副溶血弧菌LAMP检测方法的建立 被引量：71

1

作者 徐芊 孙晓红 +1 位作者 赵勇 潘迎捷 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期66-72,共7页

副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是一种能引起食源性疾病的重要病原菌。首次将一种新颖的核酸扩增技术-环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素... 副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是一种能引起食源性疾病的重要病原菌。首次将一种新颖的核酸扩增技术-环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因(tlh)设计4条特异性引物(两条内引物和两条外引物)进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化,最佳反应时间为60min,反应温度为60℃。对12种细菌共28株菌进行LAMP扩增,仅14株副溶血弧菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性。副溶血弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为90fg和24cfu/ml。对模拟食品样品进行直接检测,检测限为89cfu/g。结果表明,该方法检测副溶血弧菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低,1小时即可完成,有望发展成为快速检测副溶血弧菌的有效手段。 展开更多

关键词 副溶血弧菌 环介导等温扩增技术(lamp) 不耐热溶血毒素基因(tlh) 检测

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DNA环介导恒温扩增技术速检测结核分枝杆菌的研究 被引量：20

2

作者 黄帆 李琳 +3 位作者 林世平 梅国华 山崎伸二 石磊 《现代食品科技》 EI CAS 2008年第8期835-838,共4页

DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术,其检测结果可以通过加入核酸燃料SYBR GreenⅠ进行肉眼观察,也可以通过琼脂糖凝胶电泳进行观察。本文以结核分支杆菌(M.... DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术,其检测结果可以通过加入核酸燃料SYBR GreenⅠ进行肉眼观察,也可以通过琼脂糖凝胶电泳进行观察。本文以结核分支杆菌(M.TB)作为研究对象,设计了4种LAMP引物以特异地识别结核分支杆菌中gyrB基因的六个特殊区域,着重于利用LAMP技术在几种常见的致病分支杆菌中能快速、特异地检测出结核分支杆菌。实验结果表明,LAMP技术能在恒温(63℃)条件下,1h内检测出结核分枝杆菌,分别对7株非结核分枝杆菌进行检测,只有一株偶发分支杆菌得到了阳性的结果。说明该技术有望应用于畜牧业中肉制品或乳制品中结核分支杆菌的检测。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术(lamp) 结核分枝杆菌 检测

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可视化的RT-LAMP方法检测禽白血病病毒 被引量：13

3

作者 刘业兵 张磊 +3 位作者 孙跃辉 毛娅卿 李俊平 宁宜宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期150-156,共7页

本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异... 本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异性和敏感性,并对加入SYBR GreenⅠ肉眼判定与仪器监测结果进行比对。结果表明:建立的RT-LAMP方法在63℃水浴中36min可对ALV核酸进行高效扩增,在反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼判断结果与Real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有很强特异性,对其它相关鸡病病原检测结果均为阴性;其检出限量为14.2pg.μL-1,显示出很高的敏感性;用建立的LAMP方法对24个样品进行检测,结果表明LAMP法与其原检测结果基本一致;本研究建立了可对ALV进行快速检测并可肉眼判定结果的可视化RT-LAMP方法,其操作简便、无需昂贵设备,适用于ALV的快速检测。 展开更多

关键词 禽白血病病毒 环介导等温扩增技术(lamp) 检测

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环介导等温扩增技术在食品安全检测领域的应用研究进展 被引量：13

4

作者 范安妮 佘之蕴 +2 位作者 张娟 周臣清 梁宇斌 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期330-334,共5页

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年发展起来的一种新型核酸检测技术。其采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行核酸扩增,与传统核酸检测技术(PC... 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年发展起来的一种新型核酸检测技术。其采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行核酸扩增,与传统核酸检测技术(PCR法、实时荧光定量PCR法)相比,具有操作简单、特异性强、灵敏度高、可肉眼判读结果等优点。核酸检测是食品安全检测技术的一个重要手段,本文综述了LAMP技术在食品微生物检测、转基因成分检测、过敏原成分检测和动物源性成分检测领域的应用研究进展,探讨了LAMP技术在食品检测领域的发展前景,以期为食品快速、高通量检测技术建立提供参考。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术(lamp) 食品安全 检测 核酸扩增

