PCV2 ORF2基因与猪IL-18基因共表达DNA疫苗的免疫原性 被引量：5

1

作者 王子馨 李坤 +4 位作者 刘金朋 崔保安 王淑娟 朱前磊 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期532-537,共6页

为研制新型的PCV2基因疫苗,本研究将PCV2ORF2和猪IL-18基因插入真核表达质粒pIRES中,构建共表达capsid(Cap)蛋白和猪IL-18的质粒pIRES-OFR2/IL18和表达Cap蛋白的质粒pIRES-OFR2。将质粒pIRES-OFR2/IL18和pIRES-OFR2通过腿部肌肉多点注射... 为研制新型的PCV2基因疫苗,本研究将PCV2ORF2和猪IL-18基因插入真核表达质粒pIRES中,构建共表达capsid(Cap)蛋白和猪IL-18的质粒pIRES-OFR2/IL18和表达Cap蛋白的质粒pIRES-OFR2。将质粒pIRES-OFR2/IL18和pIRES-OFR2通过腿部肌肉多点注射8周龄昆明小鼠,间隔3周再免疫1次。加强免疫3周后用PCV2Wuzhi株进行攻毒。pIRES-OFR2/IL18免疫昆明小鼠后能促进外周血T淋巴细胞增殖和血清中特异性抗体水平的增加,能明显增强PCV2DNA疫苗对强毒的攻击保护,pIRES-ORF2/IL18免疫组要优于pIRES-ORF2免疫组及其它对照组,差异显著。表明猪IL-18基因与PCV2ORF2共表达可增强猪体对DNA疫苗的免疫应答,提高对PCV2强毒的抵抗力。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 ORF2基因 猪il-18 DNA疫苗

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PRRSV GP5蛋白及猪IL-18基因共表达核酸疫苗免疫原性试验 被引量：4

2

作者 沈宪文 王中华 +2 位作者 高磊 李国江 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1543-1549,共7页

本试验通过分子克隆技术分别构建了单独表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因以及PRRSVGP5基因和猪IL-18基因共表达的重组核酸疫苗质粒(pEGFP-GP5和pEGFP-IL18-GP5),并进行仔猪免疫原性研究,对构建的PRRSV核酸疫苗所诱导的体液免... 本试验通过分子克隆技术分别构建了单独表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因以及PRRSVGP5基因和猪IL-18基因共表达的重组核酸疫苗质粒(pEGFP-GP5和pEGFP-IL18-GP5),并进行仔猪免疫原性研究,对构建的PRRSV核酸疫苗所诱导的体液免疫和细胞免疫水平进行检测,进一步研究了PRRSV核酸疫苗免疫效果以及猪IL-18基因对PRRSV核酸疫苗免疫调节作用的影响。同时,调查了商业上应用不同类型的PRRSV疫苗诱导的免疫效果,并与核酸疫苗免疫效果进行比较。结果表明,IL-18作为免疫佐剂在疫苗免疫猪后诱导的病毒特异性细胞免疫反应方面具有很好的调节作用,共表达IL18-GP5蛋白能够明显的改善DNA疫苗的免疫效力,增强抗PRRSV的免疫保护。因此,DNA疫苗做为一种新一代疫苗可用于对抗高致病性PRRSV感染。 展开更多

关键词 PRRSV GP5基因 猪il-18 DNA疫苗

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表达猪圆环病毒2型CAP蛋白和猪IL-18的重组禽痘病毒的构建 被引量：3

3

作者 郭晓庆 王子馨 +4 位作者 王淑娟 朱前磊 付朋飞 崔保安 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期530-535,共6页

