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玉米细菌性枯萎病菌16S rDNA基因克隆及TaqMan探针实时荧光PCR 被引量:14
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作者 漆艳香 肖启明 朱水芳 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期183-187,共5页
为给农业和植物检疫部门提供一种特异性强、灵敏度高,可以快速、直接检测植物病原菌的方法,将玉米细菌性枯萎病菌16SrDNA基因克隆测序,根据该细菌与其他细菌菌株16SrDNA序列差异,设计出对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定点突变的特异性探针... 为给农业和植物检疫部门提供一种特异性强、灵敏度高,可以快速、直接检测植物病原菌的方法,将玉米细菌性枯萎病菌16SrDNA基因克隆测序,根据该细菌与其他细菌菌株16SrDNA序列差异,设计出对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定点突变的特异性探针,除泛菌属3个种和欧氏菌属3个种外,还对假单胞菌属1个种,黄单胞菌属1个种,棒形杆菌属1个种,短小杆菌属1个种以及5种植原体进行了实时荧光PCR检测.结果表明:只有玉米细菌性枯萎病菌产生荧光,其他细菌和植原体都没有荧光产生.检测的灵敏度为104CFU/mL的菌悬浮液,相当于4个细菌细胞的基因,灵敏度高,也就是说,反应体系中只要有2个活细菌,实时荧光PCR就能检测到.相对灵敏度为107CFU/mL,而且整个检测过程只需2h,由于实验采用独特全封闭反应管及光电传导系统,不用凝胶电泳,降低了污染. 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 16S RDNA TAQMAN探针
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利用巢式PCR检测玉米细菌性枯萎病菌 被引量:13
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作者 王茂华 胡白石 +3 位作者 卢玲 刘凤权 许志刚 陈建东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期37-40,共4页
利用通用引物扩增了玉米细菌性枯萎病菌及其近似种的转录间隔区并进行了序列测定。通过序列比较,设计了一对玉米细菌性枯萎病菌的专化性引物,并对所有参试菌株进行扩增。结果显示:该对引物能从参试的玉米细菌性枯萎病菌中特异性地扩增出... 利用通用引物扩增了玉米细菌性枯萎病菌及其近似种的转录间隔区并进行了序列测定。通过序列比较,设计了一对玉米细菌性枯萎病菌的专化性引物,并对所有参试菌株进行扩增。结果显示:该对引物能从参试的玉米细菌性枯萎病菌中特异性地扩增出1条299bp的条带,而其他参试菌株没有扩增信号。与扩增细菌ITS区域的通用引物结合使用,建立了检测和鉴定玉米细菌性枯萎病菌的巢式PCR技术,其检测灵敏度可达到4个细菌细胞,可以准确、灵敏地检测和鉴定玉米细菌性枯萎病菌。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 巢式PCR 检测
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16S nested-PCR技术检测玉米细菌性枯萎病菌(英文) 被引量:10
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作者 吴琼 陈枝楠 +1 位作者 范怀忠 金显忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期420-427,共8页
玉米细菌性枯萎病是玉米上的重要种传病害,病原菌为Pantoea stewartiisubsp.stewartii。本研究设计了16S通用引物,扩增该病菌及其近似种的16S rDNA,通过序列测定和分析,针对该病菌设计了特异性引物,采用nested-PCR技术,能够准确地区别... 玉米细菌性枯萎病是玉米上的重要种传病害,病原菌为Pantoea stewartiisubsp.stewartii。本研究设计了16S通用引物,扩增该病菌及其近似种的16S rDNA,通过序列测定和分析,针对该病菌设计了特异性引物,采用nested-PCR技术,能够准确地区别该病菌及其近似种,检测的灵敏度在DNA水平上达到10-3pg级,检测活菌则达到2 cfu。检测人工污染的玉米种子时,不受种子提取液中其它物质的干扰,灵敏度依然达到2 cfu。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 16S RDNA 检测 巢式PCR
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玉米细菌性枯萎病菌改良Dot-ELISA检测研究 被引量:10
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作者 王岭 田世民 +5 位作者 高海霞 邹明强 蒋继志 崔霞 胡秀丽 陈立本 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期230-234,共5页
