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H1亚型流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定 被引量：4
1
作者 郭春艳 李慧瑾 +5 位作者 刘杨 赵向绒 王鑫 封青 李元 胡军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期177-180,共4页
目的:制备针对H1亚型流感病毒HA蛋白的单克隆抗体(mAb),并分析其反应特性。方法:分别以2009年甲型H1N1、季节性A1流感病毒裂解疫苗为免疫原,常规法免疫、融合、克隆化,获得各抗原特异性mAb。应用ELISA、HI试验和Western blot等技术研究... 目的:制备针对H1亚型流感病毒HA蛋白的单克隆抗体(mAb),并分析其反应特性。方法:分别以2009年甲型H1N1、季节性A1流感病毒裂解疫苗为免疫原,常规法免疫、融合、克隆化,获得各抗原特异性mAb。应用ELISA、HI试验和Western blot等技术研究mAb的反应性和特异性。结果:获得稳定分泌抗H1亚型流感病毒HA蛋白的杂交瘤细胞97株。其中株特异性mAb39株,29株具有HI活性;亚型特异性mAb7株,5株具有HI活性;2009年流行株与季节性A1、A3流行株共同抗原的mAb16株,9株具有HI活性;针对流感病毒共同抗原mAb35株,22株具有HI活性。结论:两种疫苗均具有较好的免疫原性和免疫保护活性,这些mAb的获得为流感病毒株特异、亚型特异性诊断试剂盒及流感病毒通用诊断试剂盒的制备提供了实验资料,为进一步研究H1N1流感病毒HA的抗原表位奠定了基础。 展开更多
关键词 h1亚型流感病毒 hA抗原 单克隆抗体
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2017年冬季新疆部分地区猪H 1亚型流感病毒病原学调查
2
作者 努尔拜合提.努尔旦 加伊娜古力 巴特力.贾尼木汗 《新疆畜牧业》 2018年第4期23-24,共2页
由于猪H1亚型流感病毒给养猪业造成一定经济损失,本文对冬季新疆部分地区猪场的猪H1亚型流感病毒进行流行病学调查,结果显示该病发生没有显著的季节性,气温变化、猪自身营养状况等均会造成疾病的发生,因此,养猪场要及时甄别该病与猪感... 由于猪H1亚型流感病毒给养猪业造成一定经济损失,本文对冬季新疆部分地区猪场的猪H1亚型流感病毒进行流行病学调查,结果显示该病发生没有显著的季节性,气温变化、猪自身营养状况等均会造成疾病的发生,因此,养猪场要及时甄别该病与猪感冒的区别,及时采取措施,合理配置饲料,增强猪群的抗病能力。 展开更多
关键词 猪h1亚型流感病毒 病原 调查
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基于血凝素蛋白特异性抗体的H7亚型流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法建立 被引量：1
3
作者 王泽敏 祁贤 +2 位作者 鲍倡俊 焦永军 卫平民 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期455-460,共6页
目的基于H7亚型流感病毒,制备针对于HA抗原的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA检测体系,为其在流感病毒快速检测试剂研发中提供技术储备。方法用H7亚型禽流感病毒HA重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤技术制备HA特异性单克隆抗体,... 目的基于H7亚型流感病毒,制备针对于HA抗原的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA检测体系,为其在流感病毒快速检测试剂研发中提供技术储备。方法用H7亚型禽流感病毒HA重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤技术制备HA特异性单克隆抗体,筛选可在双抗体夹心ELISA技术平台上使用的配对抗体,初步探索该ELISA体系的检测特异性、敏感性和广谱性。结果共制备出6株HA特异性单克隆抗体,并成功筛选出捕获抗体8B11-C9及检测抗体7C3-G5的最佳配对。该双抗体夹心体系对HA重组蛋白的检测灵敏度可达到1.56 ng/mL,能有效检测出不同宿主来源的H7亚型流感病毒,与其他亚型流感病毒无交叉。结论成功制备出H7亚型流感病毒HA单克隆抗体,建立了H7亚型流感病毒特异性的双抗体夹心ELISA检测方法,为其快速检测试剂研发奠定了基础。 展开更多
