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环介导恒温扩增技术快速检测溶藻弧菌 被引量：18
1
作者 丁文超 胡健饶 +2 位作者 史雨红 李明云 陈炯 《分子细胞生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第1期70-76,共7页
溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,其快速检测具有重要意义。根据溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因序列,设计一套引物,通过条件优化,成功建立了针对致病性溶藻弧菌的环介导恒温扩增检测技术(loop-mediated isothermal ampli... 溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,其快速检测具有重要意义。根据溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因序列,设计一套引物,通过条件优化,成功建立了针对致病性溶藻弧菌的环介导恒温扩增检测技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。应用LAMP技术,在65℃温育1h的条件下扩增溶藻弧菌基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带。该研究建立的LAMP法特异性检出致病性溶藻弧菌,其检测下限比PCR法低一个数量级,相当于n(cell)=38/mL的菌液浓度,灵敏度更高。综合分析表明,LAMP技术是快速、简易、实地诊断溶藻弧菌的理想工具。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 OmpK基因 环介导恒温基因扩增检测法
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鱼类致病鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)的LAMP检测技术建立与应用 被引量：18
2
作者 王国良 刘璐 徐益军 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期27-31,共5页
针对鰤鱼诺卡氏菌16S—23SrRNA基因内转录间隔序列,设计了四条LAMP引物,在外内引物浓度比1:8、dNTP浓度0.8—1.2mmol/L、Mg2+浓度10—14mmol/L、反应温度60—65℃、反应时间60min的优化条件下,扩增产物经电泳后呈现特异性的LAMP梯形条带... 针对鰤鱼诺卡氏菌16S—23SrRNA基因内转录间隔序列,设计了四条LAMP引物,在外内引物浓度比1:8、dNTP浓度0.8—1.2mmol/L、Mg2+浓度10—14mmol/L、反应温度60—65℃、反应时间60min的优化条件下,扩增产物经电泳后呈现特异性的LAMP梯形条带,建立的LAMP法具有高灵敏度,达到10-7μg/μlDNA浓度,比常规PCR方法高100倍。将该方法应用于取自养殖场的乌鳢、大黄鱼、黄姑鱼组织样品检测,结果在16份组织样品中有7份检出自然感染的鰤鱼诺卡氏菌,与同步取样品鱼组织的细菌分离、培养检查结果相一致,并显示既能检测发病鱼,又能检出未发病且已感染的病鱼。分析表明,这是一种能快速、简易、特异、敏感的检测鱼类致病鰤鱼诺卡氏菌的诊断方法。 展开更多
关键词 鰤鱼诺卡氏菌 16S-23S RRNA基因 环介导恒温基因扩增检测法
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刺激隐核虫LAMP检测方法的建立 被引量：7
3
作者 王国良 周旻曦 徐益军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期574-577,共4页
为提高大黄鱼刺激隐核虫病的病原体检出率,本研究针对刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)18S-ITS2基因序列设计4条LAMP引物,在内外引物浓度比2∶1～6∶1、Mg2+浓度2 mmol/L、反应温度61℃～66℃、反应时间60 min的优化条件下,扩增产物... 为提高大黄鱼刺激隐核虫病的病原体检出率,本研究针对刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)18S-ITS2基因序列设计4条LAMP引物,在内外引物浓度比2∶1～6∶1、Mg2+浓度2 mmol/L、反应温度61℃～66℃、反应时间60 min的优化条件下,扩增产物经电泳后呈现特异性的LAMP梯形条带。本研究建立的LAMP方法具有高灵敏度(10-7ng/μL DNA浓度),比常规PCR方法高100倍。将该方法应用于采集自不同地域的虫体样本、病鱼和水样以及不同组织样品的检测,结果在13份样品中有10份检出阳性,并显示该方法既能够检测发病鱼,也能够检出已感染但未发病的鱼。实验表明,该方法是一种能够快速、简易、特异、敏感地检测海水鱼类刺激隐核虫病的病原学检测方法。 展开更多
关键词 刺激隐核虫 18S-ITS2基因序列 环介导恒温基因扩增检测法
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