为了构建共表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组禽痘病毒,本研究将CAP基因和猪IL-18基因分别置于pSY538的痘病毒启动子LP2EP2下,然后插入到含有痘苗病毒启动子P11启动的LacZ基因的禽痘病毒转移载体pSY681/lacZ中,获得重组转... 为了构建共表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组禽痘病毒,本研究将CAP基因和猪IL-18基因分别置于pSY538的痘病毒启动子LP2EP2下,然后插入到含有痘苗病毒启动子P11启动的LacZ基因的禽痘病毒转移载体pSY681/lacZ中,获得重组转移质粒pSY681/CAP/IL18。将重组质粒pSY681/CAP/IL18转染入鸡胚成纤维细胞内,使CAP基因、猪IL-18基因和LacZ基因同源重组到禽痘病毒S-FPV-017中,产生重组禽痘病毒,经多次蓝斑克隆筛选纯化后,最终得到共表达CAP蛋白和猪IL-18的重组禽痘病毒(rFPV-CAP/IL18)。以rFPVCAP/IL18感染CEF,通过RT-PCR检测,CEF细胞中含CAP基因和猪IL-18基因的mRNA,间接免疫荧光试验证实感染rFPV-CAP/IL18的CEF能表达CAP蛋白。重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的CAP和猪IL-18,为进一步的免疫效力研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 CAP 猪il-18 重组禽痘病毒

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表达PCV2 CAP蛋白和猪IL-18重组PRV PGO18株的生物学特性 被引量：2

4

作者 郭晓庆 郑兰兰 +5 位作者 付朋飞 杨兴武 乔涵 朱前磊 王淑娟 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期707-711,717,共6页

为了探讨表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病病毒PGO18作为疫苗候选株的潜在价值,对其在ST细胞上的培养特性,ST、VERO、IBRS-2、PK-15和IPEC细胞上增殖情况,生长特性,遗传稳定性,对小鼠安全性及其理化特性等生物... 为了探讨表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病病毒PGO18作为疫苗候选株的潜在价值,对其在ST细胞上的培养特性,ST、VERO、IBRS-2、PK-15和IPEC细胞上增殖情况,生长特性,遗传稳定性,对小鼠安全性及其理化特性等生物学特性进行了研究。结果表明,重组病毒PGO18株与亲本株猪伪狂犬病病毒HB98具有相似的培养特性和生长特性,在ST、VERO和IBRS-2细胞上的增殖滴度TCID50与亲本株(107.75/0.1mL)相当,遗传稳定性良好,安全性试验表明对小鼠是安全的;理化特性试验说明该病毒具有猪伪狂犬病病毒的通性。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪il-18 重组猪伪狂犬病病毒 生物学特性

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猪IL-18在乳酸乳球菌中的表达及其生物活性的检测 被引量：2

5

作者 马露 乔薪瑗 +3 位作者 唐丽杰 姜艳平 崔文 李一经 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1541-1548,共8页

为了在乳酸乳球菌中分泌表达具有生物活性的猪IL-18蛋白,并检测其生物活性,故通过分离猪外周血单核淋巴细胞(PBMC),以其为模板,采用RT-PCR方法扩增猪白细胞介素18(pIL-18)基因,将目的基因与乳酸乳球菌表达载体pAMJ399进行连接,并电转化... 为了在乳酸乳球菌中分泌表达具有生物活性的猪IL-18蛋白,并检测其生物活性,故通过分离猪外周血单核淋巴细胞(PBMC),以其为模板,采用RT-PCR方法扩增猪白细胞介素18(pIL-18)基因,将目的基因与乳酸乳球菌表达载体pAMJ399进行连接,并电转化至乳酸乳球菌MG1363中,通过SDS-PAGE和Western blotting分析检测目的蛋白的表达,并通过脾淋巴细胞增殖试验和细胞病变抑制法对pIL-18的生物活性进行检测。Western blotting分析检测结果与生物活性检测结果显示,在重组菌pAMJ399-pIL18/MG1363的上清和菌体沉淀中19 kDa处均出现pIL-18的特异蛋白反应带,且分泌表达的pIL-18蛋白能明显促进猪脾淋巴细胞的增殖,并对病毒增殖有明显的抑制作用。以上结果表明pIL-18可在乳酸乳球菌分泌表达,且表达产物具有良好的生物活性。 展开更多

关键词 猪il-18 乳酸乳球菌 分泌表达 生物活性

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猪IL-18在毕赤酵母中分泌表达条件的优化 被引量：1

6

作者 宋世斌 陈国华 +3 位作者 王颖 王笑笑 宗瑞谦 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第1期38-42,共5页