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环介导等温扩增技术检测含有CaMV35S的转基因玉米 被引量：13

5

作者 陈金松 黄丛林 +1 位作者 张秀海 吴忠义 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期8-14,共7页

DNA环介导等温扩增技术是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术。针对玉米表达载体的花椰菜花叶病毒35 S启动子(CaMV35S)的6个区域设计4种特异引物,对LAMP反应的MgSO4、dNTPs、Betaine、内引物、外引物各个成分进行了优化,此外还对L... DNA环介导等温扩增技术是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术。针对玉米表达载体的花椰菜花叶病毒35 S启动子(CaMV35S)的6个区域设计4种特异引物,对LAMP反应的MgSO4、dNTPs、Betaine、内引物、外引物各个成分进行了优化,此外还对LAMP和PCR两种不同方法的特异性进行了比较。建立转基因玉米花椰菜花叶病毒35 S启动子环介导等温扩增技术检测方法,LAMP与PCR相比具有更高的灵敏度。环介导等温扩增技术检测方法具有时间少,成本低,特异性高,检测方法多样等优势,为检测转基因玉米花椰菜花叶病毒35 S启动子提供了一种更加简便快速的方法。 展开更多

关键词 转基因玉米 环介导等温扩增技术(lamp) 检测方法

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环介导等温扩增技术检测食品中铜绿假单胞菌 被引量：11

6

作者 刘伟 侯丽萍 +3 位作者 赵良娟 曲鹏 郑文杰 张宏伟 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2012年第5期140-142,共3页

建立食品中铜绿假单胞菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法。利用铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)基因序列,设计3对铜绿假单胞菌LAMP检测特异性引物,用36株铜绿假单胞菌,14株近源菌验证方法的特异性。建立的LAMP方法特异性好,灵敏度达到2.2 cfu/10... 建立食品中铜绿假单胞菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法。利用铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)基因序列,设计3对铜绿假单胞菌LAMP检测特异性引物,用36株铜绿假单胞菌,14株近源菌验证方法的特异性。建立的LAMP方法特异性好,灵敏度达到2.2 cfu/100 g^3.5 cfu/100 g。建立的食品中铜绿假单胞菌LAMP检测方法特异性好,灵敏度高,适用于的检测食品中的铜绿假单胞菌。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 PEA基因 环介导等温扩增技术(lamp) 食品

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可视化LAMP快速检测猪伪狂犬病毒 被引量：10

7

作者 王树芬 王德国 +3 位作者 薛白 李学伍 赵东 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第6期140-143,共4页

为快速检测猪伪狂犬病毒(PRV),利用PRV DBP基因上的一段序列设计并合成3对LAMP引物,采用一种新的荧光染料——罗丹明B衍生物作指示剂,该指示剂在反应前加到反应缓冲液里,通过优化反应条件,建立了可视化LAMP快速检测PRV的方法。结果表明... 为快速检测猪伪狂犬病毒(PRV),利用PRV DBP基因上的一段序列设计并合成3对LAMP引物,采用一种新的荧光染料——罗丹明B衍生物作指示剂,该指示剂在反应前加到反应缓冲液里,通过优化反应条件,建立了可视化LAMP快速检测PRV的方法。结果表明,63℃下恒温反应40min可得到肉眼可视结果,颜色变成蓝色判定为阳性,仍然保持紫色判定为阴性,可视化LAMP结果与电泳结果一致。建立的可视化LAMP方法可以快速、直观、准确地检测PRV。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒(PRV) 环介导等温扩增技术(lamp) 罗丹明B衍生物指示剂