通过激光切割技术加工出硝酸纤维素膜小圆片并粘贴在已打孔的塑料胶条上,制成包含8个圆片的NCM条(NCM test strip),进一步在NCM条上建立了玉米细菌性枯萎病菌的Dot-ELISA检测方法。研究发现,在NCM圆片上的Dot-ELISA检测灵敏度与点样量... 通过激光切割技术加工出硝酸纤维素膜小圆片并粘贴在已打孔的塑料胶条上,制成包含8个圆片的NCM条(NCM test strip),进一步在NCM条上建立了玉米细菌性枯萎病菌的Dot-ELISA检测方法。研究发现,在NCM圆片上的Dot-ELISA检测灵敏度与点样量密切相关,采用10μL/点的加样量比通常的1μL/点可提高检测灵敏度10-100倍;间接Dot-ELISA的检测灵敏度是双抗夹心dot-ELISA的10倍,该结果进一步在微孔板ELISA的检测中得到证实。玉米细菌性枯萎病菌的改良Dot-ELISA检测是一种较为灵敏、快速、稳定、规范的实验方法,为进一步研究该病菌的微流控芯片斑点免疫检测方法奠定了前期工作基础。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 Dot—ELISA NCM条 检测
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胶体金免疫层析试纸条快速检测玉米细菌性枯萎病菌 被引量:9
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作者 齐玲玲 金涌 +4 位作者 邹明强 梁赤周 田世民 陈艳 李卫华 《检验检疫科学》 2010年第1期1-4,20,共5页
本文采用胶体金免疫层析技术成功建立了玉米细菌性枯萎病菌试纸条快速检测法。条件优化后的试纸条用于玉米细菌性枯萎病菌的检测,方法的检测限为106cfu/mL,其灵敏度与双抗夹心ELISA检测方法相当;交叉试验结果表明,该试纸条对玉米细菌性... 本文采用胶体金免疫层析技术成功建立了玉米细菌性枯萎病菌试纸条快速检测法。条件优化后的试纸条用于玉米细菌性枯萎病菌的检测,方法的检测限为106cfu/mL,其灵敏度与双抗夹心ELISA检测方法相当;交叉试验结果表明,该试纸条对玉米细菌性枯萎病菌有良好的特异性。本方法可作为玉米细菌性枯萎病菌日常监测的现场筛查手段,具有简便、快速、成本低廉、便于普及等优点,对保障我国农产品安全具有重要的现实意义。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 免疫层析技术 胶体金 ELISA 灵敏度 特异
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玉米细菌性枯萎病菌PCR检测 被引量:8
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作者 王赢 周国梁 +3 位作者 印丽萍 袁平 王文兵 易建平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期368-376,共9页
根据GenBank中玉米细菌性枯萎病菌及其近似种的16S序列差异,设计了一对玉米细菌性枯萎病菌特异性引物Ps2r/Ps3r,该引物能从供试的7株玉米细菌性枯萎病菌中特异性扩增出一条268 bp的预期条带,供试的32株近似种菌株都没有扩增产物;与国内... 根据GenBank中玉米细菌性枯萎病菌及其近似种的16S序列差异,设计了一对玉米细菌性枯萎病菌特异性引物Ps2r/Ps3r,该引物能从供试的7株玉米细菌性枯萎病菌中特异性扩增出一条268 bp的预期条带,供试的32株近似种菌株都没有扩增产物;与国内外文献报道的其它5对特异性引物相比,除引物PSA/PSB外,引物DEP1/DEP2、ES16/ESIG2c、HRP1d/HRP3c和CPSL1/CPSR2c在不同程度上对部分近似种菌株出现了扩增。试验结果表明,引物Ps2r/Ps3r和PSA/PSB能特异性扩增玉米细菌性枯萎病菌,得到预期的扩增产物。对不同系列稀释度的DNA和玉米样品中病菌的检测结果表明,由引物Ps1/Ps4和Ps2r/Ps3r组合的巢式PCR方法的检测灵敏度高于引物ITSA/ITSB和PSA/PSB组合的巢式PCR方法,也高于Bio-PCR检测方法;前者可以检测到玉米种子中300 cfu/sample的目的细菌,该检测方法在进境玉米种子样品玉米细菌性枯萎病菌的检疫中具有比较理想的应有潜力和推广价值。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 PCR 检测
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利用PCR技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii) 被引量:6
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作者 吴兴海 杨伟克 +4 位作者 邓明俊 陈长法 邵秀玲 梁成珠 封立平 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第5期88-91,共4页