关键词 h7亚型流感病毒 单克隆抗体 hA蛋白 双抗体夹心ELISA
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不同培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果研究 被引量：2
4
作者 张建伟 史爱华 +4 位作者 沈佳 景小冬 章振华 李林 姜北宇 《安徽农业科学》 CAS 2012年第8期4609-4611,共3页
[目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg... [目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg/ml胰蛋白酶的3种培养基作为维持液,培养病毒,每隔24 h观察其细胞病变,并测定上清HA滴度。[结果]在培养72～96 h时,无血清培养基病毒液的HA滴度高于低血清培养基,而低血清培养基则高于含血清培养基。[结论]3种培养基均可用于制备禽流感病毒抗原,其中无血清培养基、低血清培养基更适用于流感病毒抗原的制备。 展开更多
关键词 培养基 h9亚型流感病毒 MDCK细胞 增殖效果
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H9亚型流感病毒数字RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：1
5
作者 吴斌 苏立明 +2 位作者 张琳 马嗣同 肇慧君 《中国家禽》 北大核心 2017年第21期62-65,共4页
通过数字RT-PCR和实时定量RT-PCR两种方法的比对试验,建立快速检测H9亚型流感的数字RT-PCR方法。利用同一对引物和探针,以梯度稀释的方法测定这两种方法针对H9亚型流感的灵敏性、特异性及重现性。结果显示:两种方法均能够检测出104倍稀... 通过数字RT-PCR和实时定量RT-PCR两种方法的比对试验,建立快速检测H9亚型流感的数字RT-PCR方法。利用同一对引物和探针,以梯度稀释的方法测定这两种方法针对H9亚型流感的灵敏性、特异性及重现性。结果显示:两种方法均能够检测出104倍稀释的H9亚型流感病毒,而数字RT-PCR可以检测出单个微滴中的H9亚型流感病毒,其灵敏度性高于实时定量RT-PCR;两种方法的特异性和重复性都较好,对H3N2、H4N2、H6N2等亚型流感病毒均未有扩增反应。数字RT-PCR方法比实时定量RT-PCR具有更高的灵敏度,在快速检测H9亚型流感病毒方面可发挥重要作用。 展开更多
关键词 h9亚型流感病毒 数字RT—PCR 实时定量RT—PCR
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几种H7亚型流感病毒荧光RT-PCR试剂盒的比对试验
6
作者 兰玲 符玉涓 马亚珍 《新疆畜牧业》 2016年第3期26-26,42,共2页
试验对几种商品化H7亚型流感病毒荧光RT-PCR试剂盒进行了比对,试验表明,CT值与模板浓度具有良好的线性关系,3个厂家敏感性差异较大,为H7亚型流感的早期快速诊断提供了指导。
关键词 h7亚型流感病毒 荧光RT-PCR 比对
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2013~2014年上饶市甲1亚型流感病毒HA1基因特性的分析
7
作者 朱琳 彭军 +1 位作者 王琳 张艳燕 《中国当代医药》 2015年第27期4-6,共3页
目的 了解上饶市2013~2014年分离到的甲1亚型流感病毒HA1基因变异特性和规律,分析WHO甲1亚型疫苗推荐株对上饶市甲1亚型流感的预防效果。方法 采集流感病例咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的甲1流感病毒采用RT-PCR方法 扩增病毒基因,... 目的 了解上饶市2013~2014年分离到的甲1亚型流感病毒HA1基因变异特性和规律,分析WHO甲1亚型疫苗推荐株对上饶市甲1亚型流感的预防效果。方法 采集流感病例咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的甲1流感病毒采用RT-PCR方法 扩增病毒基因,进行核苷酸序列测定,使用DNAStar、Mage软件对测序结果 进行分析和处理,且与WHO 2013~2014年推荐的疫苗株进行比对。结果 2013~2014年10株甲1亚型流感病毒HA1没有发现核苷酸丢失和插入,上饶市流感病毒分离株与WHO疫苗推荐株之间差异很小,只有A/JiangxiXinzhou/SWL116/2014株有2个变异位点位于抗原决定簇A区和抗原决定簇B区内。结论 2013~2014年WHO疫苗推荐株生产的疫苗对我市这两年甲1亚型流感具有一定的预防效果,可推广使用。 展开更多