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霍乱弧菌环介导等温扩增LAMP技术检测 被引量：9

8

作者 匡燕云 叶卫翔 +5 位作者 吕敬章 范放 朱海 赵芳 洪小柳 黄李华 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1310-1312,共3页

目的应用环介导等温扩增技术(LAMP)进行霍乱弧菌的快速检测。方法针对霍乱弧菌的管家基因(mdh)设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),建立快速检测食品中霍乱弧菌的环介导等温扩增方法;应用该方法对17种细菌共42株菌进行LAMP扩增,... 目的应用环介导等温扩增技术(LAMP)进行霍乱弧菌的快速检测。方法针对霍乱弧菌的管家基因(mdh)设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),建立快速检测食品中霍乱弧菌的环介导等温扩增方法;应用该方法对17种细菌共42株菌进行LAMP扩增,并进行确证,全面评估该方法的灵敏度、特异性、准确性等。结果该方法检测21株霍乱弧菌均得到阳性扩增结果,其余21株非霍乱弧菌均未扩增出条带,扩增反应最佳反应时间为60m in,反应温度为65℃。霍乱弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为40 fg和50 cfu/mL。对模拟食品样品进行直接检测,检测限为70 cfu/g。结论该方法具有特异性强、灵敏度高,操作简便快速、不需要复杂仪器设备。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 环介导等温扩增技术(lamp) 管家基因(mdh)

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鼠疫耶尔森氏菌环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：9

9

作者 魏东 汪洁英 王国治 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2012年第9期2074-2077,共4页

目的:将环介导等温扩增技术(LAMP)应用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌F1基因设计特异性引物,进行LAMP扩增。应用LAMP技术对鼠疫菌和非鼠疫菌进行检测以确定其特异性;对倍比稀释鼠疫菌液进行检测以确定其灵敏度,... 目的:将环介导等温扩增技术(LAMP)应用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌F1基因设计特异性引物,进行LAMP扩增。应用LAMP技术对鼠疫菌和非鼠疫菌进行检测以确定其特异性;对倍比稀释鼠疫菌液进行检测以确定其灵敏度,并与常规PCR方法进行比较。结果:对10种非鼠疫菌进行LAMP扩增,均为阴性结果,证明该方法具有很高的特异性。LAMP方法最低检出量为20个鼠疫菌,比常规PCR方法的灵敏度高10倍。通过加入染料进行LAMP扩增可直接观察结果。结论:本方法检测鼠疫耶尔森氏菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、结果易于判定,有望发展成为快速检测鼠疫耶尔森氏菌的有效手段。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 环介导等温扩增技术(lamp) F1基因 检测

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌LAMP方法的建立 被引量：8

10

作者 刘亚娟 聂福平 +9 位作者 杨俊 王昱 石宝石 保雨 叶自霞 王国民 李贤良 李应国 肖进文 刘力 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期200-205,共6页

为建立快速检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）的鉴别方法，衣研究根据APP ApxIVA基因的保守区设计6条环介导等温扩增（LAMP）引物，利用Loopamp Realtime Turbidimeter LA-320c实时浊度仪对反应体系和条件进行优化，建立了APP的LAMP... 为建立快速检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）的鉴别方法，衣研究根据APP ApxIVA基因的保守区设计6条环介导等温扩增（LAMP）引物，利用Loopamp Realtime Turbidimeter LA-320c实时浊度仪对反应体系和条件进行优化，建立了APP的LAMP方法。结果显示：该方法在64℃下反应15rainDNA即可出现扩增，扩增后2～3min内即可判定结果，最低检测限为0．307ng／L，具有良好的重复性及稳定性，与其他病原菌无交叉反应，同时，试验结果可实现肉眼可视化观察。采用建立的LAMP方法与SN／T14472011标准公布的方法同时对36份临床疑似APP样品进行检测分析，结果显示：APP阳性10份，阴性26份，两种方法的符合率为100％。本研究建立的方法为防止猪传染性胸膜肺炎的传播提供了有效的检测手段。 展开更多