根据玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartiisubsp.stewartii)ITS基因序列,设计并合成了特异性PCR检测引物,对玉米细菌性枯萎病菌和非玉米细菌性枯萎病菌的标准菌株进行了PCR扩增反应.结果显示,玉米细菌性枯萎病菌的PCR产物出现301 bp的... 根据玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartiisubsp.stewartii)ITS基因序列,设计并合成了特异性PCR检测引物,对玉米细菌性枯萎病菌和非玉米细菌性枯萎病菌的标准菌株进行了PCR扩增反应.结果显示,玉米细菌性枯萎病菌的PCR产物出现301 bp的特异性扩增条带,而非玉米细菌性枯萎病菌均未出现扩增条带;其PCR检测的灵敏度为612 pg/μL.因此PCR技术是一种特异、灵敏、快速检测玉米细菌性枯萎病菌的方法. 展开更多
关键词 PCR 玉米细菌性枯萎病 检测
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玉米细菌性枯萎病菌实时荧光PCR检测方法的建立
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作者 丁钿 牟桂萍 +4 位作者 魏霜 李献锋 林晓红 章柱 易建平 《植物检疫》 2024年第2期32-37,共6页
玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp. stewartii,Pss)是我国进境植物检疫性有害生物。根据Pss与其近似种序列差异,设计特异性引物PS3F/PS3R和探针PS-3P,建立Pss实时荧光PCR检测方法。测试结果显示,供试的6株Pss菌株均有阳性扩... 玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp. stewartii,Pss)是我国进境植物检疫性有害生物。根据Pss与其近似种序列差异,设计特异性引物PS3F/PS3R和探针PS-3P,建立Pss实时荧光PCR检测方法。测试结果显示,供试的6株Pss菌株均有阳性扩增,其他74株供试菌株和空白对照均为阴性扩增,菌体DNA的检测低限为13 fg;对模拟带菌玉米种子进行实时荧光PCR检测并建立标准曲线,R2=0.998 8,线性关系良好。本文建立的实时荧光PCR检测方法可为口岸检疫提供一种准确快速检测方法。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 实时荧光PCR 检测
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玉米细菌性枯萎病菌LAMP检测方法的建立 被引量:6
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作者 袁钧 高文娜 +1 位作者 汪万春 廖晓兰 《植物检疫》 北大核心 2013年第5期61-65,共5页
利用玉米细菌性枯萎病菌基因组DNA特有的保守区域设计LAMP(loop-mediated isothermal amplification)引物,通过优化其反应条件,建立了玉米细菌性枯萎病菌的LAMP检测体系。以多种参比菌DNA为模板对LAMP检测体系的特异性进行了验证,利用... 利用玉米细菌性枯萎病菌基因组DNA特有的保守区域设计LAMP(loop-mediated isothermal amplification)引物,通过优化其反应条件,建立了玉米细菌性枯萎病菌的LAMP检测体系。以多种参比菌DNA为模板对LAMP检测体系的特异性进行了验证,利用玉米细菌性枯萎病菌DNA溶液和菌液梯度稀释液对LAMP检测体系的灵敏度进行了验证。在特异性测试中,LAMP检测体系仅对玉米细菌性枯萎病菌进行扩增,对非靶标菌不产生扩增。LAMP检测体系DNA和菌体检测灵敏度分别达到了0.858×10-4ng/uL和45 CFU/mL。为玉米细菌性枯萎病菌的检测提供了一种新的、简便的、快速的检测手段。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 环介导等温扩增 检测
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玉米细菌性枯萎病菌的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 被引量:5
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作者 封立平 倪新 +3 位作者 吴兴海 伦才智 吴翠萍 栾晶 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期347-352,共6页
为了提高口岸和基层实验室检疫和监测玉米细菌性枯萎病菌的准确性和工作效率,利用环介导恒温扩增技术(LAMP),根据内切葡聚糖酶(EGase)基因前导序列,设计2个内引物和2个外引物,对玉米细菌性枯萎病菌进行快速检测。结果表明,使用玉米细菌... 为了提高口岸和基层实验室检疫和监测玉米细菌性枯萎病菌的准确性和工作效率,利用环介导恒温扩增技术(LAMP),根据内切葡聚糖酶(EGase)基因前导序列,设计2个内引物和2个外引物,对玉米细菌性枯萎病菌进行快速检测。结果表明,使用玉米细菌性枯萎病菌的近缘种或引致相似症状的病原菌菊欧文氏菌玉米致病变种Erwinia chrysanthemi pv.zeae、玉米内州萎蔫病菌Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis、燕麦假单胞菌Pseudomonas avenae、杓兰欧文氏菌Erwinia cypripedii检测其特异性,仅玉米细菌性枯萎病菌有扩增。LAMP检测灵敏度达到2 pg DNA,为普通PCR的100倍;与其它检测方法相比,LAMP方法检测时间短,效率高,不仅降低了设备投入,易于操作,而且具有较高的灵敏度和特异性,适合玉米细菌性枯萎病菌的现场检疫和大规模检测。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 内切葡聚糖酶 环介导恒温扩增 检测