关键词 甲1亚型流感病毒 分离株 疫苗株 hA区
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H5亚型流感病毒HA头部球状结构域在毕赤酵母中的高效表达及其免疫原性分析 被引量：7
8
作者 范文辉 王萌 +5 位作者 刘丽蓉 张鹤 张爽 凌红丽 刘文军 李晶 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期49-58,共10页
为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响,本研究构建了重组真核表达载体pPICZ?A-H5HA,并将其转化至毕赤酵母,经筛选获得重组菌株。SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示,目的蛋白可在酵... 为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响,本研究构建了重组真核表达载体pPICZ?A-H5HA,并将其转化至毕赤酵母,经筛选获得重组菌株。SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示,目的蛋白可在酵母中高效分泌表达,发酵液上清中目的蛋白浓度高达0.2 mg/mL,分子量约为37kDa。将酵母发酵上清经浓缩、纯化后,获得重组目的蛋白H5HA。将不同剂量的H5HA与不同佐剂联用后分别以滴鼻和肌肉注射两种方式免疫试验动物,进行免疫效力的评价。试验结果表明,H5HA具有较好的免疫原性,可诱导SPF鸡产生较高水平的IgG (血凝抑制效价达1∶64、病毒中和抗体效价为1∶218),最佳使用剂量为50μg/羽,与白油佐剂联用时效果最佳,且肌肉注射方式的免疫效果优于滴鼻方式。研究结果为H5亚型流感病毒亚单位疫苗的研制提供了理论支撑。 展开更多
关键词 h5亚型流感病毒 血凝素蛋白 毕赤酵母 亚单位疫苗
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共表达H5N1流感病毒M1和HA基因的DNA疫苗与腺病毒载体疫苗的小鼠免疫评价(英文) 被引量：7
9
作者 郭建强 姚立红 +4 位作者 陈爱珺 刘晓宇 付金奇 徐鹏卫 张智清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期876-883,共8页
为评价在小鼠体内表达流感病毒M1和HA基因诱导的免疫反应,制备共表达H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)全长基质蛋白1(M1)基因和血凝素(HA)基因的重组DNA疫苗pStar-M1/HA和重组腺病毒载体疫苗Ad-M1/HA,将其按初免-加强程序免疫BALB/c... 为评价在小鼠体内表达流感病毒M1和HA基因诱导的免疫反应,制备共表达H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)全长基质蛋白1(M1)基因和血凝素(HA)基因的重组DNA疫苗pStar-M1/HA和重组腺病毒载体疫苗Ad-M1/HA,将其按初免-加强程序免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔14 d。第1、3次用DNA疫苗,第2、4次用重组腺病毒载体疫苗,每次免疫前及末次免疫后14 d采集小鼠血清用于检测体液免疫应答,末次免疫后14 d采集小鼠脾淋巴细胞用于检测细胞免疫应答。血凝抑制(HI)实验和ELISA实验检测到免疫后小鼠血清中抗H5N1亚型流感病毒特异性IgG抗体。ELISPOT实验检测到免疫后小鼠针对M1和HA的特异性细胞免疫应答。共表达H5N1流感病毒M1和HA基因的DNA疫苗与腺病毒载体疫苗在小鼠体内的免疫学评价,为研究开发新型重组流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 h5N1亚型流感病毒 基质蛋白1 血凝素(hA) 共表达 联合免疫