关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 环介导等温扩增技术(lamp) ApxIVA基因

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2种鸡免疫抑制性疾病LAMP检测方法的建立 被引量：8

11

作者 夏永恒 杨兵 +4 位作者 张杰 袁蕾磊 孙继国 周宏专 苏霞 《中国动物检疫》 CAS 2009年第5期29-32,共4页

本文借助环介导等温扩增技术(LAMP),建立了两种常见鸡免疫抑制病的(鸡传染性贫血病、J亚群白血病)的快速检测方法。采用简易法提取DNA模板,设计特异性LAMP引物,成功扩增出梯形条带,并且对反应体系进行优化,以及特异性试验和灵敏度试验... 本文借助环介导等温扩增技术(LAMP),建立了两种常见鸡免疫抑制病的(鸡传染性贫血病、J亚群白血病)的快速检测方法。采用简易法提取DNA模板,设计特异性LAMP引物,成功扩增出梯形条带,并且对反应体系进行优化,以及特异性试验和灵敏度试验。结果表明LAMP的灵敏度可达10个拷贝,比PCR灵敏度高10倍;且具有特异性,对其他相关鸡病病原检测结果均为阴性。用建立的LAMP方法对临床样品进行检测,同时与PCR方法比较,结果表明LAMP结果基本与PCR相符,但检测的阳性率要比PCR高。操作简便,无需昂贵设备,适用于临床快速诊断。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 J亚群白血病 环介导等温扩增技术(lamp) 快速检测

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环介导等温扩增技术用于结核病诊断的价值评估 被引量：7

12

作者 林晶晶 夏露 +5 位作者 刘旭晖 魏剑浩 席秀红 黄威 李涛 卢水华 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期104-110,共7页

目的评估环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在诊断结核病中的应用价值。方法以疑似活动性结核患者为研究对象。前瞻性收集患者临床标本,分装后进行荧光涂片显微镜镜检、BACTEC MGIT 960液体培养、MTB Ge... 目的评估环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在诊断结核病中的应用价值。方法以疑似活动性结核患者为研究对象。前瞻性收集患者临床标本,分装后进行荧光涂片显微镜镜检、BACTEC MGIT 960液体培养、MTB GeneXpert(Xpert)和LAMP检测,分析比较这4种检测方法的灵敏度和特异度,同时进行一致性检验。结果研究共入组315例患者,分为痰标本组和非痰标本组,两组分别有175例和80例纳入分析。对于痰标本的检测,以液体培养为诊断标准时,LAMP的灵敏度为78.9%,特异度为82.7%;在有抗结核活性药物暴露史亚组中,LAMP的灵敏度为92.3%,Xpert的灵敏度为88.5%;以临床诊断为诊断标准时,LAMP的灵敏度优于涂片(58.9%vs.46.0%,P<0.05),特异度为98.0%;亚组分析提示在有抗结核活性药物暴露史的患者标本中,LAMP的灵敏度高于其他检测方法。对于非痰标本的检测,同样显示出优于涂片的灵敏度。结论LAMP在结核病的诊断中具有较好的灵敏度和特异度,与Xpert检测结果一致性较高,与培养一致性中等,优于结核菌涂片法。在有抗结核活性药物暴露史的患者中,LAMP有可靠的检出率。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术(lamp) 结核病(TB) 诊断 核酸扩增

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基于单核细胞增生李斯特菌actA基因的环介导等温扩增技术快速检测方法的建立 被引量：6

13

作者 胡仲皓 单兴根 +2 位作者 何晓花 吴金节 胡青海 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期47-52,共6页