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PCR-DHPLC技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌 被引量:3
11
作者 朱金国 莫瑾 +4 位作者 彭梓 朱水芳 赵文军 刘红霞 钟文英 《植物检疫》 北大核心 2009年第5期15-18,共4页
本研究成功建立了玉米细菌性枯萎病菌的PCR检测方法。该方法根据细菌ITS序列的特异性,设计了对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变的特异性引物及探针,并对5株玉米细菌性枯萎病菌及18种植物原性细菌的DNA进行了PCR、实时荧光PCR及PCR... 本研究成功建立了玉米细菌性枯萎病菌的PCR检测方法。该方法根据细菌ITS序列的特异性,设计了对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变的特异性引物及探针,并对5株玉米细菌性枯萎病菌及18种植物原性细菌的DNA进行了PCR、实时荧光PCR及PCR结合变性高效液相色谱技术(PCR-DH-PLC)检测。结果表明,几种方法特异性强,检测灵敏度均为菌液浓度102cfu/mL,PCR-DHPLC技术具有检测成本较低、高通量、自动化程度高、污染风险小及鉴定结果准确等特点,能够满足快速、准确诊断玉米细菌性枯萎病菌的要求。 展开更多
关键词 PCR 实时荧光PCR PCR-DHPLC 玉米细菌性枯萎病
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玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病的酶联免疫—实时荧光PCR检测 被引量:3
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作者 陈曦 张明哲 +4 位作者 林晓佳 吴志毅 陈吴健 吴蓉 夏拯 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期1273-1277,共5页
针对玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病这两种检疫性病菌进行酶联免疫—实时荧光PCR检测研究,对该方法进行了特异性、灵敏度以及实际样品模拟试验。结果表明,该方法具有较好的特异性,检测低限在100~200 cfu·m^L-1,同时可用于实际... 针对玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病这两种检疫性病菌进行酶联免疫—实时荧光PCR检测研究,对该方法进行了特异性、灵敏度以及实际样品模拟试验。结果表明,该方法具有较好的特异性,检测低限在100~200 cfu·m^L-1,同时可用于实际样品的检测鉴定。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 玉米内州萎焉 酶联免疫—实时荧光PCR
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玉米细菌性枯萎病菌荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立与应用 被引量:3
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作者 单长林 周圆 李孝军 《广东农业科学》 CAS 2021年第1期111-118,共8页
【目的】建立一种快速、灵敏、特异的玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewarii)重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)检测方法。【方法】以玉米细菌性枯萎病菌pstS-glmS基因序列作为靶标序列,设计、... 【目的】建立一种快速、灵敏、特异的玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewarii)重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)检测方法。【方法】以玉米细菌性枯萎病菌pstS-glmS基因序列作为靶标序列,设计、合成荧光RAA检测引物和探针,并进行灵敏性测定、特异性验证;使用建立的荧光RAA检测方法检测玉米模拟样本和玉米真实样本,参照标准SN/T 1375-2004方法同步复核,评估荧光RAA检测方法的可靠性。【结果】成功建立了玉米细菌性枯萎病菌荧光RAA检测方法。该方法反应快速,在39℃条件下20 min内即可完成检测反应,特异性好,且灵敏度为280 fg/μL;利用该方法检测6份模拟样本结果阳性,24份真实样本结果呈阴性,与参照标准SN/T 1375-2004检测结果一致。【结论】成功建立了玉米细菌性枯萎病菌快速、灵敏和特异的荧光RAA检测方法,可用于玉米细菌性枯萎病菌的现场检测。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 pstS-glmS序列 重组酶介导等温扩增 荧光探针 快速检测