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巢式PCR检测H1亚型禽流感病毒方法的建立 被引量：6
10
作者 郭捷 谢芝勋 +5 位作者 罗思思 刘加波 邓显文 谢志勤 庞耀珊 范晴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期23-26,共4页
为建立快速、准确检测H1亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的方法,本研究针对H1亚型AIV血凝素(HA)基因保守区设计合成了2对特异性引物并优化反应条件进行巢式PCR反应。特异性和敏感性试验结果表明,该PCR方法能特异性检测到H1亚... 为建立快速、准确检测H1亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的方法,本研究针对H1亚型AIV血凝素(HA)基因保守区设计合成了2对特异性引物并优化反应条件进行巢式PCR反应。特异性和敏感性试验结果表明,该PCR方法能特异性检测到H1亚型AIV,其敏感性最低能检测到13.2 fg/μL的H1亚型AIV RNA模板。本研究建立的巢式PCR方法为H1亚型AIV的早期诊断及有效防制提供了快速、特异且敏感的检测方法。 展开更多
关键词 h1亚型禽流感病毒 巢式PCR 检测
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众生丸对H1N1流感小鼠的保护及免疫调节作用研究 被引量：5
11
作者 戴卫平 李耿 +3 位作者 申小花 吴依娜 张奉学 赖小平 《环球中医药》 CAS 2015年第4期395-399,共5页
目的研究众生丸对H1N1流感病毒感染小鼠的保护及免疫调节作用。方法以奥司他韦为阳性药,H1N1流感病毒滴鼻感染小鼠复制小鼠病毒性肺炎模型。比较小鼠病毒性肺炎模型的肺指数、肺组织形态学、死亡保护率、小鼠T淋巴细胞亚群和细胞因子干... 目的研究众生丸对H1N1流感病毒感染小鼠的保护及免疫调节作用。方法以奥司他韦为阳性药,H1N1流感病毒滴鼻感染小鼠复制小鼠病毒性肺炎模型。比较小鼠病毒性肺炎模型的肺指数、肺组织形态学、死亡保护率、小鼠T淋巴细胞亚群和细胞因子干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的数量变化。结果与病毒对照组比较,众生丸可显著降低H1N1感染小鼠的肺指数,提高存活率,调节T细胞亚群含量,促进血清中IFN-γ和IL-10产生。结论众生丸可通过减轻炎症,调节免疫而减轻H1N1亚型流感病毒所致小鼠肺部病变,提高染毒小鼠存活率。 展开更多
关键词 众生丸 h1N1亚型流感病毒 炎症 免疫 细胞因子
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重组流感病毒H1N1活菌疫苗的构建及其免疫效果的初步研究 被引量：4
12
作者 姚碧涛 李鹏 +3 位作者 焦新安 周丽丽 刘秀梵 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期686-689,共4页
目的获得两种流感病毒重组沙门氏菌X4550(asd-pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-NA)活菌疫苗,并对其免疫效果进行初步的研究。方法将本室已构建好的重组质粒pVAX1-HA及pVAX1-NA双酶切后得到HA、NA基因,将其克隆入asd-pVAX1构建重组的表达质... 目的获得两种流感病毒重组沙门氏菌X4550(asd-pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-NA)活菌疫苗,并对其免疫效果进行初步的研究。方法将本室已构建好的重组质粒pVAX1-HA及pVAX1-NA双酶切后得到HA、NA基因,将其克隆入asd-pVAX1构建重组的表达质粒。将重组质粒转染COS-7细胞,用免疫细胞化学方法鉴定重组质粒体外的表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,以2×109CFU/只的剂量三次口服免疫Balb/c小鼠。结果asd-pVAX1-HA和asd-pVAX1-NA均能在COS-7细胞中表达;免疫小鼠不仅可以检测到HA、NA特异性的血清IgG及IgA抗体;刺激黏膜免疫反应,产生sIgA抗体,而且能抵抗40LD50同型病毒滴鼻的攻击。结论H1N1流感病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌运送系统在体内能够成功释放所携带的质粒,并且能够刺激机体产生保护性免疫应答。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 DNA疫苗 h1N1亚型流感病毒 免疫保护性
