性测定、荧光光谱与CD谱分析表明，随着C-末端缺失残基的增多，酶活性丧失也越来越多，但酶分子的聚合状态未发生变化；当CIH的C末端2个Lys替代为2个Glu时，酶活性及分子结构变化均不明显，但当替代为2个Leu时，酶活性丧失殆尽，分子结构变得松散而不再保持寡聚态．pH及热稳定性实验也表明。酶的稳定性与其分子的完整性密切相关．结果证实，CIH的C末端电荷残基对该酶活性与分子状态具有重要作用．
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关键词
环
酰亚胺
水解酶
C-末端区
带电荷氨基酸
分子构象
稳定性
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职称材料
假单胞菌YZ-26来源环酰亚胺水解酶中半胱氨酸残基的反应性及功能
3
作者
钮利喜
刘晓琴
石亚伟
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期776-782,共7页
【目的】研究环酰亚胺水解酶(Imidase,CIH)中的两个半胱氨酸残基的反应性及功能。【方法】设计了3个半胱氨酸突变酶:CIH7,108、CIH7、CIH108。将天然酶以及突变酶基因分别与麦芽糖结合蛋白(MBP)基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行...
【目的】研究环酰亚胺水解酶(Imidase,CIH)中的两个半胱氨酸残基的反应性及功能。【方法】设计了3个半胱氨酸突变酶:CIH7,108、CIH7、CIH108。将天然酶以及突变酶基因分别与麦芽糖结合蛋白(MBP)基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行融合表达,融合蛋白经纯化后得到了电泳纯的样品。使用5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)对天然酶CIH的巯基基团进行修饰,并分析了DTT对分子状态的影响。进一步研究了经H2O2处理后CIH及其突变酶的锌离子结合能力及分子状态。【结果】酶活测定表明CIH7,108和CIH7的活力基本丧失,而CIH108仍保持了72%的酶活性。CIH中的两个半胱氨酸残基以游离形式存在,不形成链内或链间二硫键。CIH与CIH108为四聚体结构且具有一定的锌离子结合能力,CIH7,108为多聚体,CIH7为单体及多体的混合物且都不具备锌离子结合能力,随着H2O2浓度的增加,CIH中的链内二硫键及CIH108中的链间二硫键逐渐增加。【结论】说明Cys7是结合锌离子和稳定CIH分子结构的必要残基。
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关键词
环
酰亚胺
水解酶
半胱氨酸
反应性
功能
原文传递
题名
突变型环酰亚胺水解酶的底物专一性研究
被引量：
1
1
作者
陈云霞
钮利喜
袁静明
石亚伟
机构
山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期46-50,共5页
基金
山西省自然基金资助项目(20031042)
文摘
目的:研究环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基对其底物专一性的影响。方法:通过缺失或替代获得了环酰亚胺水解酶C-末端剔除2个或3个氨基酸残基及C-末端两个Lys替代为两个Glu的突变型酶CIH291、CIH290以及KK292,293EE,用比色法与高效液相色谱法分析了重组野生型酶与突变型酶的底物专一性和动力学参数。结果:突变型酶与重组野生型酶相比,底物专一性未发生显著改变,最适底物仍为琥珀酰亚胺,然突变型酶对最适底物的亲和力略有降低,导致反应速度减小。结论:环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基的改变对其底物专一性的影响不大,但影响了酶对底物的亲和力。
关键词
环
酰亚胺
水解酶
突变型
酶
动力学参数
底物专一性
Keywords
Cyclic imide hydrolase Mutants Kinetic parameters Substrate specificity
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
环酰亚胺水解酶C末端区为该酶活性所必需
被引量：
1
2
作者
石亚伟
陈云霞
崔丽方
袁静明
机构
教育部化学生物学与分子工程重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期141-146,共6页
基金
山西省自然科学基金资助(No20031042)~~
文摘
为了研究一个新环酰亚胺水解酶（CIH）C端区残基对酶分子构象及酶活性的影响，设计了C末端缺失1～4个氨基酸残基以及C-末端2个Lvs替代为2个Glu或2个Leu的突变酶，以野生型酶基因重组质粒pE—cih293为模板，在相应引物存在下，通过PCR扩增获得突变的CIH基因片段．经克隆、表达与纯化，得到不同的突变酶蛋白．酶活性测定、荧光光谱与CD谱分析表明，随着C-末端缺失残基的增多，酶活性丧失也越来越多，但酶分子的聚合状态未发生变化；当CIH的C末端2个Lys替代为2个Glu时，酶活性及分子结构变化均不明显，但当替代为2个Leu时，酶活性丧失殆尽，分子结构变得松散而不再保持寡聚态．pH及热稳定性实验也表明。酶的稳定性与其分子的完整性密切相关．结果证实，CIH的C末端电荷残基对该酶活性与分子状态具有重要作用．
关键词
环
酰亚胺
水解酶
C-末端区
带电荷氨基酸
分子构象
稳定性
Keywords
cyclic imide hydrolase
C-terminal region
charge residue
molecular conformation
stability
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
假单胞菌YZ-26来源环酰亚胺水解酶中半胱氨酸残基的反应性及功能
3
作者
钮利喜
刘晓琴
石亚伟
机构
山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期776-782,共7页
基金
山西省回国留学人员科研资助项目(201007)~~
文摘
【目的】研究环酰亚胺水解酶(Imidase,CIH)中的两个半胱氨酸残基的反应性及功能。【方法】设计了3个半胱氨酸突变酶:CIH7,108、CIH7、CIH108。将天然酶以及突变酶基因分别与麦芽糖结合蛋白(MBP)基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行融合表达,融合蛋白经纯化后得到了电泳纯的样品。使用5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)对天然酶CIH的巯基基团进行修饰,并分析了DTT对分子状态的影响。进一步研究了经H2O2处理后CIH及其突变酶的锌离子结合能力及分子状态。【结果】酶活测定表明CIH7,108和CIH7的活力基本丧失,而CIH108仍保持了72%的酶活性。CIH中的两个半胱氨酸残基以游离形式存在,不形成链内或链间二硫键。CIH与CIH108为四聚体结构且具有一定的锌离子结合能力,CIH7,108为多聚体,CIH7为单体及多体的混合物且都不具备锌离子结合能力,随着H2O2浓度的增加,CIH中的链内二硫键及CIH108中的链间二硫键逐渐增加。【结论】说明Cys7是结合锌离子和稳定CIH分子结构的必要残基。
关键词
环
酰亚胺
水解酶
半胱氨酸
反应性
功能
Keywords
imidase
cysteine
reactivity
function
分类号
TQ925 [轻工技术与工程—发酵工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
突变型环酰亚胺水解酶的底物专一性研究
陈云霞
钮利喜
袁静明
石亚伟
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
下载PDF
职称材料
2
环酰亚胺水解酶C末端区为该酶活性所必需
石亚伟
陈云霞
崔丽方
袁静明
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
下载PDF
职称材料
3
假单胞菌YZ-26来源环酰亚胺水解酶中半胱氨酸残基的反应性及功能
钮利喜
刘晓琴
石亚伟
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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