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玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病的红外光谱检测技术研究 被引量:2
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作者 夏拯 陈曦 +3 位作者 张明哲 吴志毅 林晓佳 陈吴健 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期1083-1087,共5页
本文主要针对玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病2种检疫性细菌病害进行红外光谱检测研究,并对其红外谱图进行基线校正和归一化处理,对其谱带归属进行了辨别分析。结果显示,该技术不仅于该2种病害的检测鉴定,还可用于实际样品的检测鉴定。
关键词 玉米细菌性枯萎病 玉米内州萎焉 红外光谱检测
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基于酶联免疫反应的玉米细菌性枯萎病菌快速检测方法 被引量:2
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作者 孔德昭 彭娟 +2 位作者 刘丽强 唐丽娟 匡华 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期958-962,共5页
通过菌体免疫小鼠获得高灵敏的高特异性单克隆抗体,并以此为基础建立一种快速、灵敏的单克隆抗体双抗体夹心法检测玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartill subsp.Stewartii)。通过小鼠脾脏融合实验获得3株单克隆抗体(12B4、10B1、1... 通过菌体免疫小鼠获得高灵敏的高特异性单克隆抗体,并以此为基础建立一种快速、灵敏的单克隆抗体双抗体夹心法检测玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartill subsp.Stewartii)。通过小鼠脾脏融合实验获得3株单克隆抗体(12B4、10B1、11C2),并通过双抗体夹心法筛选配对细胞株,建立双抗体夹心法。最低检测限(LOD)为1.5×10^4 cfu/mL,线性范围在4.57×10^5-1.11×10^8 cfu/mL。该方法对玉米细菌性枯萎病菌具有很好的特异性,对玉米种子添加回收实验回收率为85.6%-90.2%,相对标准偏差低于5.0%。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 单克隆抗体 双抗体夹心法 玉米
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基于地理信息系统的玉米细菌性枯萎病在中国适宜流行区的初步研究 被引量:2
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作者 刘翔 刘凤权 《植物检疫》 2008年第1期9-11,F0003,共4页
根据国家气象局发布的中国地面气象月报的数据,选用公开的遍布全国的200个气象站点连续20年(1981~2000)的气象资料,以冬季(12月份、1月份、2月份)的平均温度作为限制因子,输入地理信息系统(ESRITM),对玉米细菌性枯萎病在中国的适宜流... 根据国家气象局发布的中国地面气象月报的数据,选用公开的遍布全国的200个气象站点连续20年(1981~2000)的气象资料,以冬季(12月份、1月份、2月份)的平均温度作为限制因子,输入地理信息系统(ESRITM),对玉米细菌性枯萎病在中国的适宜流行风险进行研究,用Iowa State Method的分级标准,将玉米细菌性枯萎病在中国的适宜流行风险分为4个区域,即基本不发生区、低风险区、中风险区和高风险区。研究结果表明:中国是玉米细菌性枯萎病的可能发生区;从南到北依次为高风险区、中风险区、低风险区和基本不发生区,高风险区和低风险区范围较大,中低风险区为介于两者之间的狭窄长带。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 地理信息系统 适宜流行区
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玉米细菌性枯萎病菌纳米磁标记免疫层析检测试剂与试纸条 被引量:2
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作者 杨金玲 黄大亮 +5 位作者 李莉 刘彩虹 陈勇 邹明强 陈艳 马吉湘 《化学试剂》 CAS 北大核心 2015年第6期519-523,共5页
分别以粒径为50和100 nm的羧基化纳米磁珠,通过碳二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联法使磁珠与抗体偶联,制备出可特异性识别玉米细菌性枯萎病菌的两种纳米免疫磁珠试剂。基于双抗体夹心法,经实验条件优化,选用100 nm的羧基化纳米... 分别以粒径为50和100 nm的羧基化纳米磁珠,通过碳二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联法使磁珠与抗体偶联,制备出可特异性识别玉米细菌性枯萎病菌的两种纳米免疫磁珠试剂。基于双抗体夹心法,经实验条件优化,选用100 nm的羧基化纳米磁珠为磁标记探针,组装了玉米细菌性枯萎病菌磁标记免疫层析检测试纸条。该方法用于玉米种子中玉米细菌性枯萎病菌的检测,检出限为1.0×106CFU/m L,15 min内可通过肉眼判读结果,也可用超顺磁共振检测仪实现量化检测,具有简便、快速、现场化检测的优势。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 纳米磁珠 免疫层析检测 试剂 试纸条