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H1亚型禽流感病毒的分离鉴定 被引量：4
13
作者 郭捷 谢芝勋 +6 位作者 刘加波 罗思思 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 范晴 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第11期20-23,共4页
为了解广西H1亚型禽流感病毒(AIV)的分布情况及其致病性的特点,针对2011年至2012年广西自治区内活禽采集棉拭子样品进行H1亚型AIV的分离与初步鉴定,共分离纯化到6株H1亚型AIV。通过血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)发现分离株只与H1亚型... 为了解广西H1亚型禽流感病毒(AIV)的分布情况及其致病性的特点,针对2011年至2012年广西自治区内活禽采集棉拭子样品进行H1亚型AIV的分离与初步鉴定,共分离纯化到6株H1亚型AIV。通过血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)发现分离株只与H1亚型AIV的血清反应,RT-PCR鉴定其在422bp处出现目的条带,进一步确定其为H1亚型AIV。再根据鉴定后的毒株对鸡胚半数感染量(EID50)、鸡胚半数致死量(ELD50)的测定与致病性试验,发现6株分离株均不会致SPF鸡死亡,确定所分离的H1亚型AIV为低致病性禽流感病毒。 展开更多
关键词 h1亚型禽流感病毒 分离 鉴定
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河北省2005～2006年H1N1亚型流感病毒血凝素HA1基因特征研究 被引量：4
14
作者 郭瑞玲 齐顺祥 +1 位作者 刘艳芳 刘兰芬 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第15期2956-2958,2963,共4页
[目的]研究2005～2006年河北省分离的H1N1型流感病毒毒株HA1基因特性。阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。[方法]用MDCK分离培养流感病毒,提取病毒核糖核酸(RNA),采用RT-PCR扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软... [目的]研究2005～2006年河北省分离的H1N1型流感病毒毒株HA1基因特性。阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。[方法]用MDCK分离培养流感病毒,提取病毒核糖核酸(RNA),采用RT-PCR扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件作分析处理。[结果]2005～2006年在河北省流行的H1N1型流感病毒HA1基因核苷酸和氨基酸序列与同时期的H1N1亚型疫苗株A/NewCaledonia/20/1999相比已发生较大变异,核苷酸同源性为97.0%～98.1%,氨基酸同源性为97.9%～98.7%,有5～7个氨基酸发生了替换,但均不在抗原表位。种系进化结果显示A/河北南市/37/2005与A/河北新市/56/2005和A/河北新市/129/2006位于2个小分支,均距A/NewCaledonia/20/1999较远,A/河北南市/37/2005与A/NewYork/221/2003有较近的亲缘关系。[结论]H1N1型流感病毒HA1基因已发生明显变异,但对抗原性改变意义不大;近几年H1N1持续低流行使人群易感性得以积累是今年H1N1型流感流行的主要原因;2005～2006年河北省同时流行着至少2支种系发生距离较远的H1N1型流感病毒。 展开更多
