从猪睾丸中提取RNA后,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法获得PHGPx cDNA。扩增的目的基因片段经琼脂糖凝胶电泳回收,与pMD18-T载体连接,转入E.col i DH5α中筛选鉴定重组子。将质粒经酶切鉴定后,把酶切下的目的基因cDNA进一步克隆...从猪睾丸中提取RNA后,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法获得PHGPx cDNA。扩增的目的基因片段经琼脂糖凝胶电泳回收,与pMD18-T载体连接,转入E.col i DH5α中筛选鉴定重组子。将质粒经酶切鉴定后,把酶切下的目的基因cDNA进一步克隆到真核表达载体pGAPZαA中,经PCR及序列鉴定,证实插入载体pGAPZαA中的片段为含有目的基因的核苷酸序列。真核表达重组质粒pGAPZαA-PHGPx cDNA的构建成功,有利于猪PHGPx的真核批量表达及对其生物学功能的进一步研究。展开更多
文摘从猪睾丸中提取RNA后,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法获得PHGPx cDNA。扩增的目的基因片段经琼脂糖凝胶电泳回收,与pMD18-T载体连接,转入E.col i DH5α中筛选鉴定重组子。将质粒经酶切鉴定后,把酶切下的目的基因cDNA进一步克隆到真核表达载体pGAPZαA中,经PCR及序列鉴定,证实插入载体pGAPZαA中的片段为含有目的基因的核苷酸序列。真核表达重组质粒pGAPZαA-PHGPx cDNA的构建成功,有利于猪PHGPx的真核批量表达及对其生物学功能的进一步研究。