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基于锁式探针技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌和玉米内州萎蔫病菌 被引量:1
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作者 李志锋 王忠文 +3 位作者 冯建军 程颖慧 李一农 章桂明 《生物技术通讯》 CAS 2016年第4期529-534,共6页
目的:建立一种检测玉米细菌性枯萎病菌和玉米内州萎蔫病菌的方法,为同时检测这2种检疫性细菌提供技术手段。方法:基于靶标序列设计2种检疫性细菌的锁式探针,与靶标菌进行连接消化反应,然后采用通用引物进行滚环扩增,其产物与偶联上对应... 目的:建立一种检测玉米细菌性枯萎病菌和玉米内州萎蔫病菌的方法,为同时检测这2种检疫性细菌提供技术手段。方法:基于靶标序列设计2种检疫性细菌的锁式探针,与靶标菌进行连接消化反应,然后采用通用引物进行滚环扩增,其产物与偶联上对应捕获探针的微球进行杂交,最后通过液相悬浮芯片二重检测。结果:该检测方法能够有效地检测2种检疫性细菌,其检测阈值为103CFU/m L,具有良好的可重复性。结论:建立了一种快速、灵敏的玉米细菌性枯萎病菌和玉米内州萎蔫病菌的二重检测方法。 展开更多
关键词 滚环扩增 玉米细菌性枯萎病 玉米内州萎蔫 液相悬浮芯片
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玉米细菌性枯萎病菌检测引物/探针的特异性评估 被引量:1
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作者 魏霜 丁钿 +5 位作者 于璇 黄法余 陈永青 李献锋 单长林 胡学难 《植物检疫》 2021年第4期15-22,共8页
利用6株玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii,PSS)和29株相关菌株对报道的18对检测引物/探针的特异性进行测试。试验结果显示,其中16对引物/探针会出现假阳性或弱假阳性扩增,仅引物cpsAB2313F/cpsR和DC283galE/DC283g... 利用6株玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii,PSS)和29株相关菌株对报道的18对检测引物/探针的特异性进行测试。试验结果显示,其中16对引物/探针会出现假阳性或弱假阳性扩增,仅引物cpsAB2313F/cpsR和DC283galE/DC283galEc可以特异检测目的菌,两对引物的检测灵敏度分别为0.1 pg和1 pg。根据测试结果,推荐这2对引物用于检测玉米细菌性枯萎病菌,优先推荐引物cpsAB2313F/cpsR。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 检测 引物
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玉米细菌性枯萎病菌EGase内切葡聚糖酶蛋白纯化研究初探
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作者 厉艳 邵秀玲 +3 位作者 张京宣 王英超 封立平 王简 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第4期1392-1396,共5页
目的研究玉米细菌性枯萎病菌EGase内切葡聚糖酶蛋白纯化的方法。方法以玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii)菌株为材料,分离纯化其内切葡聚糖酶Egase。制备EGase浓缩液,浓缩液经Sephradex^(TM)G-75凝胶过滤层析和DEA... 目的研究玉米细菌性枯萎病菌EGase内切葡聚糖酶蛋白纯化的方法。方法以玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii)菌株为材料,分离纯化其内切葡聚糖酶Egase。制备EGase浓缩液,浓缩液经Sephradex^(TM)G-75凝胶过滤层析和DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子交换柱层析等提纯步骤,获得了凝胶电泳均一的内切葡聚糖酶。结果经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为一条电泳带,纯化后的EGase是单体蛋白,分子量约为72.3 k Da。Egase酶反应的最适温度是60℃,最适pH为5.0。结论本研究从玉米细菌性枯萎病菌中分离得到了一种新的内切葡聚合糖酶,对其部分性质进行了表述,为后续EGase基因的克隆及表达研究提供了研究基础。 展开更多
关键词 玉米细菌性枯萎病 内切葡聚糖酶 蛋白纯化
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