关键词 h1N1亚型流感病毒 血凝素基因 核苷酸序列
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A/H6N1亚型禽流感病毒致病性评估及与2009 A/H1N1亚型流感病毒在哺乳动物体内的遗传兼容性 被引量：1
15
作者 程凯慧 于志君 +13 位作者 忻悦 张坤 丁洁 黄靖 岳秀芳 杨霞 乔军 王铁成 杨松涛 黄耕 赵永坤 高玉伟 华育平 夏咸柱 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第1期61-66,I0009,I0010,共8页
目的探讨人、禽流感病毒在哺乳动物体内的遗传兼容性,为下一步研究H6亚型禽流感病毒重配和致病性变异的分子机制奠定基础。方法野鸭源A/H6N1亚型禽流感病毒A/Mallard/SanJiang/275/2007以101EID50～106EID50的攻毒剂量经鼻内途径感染小... 目的探讨人、禽流感病毒在哺乳动物体内的遗传兼容性,为下一步研究H6亚型禽流感病毒重配和致病性变异的分子机制奠定基础。方法野鸭源A/H6N1亚型禽流感病毒A/Mallard/SanJiang/275/2007以101EID50～106EID50的攻毒剂量经鼻内途径感染小鼠,通过临床症状观察、病毒滴定和病理切片观察进行病毒学和组织学两方面检测对小鼠的致病性;同时,将此病毒与2009年A/H1N1流感病毒A/Changchun/01/2009(H1N1)混合感染豚鼠,分析两株病毒在哺乳动物体内的遗传兼容性。每天采集豚鼠鼻洗液并用噬斑纯化技术获得重配病毒,对获得的重配病毒进行全基因组序列的测定。结果 H6N1亚型禽流感病毒能直接感染小鼠,但对小鼠不致死。106EID50的攻毒剂量可有效感染小鼠,攻毒后第5天,小鼠表现出被毛较粗乱、活动减少、体重下降、呼吸急促的临床症状,但至攻毒后第10天开始康复,而对照组(MOCK)小鼠在14 d的观察期内无明显临床症状。病毒滴定结果表明,该病毒主要在小鼠肺脏和鼻甲骨中复制,病毒滴度可达104.5EID50/mL。病理学观察发现感染小鼠肺泡壁增厚,有大量炎性细胞浸润,纤维蛋白渗出并伴有轻微出血;在A/H6N1和A/H1N1混合感染豚鼠的重配实验中,经过三轮噬斑纯化从豚鼠鼻洗液中分离到6株重配病毒,说明A/H6N1亚型禽流感病毒与A/H1N1亚型流感病毒具有很好的遗传兼容性,能在豚鼠体内能发生重配。结论野鸭源A/H6N1亚型流感病毒无需适应就能够感染哺乳动物;该病毒与A/H1N1流感病毒具有很好的遗传兼容性,在哺乳动物体内能够发生基因重配,产生新的重配病毒,其公共卫生意义应引起高度关注。 展开更多
关键词 A h6N1亚型禽流感病毒 A h1N1亚型流感病毒 致病性 兼容性
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H1N1亚型流感病毒mRNA候选疫苗的构建、表达及鉴定 被引量：1
16
作者 夏胜男 庄忻雨 +8 位作者 田明尧 陈璐儿 狄亚心 杨松慧 许智强 于潼 朱光泽 秦爱建 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第3期254-259,共6页
目的从mRNA序列优化和体外转录(IVT)系统优化角度,设计2条基于血凝素(HA)基因的抗H1N1亚型流感病毒mRNA疫苗,分别连接到3种体外转录系统(含不同UTRs序列)中进行候选疫苗抗原的表达及鉴定,并确定候选疫苗所使用的最佳体外转录系统。方法... 目的从mRNA序列优化和体外转录(IVT)系统优化角度,设计2条基于血凝素(HA)基因的抗H1N1亚型流感病毒mRNA疫苗,分别连接到3种体外转录系统(含不同UTRs序列)中进行候选疫苗抗原的表达及鉴定,并确定候选疫苗所使用的最佳体外转录系统。方法确保抗原基因(HA)氨基酸序列不变,以2种优化策略对HA基因的密码子进行优化,分别命名为JLH1HA和JLHA,并分别克隆至骨架载体pGEM-T7-Hα(UTRs来自人源α球蛋白)、pGEM-T7-Mα(UTRs来自鼠源α球蛋白)、pGEM-n3(UTRs来自人源β球蛋白)上,通过线性化处理、体外转录、纯化及Cap1加帽处理,获得功能性mRNA,转染A549细胞后通过Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白的表达。结果成功构建6组mRNA候选疫苗且均能表达抗原蛋白,以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统蛋白表达量较高。结论抗原的设计具有可行性,筛选出的最优体外转录系统为以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统。密码子优化对蛋白表达量的影响并不显著,可能在动物免疫效果上能够体现。 展开更多