单核细胞增生李斯特菌(Lm)是主要的食源性致病菌之一,也是一种重要的人畜共患病原菌,感染人和动物后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多症等。为建立快速检测Lm的方法,本研究以Lm毒力因子actA作为特异性检测的靶基因,通过条件优化... 单核细胞增生李斯特菌(Lm)是主要的食源性致病菌之一,也是一种重要的人畜共患病原菌,感染人和动物后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多症等。为建立快速检测Lm的方法,本研究以Lm毒力因子actA作为特异性检测的靶基因,通过条件优化初步建立了快速检测食源性Lm的环介导等温扩增(LAMP)方法。并采用该方法进行了特异性、敏感性及临床样品检测试验。结果显示,利用建立的LAMP方法检测Lm、肠出血性大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森菌、产气荚膜梭菌、空肠弯曲菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪丹毒丝菌或支气管败血波氏杆菌基因组DNA,除Lm为阳性外,其他病原菌均为阴性,表明该方法的特异性较强;将Lm菌液10倍倍比稀释为4.7×10^(9)cfu/mL~4.7×10^(0)cfu/mL,再采用该LAMP方法和常规PCR方法进行检测,结果显示,LAMP对Lm的检测下限为4.7×10^(1)cfu/mL,而常规PCR对Lm的检测下限为4.7×10^(3)cfu/mL,即LAMP比普通PCR的敏感性高100倍,表明本研究建立的LAMP方法敏感性较高;采用建立的LAMP方法对118份猪肉临床样品进行检测,结果显示有3份样品为阳性,与常规PCR和国标的检测结果均一致。本研究基于Lm actA基因建立了Lm LAMP检测方法,且该方法具有特异性强、敏感性高、结果可视等优点,适用于实验室和基层食品安全监管部门的现场快速检测。 展开更多

关键词 食源性致病菌 单增李斯特菌 环介导等温扩增技术(lamp) actA基因 可视化检测

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环介导等温扩增技术(LAMP)检测人星状病毒方法的建立及其在再生水检测中的应用 被引量：6

14

作者 杨丽 何晓青 +4 位作者 韦玉梅 朱轶 程莉 王子健 黄文 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2011年第6期600-606,共7页

为快速高效地检测人星状病毒,建立了一种新的试验方法——环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification technology,LAMP),并对人星状病毒LAMP反应条件进行了优化。结果表明,镁离子终浓度为4mmol·L-1、甜菜碱终浓度... 为快速高效地检测人星状病毒,建立了一种新的试验方法——环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification technology,LAMP),并对人星状病毒LAMP反应条件进行了优化。结果表明,镁离子终浓度为4mmol·L-1、甜菜碱终浓度为1mol·L-1的25μL体系下65℃反应90min为其最佳反应条件。对扩增终产物进一步进行酶切分析得到的条带大小与预期的结果(84和135bp)吻合,以人星状病毒、轮状病毒及诺如病毒为模板进行特异性测试亦没有发生交叉反应。将人星状病毒质粒等倍稀释后分别用LAMP及聚合酶链式反应(PCR)检测其灵敏度,结果表明,LAMP与PCR的灵敏度分别达到5.04copies·μL-1和50.4copies·μL-1。用改良的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)及逆转录PCR(RT-PCR)检测12个再生水水样,其中人星状病毒检出率为分别为41.7%(5/12)和33.3%(4/12)。以上结果证明,LAMP是一种检测程序简单、灵敏度和特异性较高的检测手段,在人星状病毒的快速检测方面具有一定的开发潜力。 展开更多

关键词 人星状病毒 环介导等温扩增技术(lamp) HNB 焦磷酸镁 再生水

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江苏省13个地区水稻种子携带4种不同恶苗病菌的LAMP检测 被引量：6

15

作者 王晓莉 李哲 +3 位作者 叶文武 杨红福 庄义庆 郑小波 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期846-852,共7页