采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中亚克隆出IL-18基因并完成了真核融合表达载体pPIC9K-IL-18的构建和IL-18在毕赤酵母中的表达,在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了... 采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中亚克隆出IL-18基因并完成了真核融合表达载体pPIC9K-IL-18的构建和IL-18在毕赤酵母中的表达,在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,进一步探索了酵母菌表达猪IL-18的发酵工艺.结果表明,摇瓶发酵时,诱导最佳时间为72 h,甲醇最适浓度为20 g/L,最适pH范围为6.0-8.0,最适接种量1∶1.与单纯甲醇诱导相比,甘油/甲醇诱导后的表达量明显提高. 展开更多

关键词 猪il-18 毕赤酵母 摇瓶发酵 表达条件

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猪IL-18成熟蛋白在大肠杆菌中的表达及生物学活性鉴定 被引量：1

7

作者 陈红英 郑兰兰 +3 位作者 金钺 李新生 段廷云 崔保安 《分子科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期284-289,共6页

以含猪IL-18全基因的重组质粒pGEM-IL-18为模板,PCR扩增猪IL-18成熟蛋白基因.将IL-18成熟蛋白片段定向插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-IL-18,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白(His-IL-18),并进行融... 以含猪IL-18全基因的重组质粒pGEM-IL-18为模板,PCR扩增猪IL-18成熟蛋白基因.将IL-18成熟蛋白片段定向插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-IL-18,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白(His-IL-18),并进行融合蛋白的纯化、生物学活性鉴定.结果表明,SDS-PAGE可检测到相对分子质量约为2.1×104的融合蛋白,Western blot证实His-IL-18能与猪IL-18单克隆抗体发生特异性反应.重组猪IL-18经纯化后,能明显刺激猪脾脏T淋巴细胞增殖反应,在Marc-145细胞上抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的活性为2.50×103IU/mg,在PK-15细胞上抗猪伪狂犬病毒、猪细小病毒的活性分别为2.00×103和2.24×103IU/mg.表明建立的表达系统能够表达重组猪IL-18,表达的重组猪IL-18具有一定的生物学活性. 展开更多

关键词 猪il-18 原核表达 生物学活性 抗病毒活性

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表达猪细小病毒VP2蛋白和猪IL-18重组伪狂犬病毒的构建 被引量：5

8

作者 王林青 付朋飞 +5 位作者 乔涵 郭晓庆 朱前磊 王淑娟 陈红英 崔保安 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1422-1428,共7页

为了获得表达猪细小病毒(PPV)VP2蛋白和细胞因子猪白细胞介素-18(IL-18)的重组猪伪狂犬病毒(PRV)。将PPV VP2基因和猪IL-18基因分别插入到PRV转移质粒PG中,得到重组质粒PG18-VP2。利用脂质体转染法将重组转移质粒PG18-VP2与猪PRV弱毒株... 为了获得表达猪细小病毒(PPV)VP2蛋白和细胞因子猪白细胞介素-18(IL-18)的重组猪伪狂犬病毒(PRV)。将PPV VP2基因和猪IL-18基因分别插入到PRV转移质粒PG中,得到重组质粒PG18-VP2。利用脂质体转染法将重组转移质粒PG18-VP2与猪PRV弱毒株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,以EGFP荧光标记,通过5轮蚀斑筛选纯化,成功获得表达PPV VP2蛋白和猪IL-18且带EGFP标记的重组伪狂犬病毒IL18-VP2-rPRV。用重组病毒感染ST细胞,12h后在荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光;通过RT-PCR证实感染细胞中含有PPV VP2和猪IL-18mRNA;Western-blot试验结果显示,重组病毒能表达具有生物活性的PPV VP2蛋白和猪IL-18。重组病毒经连续20次传代后感染细胞仍能发出绿色荧光,PCR检测表明VP2及IL-18基因在重组病毒中能稳定遗传。为进一步研究表达PPV VP2蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病毒的免疫效力奠定了基础。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2基因 猪il-18基因 猪伪狂犬病病毒 重组病毒

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新兴猪IL-18成熟蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：6

