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circARF3下调miR-195减轻TNF-α诱导的ATDC5软骨细胞炎症损伤
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作者 吴焘 张国秋 +1 位作者 李超 张兰涛 《现代免疫学》 CAS 2024年第3期206-213,220,共9页
为探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)ADP核糖基化因子3(ADP ribosylation factor 3,ARF3)调节miR-195对TNF-α诱导的ATDC5软骨细胞炎症损伤的影响,将ATDC5细胞分为对照组(control,Cont)、TNF-α组、pCMV-BC组、pCMV-ARF3-NC组、pCMV-A... 为探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)ADP核糖基化因子3(ADP ribosylation factor 3,ARF3)调节miR-195对TNF-α诱导的ATDC5软骨细胞炎症损伤的影响,将ATDC5细胞分为对照组(control,Cont)、TNF-α组、pCMV-BC组、pCMV-ARF3-NC组、pCMV-ARF3组、inhibitor-NC组、miR-195a inhibitor组、miR-195b inhibitor组、pCMV-ARF3+mimics-NC组、pCMV-ARF3+miR-195a mimics组和pCMV-ARF3+miR-195b mimics组。qRT-PCR检测各组ATDC5细胞中ARF3的mRNA及miR-195a/b相对表达量;FACS检测ATDC5细胞的凋亡水平;ELISA检测细胞培养上清液中细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)、IL-1β、IL-6和环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)水平;RNA pull-down和双荧光素酶报告基因实验验证circARF3与miR-195a、miR-195b的结合情况;Western blotting检测Ⅱ型胶原(collagenⅡ,COL2)、蛋白聚糖Aggrecan、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP13)、MMP1、剪切caspase 3(cleaved caspase 3,cl-caspase-3)和cl-caspase-9蛋白表达量。结果显示,与Cont组相比,TNF-α组ATDC5细胞ARF3 mRNA、COL2和Aggrecan蛋白表达量显著降低(均P<0.05),而miR-195a、miR-195b相对表达量、cl-caspase-3、cl-caspase-9、MMP13和MMP1蛋白表达量、ATDC5细胞凋亡率及上清液中COX-2、IL-6、IL-1β和ICAM-1水平显著升高(均P<0.05)。过表达ARF3或低表达miR-195a、miR-195b可抑制ATDC5细胞凋亡、炎性因子释放及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解。circARF3可结合并靶向下调miR-195a和miR-195b表达。过表达miR-195a或miR-195b可部分逆转高表达ARF3对ATDC5细胞凋亡、炎症应答和ECM降解的抑制效应。由此,circARF3或作为竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)吸附miR-195a和miR-195b,过表达ARF3可通过下调miR-195a和miR-195b表达抑制TNF-α诱导的ATDC5细胞凋亡、炎症应答和ECM降解。 展开更多
关键词 环状核糖核酸腺苷二磷酸核糖基化因子3 微小核糖核酸195 肿瘤坏死因子α ATDC5细胞 凋亡 炎症
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