[目的]水稻种子携带病原菌是水稻恶苗病的重要传播途径。本研究旨在了解当前江苏省栽培水稻品种种子携带恶苗病菌的状况。[方法]采用可分别特异性识别引起水稻恶苗病的藤仓镰孢(Fusarium fujikuroi)、层出镰孢(F.proliferatum)、拟轮枝... [目的]水稻种子携带病原菌是水稻恶苗病的重要传播途径。本研究旨在了解当前江苏省栽培水稻品种种子携带恶苗病菌的状况。[方法]采用可分别特异性识别引起水稻恶苗病的藤仓镰孢(Fusarium fujikuroi)、层出镰孢(F.proliferatum)、拟轮枝镰孢(F.verticilliodes)和F.andiyazi的LAMP检测技术,对江苏省2017年收获的103份水稻种子携带上述4种病原菌的情况进行检测。[结果]在103份稻种样本中,有89份检测出携带水稻恶苗病菌。其中,检出率最高的是藤仓镰孢,为83.5%,层出镰孢、拟轮枝镰孢和F.andiyazi也被检测到,但检出率较低,依次为15.5%、1.9%和1.9%。[结论]江苏省水稻种子携带恶苗病菌是一种普遍现象,藤仓镰孢是江苏水稻恶苗病的优势致病菌种,其次是层出镰孢。种子带菌是上述2种病原菌所致恶苗病的重要初侵染源。 展开更多

关键词 水稻恶苗病 种子带菌检测 环介导等温扩增技术(lamp)

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LAMP快速诊断由拟轮枝镰孢引起的水稻恶苗病 被引量：6

16

作者 曾丹丹 戎振洋 +2 位作者 袁咏天 王晓莉 郑小波 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期286-292,共7页

[目的]水稻恶苗病是为害水稻生长发育的重要病害,在我国的分布非常广泛,经常会造成严重的损失。拟轮枝镰孢是引起水稻恶苗病的重要病原菌,本研究意在建立由拟轮枝镰孢引起的水稻恶苗病的快速诊断技术。[方法]基于环介导等温扩增(loop-me... [目的]水稻恶苗病是为害水稻生长发育的重要病害,在我国的分布非常广泛,经常会造成严重的损失。拟轮枝镰孢是引起水稻恶苗病的重要病原菌,本研究意在建立由拟轮枝镰孢引起的水稻恶苗病的快速诊断技术。[方法]基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以拟轮枝镰孢(Fusarium verticillioides)的3-磷酸甘油酸激酶(3-phosphoglyceric phosphokinase)基因Pgk为靶标,设计筛选LAMP特异性引物。[结果]建立了可直接从水稻恶苗病植株中检测拟轮枝镰孢并诊断由该病原菌引起的水稻恶苗病的LAMP检测技术(FvPgk-LAMP)。该检测技术可以从田间发病的水稻植株中直接对病原菌进行检测,反应条件为62℃、70 min。由于反应前在反应管内加入了羟基萘酚蓝(HNB),反应结束后可对结果进行直接判定,阳性反应呈天蓝色,阴性反应则仍然为紫色。该体系的最低检出限为目标菌纯DNA的100pg·μL^(-1)。应用该技术我们已成功且快速地对来自江苏南京和镇江的水稻恶苗病样本进行了病害诊断。[结论]本研究为拟轮枝镰孢引起的水稻恶苗病的诊断提供了快速且有效的新技术。 展开更多

关键词 水稻恶苗病 拟轮枝镰孢 环介导等温扩增技术(lamp) Pgk基因

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鸭瘟病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立与应用 被引量：6

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作者 张坤 刁有祥 鞠小军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期520-525,共6页

为建立一种简便、快速、灵敏、特异的鸭瘟病毒(DPV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的DPV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,经优化反应体系,建立了LAMP快速检测方法。结果表明,LAMP方法能够在63℃恒温下,1h内实现... 为建立一种简便、快速、灵敏、特异的鸭瘟病毒(DPV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的DPV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,经优化反应体系,建立了LAMP快速检测方法。结果表明,LAMP方法能够在63℃恒温下,1h内实现目的核酸的大量扩增。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBRGreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法敏感性可达0.245μg/L,比普通PCR灵敏性高10倍;对鸭病毒性肝炎病毒、H9N2亚型禽流感病毒、鸭副黏病毒、鸭源偏肺病毒等的核酸无交叉反应;利用建立的LAMP检测方法对40份临床样品的阳性检出率为30%。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确检测DPV的方法。 展开更多