9

作者 温纳相 陈瑞爱 +4 位作者 裴仉福 唐满华 金晓芹 魏志清 朱文冠 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第1期64-66,共3页

根据GenBank上登录的猪白细胞介素18(pIL 18)基因序列,设计了1对特异引物。利用RT PCR对从3周龄新兴仔猪脾细胞中提取的总RNA进行了扩增,获得了约500bp的片段。将该片段克隆、鉴定、测序,证实已获得了新兴猪IL 18成熟蛋白基因片段,其大... 根据GenBank上登录的猪白细胞介素18(pIL 18)基因序列,设计了1对特异引物。利用RT PCR对从3周龄新兴仔猪脾细胞中提取的总RNA进行了扩增,获得了约500bp的片段。将该片段克隆、鉴定、测序,证实已获得了新兴猪IL 18成熟蛋白基因片段,其大小为474bp,编码157个氨基酸,与GenBank上登录的猪IL 18成熟蛋白基因序列完全一致。 展开更多

关键词 猪il-18基因 克隆 序列分析

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河南良杂猪白细胞介素-18成熟蛋白基因的克隆及表达载体的构建 被引量：3

10

作者 郑兰兰 崔保安 +3 位作者 贾云飞 陈瑞亮 陈红英 吕晓丽 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期200-203,共4页

采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18基因成熟蛋白序列.序列测定表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基... 采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18基因成熟蛋白序列.序列测定表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-IL18,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确. 展开更多

关键词 猪il-18基因 克隆 成熟蛋白 表达载体

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剑河白香猪IL-18基因克隆与序列分析

11

作者 杨先富 包涛涛 +7 位作者 袁晓娟 彭彩丽 杨胜红 杨政益 莫兴虎 吴通奎 汪忠荣 王正文 《安徽农业科学》 CAS 2022年第22期82-85,共4页

为测定剑河白香猪IL-18核苷酸序列结构,采集剑河白香猪脾脏,提取总RNA,反转录成cDNA,通过PCR法扩增cDNA,将从凝胶中收集的DNA与PMD19-T Vector连接,转入E.coli DH5a感受态细胞,将感受态细胞在含有X-Gal、IPTG、Amp的L-琼脂平板培养基上... 为测定剑河白香猪IL-18核苷酸序列结构,采集剑河白香猪脾脏,提取总RNA,反转录成cDNA,通过PCR法扩增cDNA,将从凝胶中收集的DNA与PMD19-T Vector连接,转入E.coli DH5a感受态细胞,将感受态细胞在含有X-Gal、IPTG、Amp的L-琼脂平板培养基上培养,挑选单个白色菌落,用PCR法确认重组质粒中IL-18基因长度大小。结果表明:测得IL-18全基因长度为579 bp,编码192个氨基酸,与荣昌猪、内江猪、GenBank的序列AY262109、AY262109进行比较,核苷酸同源性分别是99.1%、99.5%、99.8%、99.8%,推导的氨基酸同源性分别是98.4%、99.5%、100%、100%。 展开更多

关键词 剑河白香猪il-18 基因克隆 序列分析

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猪白细胞介素-18基因克隆、序列分析及其真核表达载体的构建

12

作者 郑兰兰 崔保安 +5 位作者 陈红英 贾云飞 陈瑞亮 方忠意 李小康 赵丽 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期41-46,共6页

采集6月龄河南良杂猪脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18全基因序列。序列测定表明,plL-18全基因核苷酸长度为579bp,编码192个氨基酸。与GenBank... 采集6月龄河南良杂猪脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18全基因序列。序列测定表明,plL-18全基因核苷酸长度为579bp,编码192个氨基酸。与GenBank上已发表序列ABO10003进行比较,核苷酸同源性为99.8%,在第550位处(以ATG为1计)存在A→G的有意义突变。与从GenBank下载读取的ABO10003、AF176949、AY262109、NM1997序列进行比较分析,氨基酸同源性分别为99%、98.5%和99.8%、99%。将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA-ILl8m,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为核酸疫苗的研究应用奠定了基础。 展开更多

关键词 猪il-18基因 克隆 表达载体

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