关键词 鸭瘟病毒(DPV) 环介导等温扩增技术(lamp)

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兔斯氏艾美耳球虫环介导等温扩增技术检测方法的建立 被引量：6

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作者 温福利 《实验动物与比较医学》 CAS 2018年第3期176-181,共6页

建立检测兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)环介导等温扩增技术(LAMP)的方法。方法根据E.stiedai的ITS1-5.8s RNA-ITS2基因序列设计特异引物,通过优化反应条件,建立E.stiedai的LAMP检测方法。结果 25μL的反应体系中Bst聚合酶的最优添加量是... 建立检测兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)环介导等温扩增技术(LAMP)的方法。方法根据E.stiedai的ITS1-5.8s RNA-ITS2基因序列设计特异引物,通过优化反应条件,建立E.stiedai的LAMP检测方法。结果 25μL的反应体系中Bst聚合酶的最优添加量是1.5μL,DNA的最优添加量是75 ng,环引物、内引物和外引物的最优浓度依次是0.8μmol/L、1.6μmol/L和0.15μmol/L,在63℃反应1 h后能特异性地扩增目的基因,并且具有较高的灵敏度。结论建立了E.stiedai的LAMP检测方法,为E.stiedai感染的快速检测提供了新思路。 展开更多

关键词 兔斯氏艾美耳球虫 PCR 环介导等温扩增技术(lamp) 敏感性 特异性

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基于环介导等温扩增技术建立非洲猪瘟病毒的快速高灵敏度检测方法

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作者 张朋朋 黄月茹 +6 位作者 牛佳 解秀杰 伍文艳 程晓芳 李岑岑 徐海霞 徐永杰 《信阳师范学院学报（自然科学版）》 CAS 2024年第3期399-404,共6页

非洲猪瘟是严重危害中国养猪业的传染病,为了快速检测非洲猪瘟,采用环介导等温扩增技术(LAMP),根据非洲猪瘟病毒p72基因保守序列设计环介导的等温扩增引物,然后进行引物筛选和反应条件优化。结果显示,优化后的反应体系在45 min时可检测... 非洲猪瘟是严重危害中国养猪业的传染病,为了快速检测非洲猪瘟,采用环介导等温扩增技术(LAMP),根据非洲猪瘟病毒p72基因保守序列设计环介导的等温扩增引物,然后进行引物筛选和反应条件优化。结果显示,优化后的反应体系在45 min时可检测低至1 copy/μL的非洲猪瘟病毒,不与其他病毒核酸样品产生交叉反应,可以裸眼判断检测结果,具有很好的灵敏性和特异性。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 环介导等温扩增技术(lamp) 快速检测

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EMA-LAMP方法快速检测食源性副溶血性弧菌活细胞 被引量：6

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作者 张毅 王爱华 王贵春 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第10期290-292,共3页

将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(EMA)与环介导等温扩增技术(LAMP)相结合,建立一种能快速检测食品中食源性副溶血性弧菌活细胞的新方法。结果表明,EMA-LAMP方法最低检测限为1×10 CFU/mL,PCR方法最低检测限为1×103CFU/mL。与PCR方... 将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(EMA)与环介导等温扩增技术(LAMP)相结合,建立一种能快速检测食品中食源性副溶血性弧菌活细胞的新方法。结果表明,EMA-LAMP方法最低检测限为1×10 CFU/mL,PCR方法最低检测限为1×103CFU/mL。与PCR方法相比较,EMA-LAMP检测方法具有快速、灵敏度高、操作简便等优点,并能检测鉴定副溶血性弧菌病原活细胞。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术(lamp) 叠氮溴化乙锭(EMA) 副溶血性弧菌 活细胞

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