关键词 h1N1亚型流感病毒 mRNA疫苗 血凝素hA 密码子优化 体外转录系统
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H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数的优化 被引量：2
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作者 徐银兰 王三虎 +2 位作者 董永军 张鹏飞 杨猛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第3期805-813,共9页
为了研究最佳的H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数,本试验进行了孵化前种蛋的选择与保存、鸡胚孵化中各参数设定等因素对H1N1亚型流感病毒产毒量影响的研究。其中种蛋的选择与保存,主要考察了蛋重、蛋形指数、保存期、消毒时间及方法等因素... 为了研究最佳的H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数,本试验进行了孵化前种蛋的选择与保存、鸡胚孵化中各参数设定等因素对H1N1亚型流感病毒产毒量影响的研究。其中种蛋的选择与保存,主要考察了蛋重、蛋形指数、保存期、消毒时间及方法等因素,结果显示,蛋重为55～65g,蛋形指数为1.30～1.35,种蛋保存期为1～4d,保存温度为16～18℃,保存湿度为70%～80%,保存期种蛋的甲醛熏蒸消毒时间为30min时,可以为H1N1亚型流感疫苗生产提供最佳的种蛋。孵化过程中孵化参数对H1N1亚型流感病毒产毒量的影响,本试验主要将孵化温度、湿度、翻蛋、通风等参数作为研究对象,结果显示在生产H1N1亚型流感疫苗时,最佳孵化参数设定为：温度1～7d为38.2℃、8～9d为38.0℃、10d为37.8℃,湿度1～10d为65%～70%,翻蛋频率为1次/2h,前后倾角各为45°,通风风门设定为1～5d为4、6～10d为5。本试验结果为H1N1亚型流感疫苗生产提供优质的鸡胚孵化技术,确保鸡胚尿囊液的质量和收获量。 展开更多
关键词 h1N1亚型流感病毒 鸡胚孵化参数 病毒增殖
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长沙市禽类养殖和交易场所H5N1亚型流感病毒传播的流行病学特征调查 被引量：2
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作者 刘如春 宁华杰 +6 位作者 陈发明 张锡兴 张如胜 李叶兰 叶文 谢知 陈田木 《中国预防医学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期114-119,共6页
目的探讨活禽"养殖-交易-消费"的网络式消费模式,了解长沙市禽类养殖和交易场所H5N1亚型流感病毒传播的流行病学特征。方法本研究采用现场调查的方式,调查长沙市活禽养殖交易网络,养殖场、批发市场、零售市场活禽中禽流感病... 目的探讨活禽"养殖-交易-消费"的网络式消费模式,了解长沙市禽类养殖和交易场所H5N1亚型流感病毒传播的流行病学特征。方法本研究采用现场调查的方式,调查长沙市活禽养殖交易网络,养殖场、批发市场、零售市场活禽中禽流感病毒的感染情况。采用基因测序方法,开展病毒基因特征分析。结果长沙市平均每日生产活禽9万余只,批发市场每日进货和销售量为13万余只,零售市场每日进货和销售量为15万余只。活禽监测结果显示,养殖场未检出H5N1阳性,批发市场和零售市场病毒分离阳性率分别为7.57%和13.30%。环境监测结果显示,养殖场、批发市场和零售市场病毒核酸阳性率分别为8.73%、23.37%、34.32%,经logistic回归分析,批发市场传播禽流感的风险高于养殖场所、零售市场传播禽流感的风险高于批发市场,OR值为2.010(95%CI:1.602~2.522)。基因测序结果显示,活禽交易场所检出的病毒为高致病性禽流感H5N1病毒。结论长沙市活禽养殖和交易网络庞大而复杂,非常有利于禽流感病毒的传播,而且传播速度非常快,溯源难度大。长沙市活禽H5N1感染率高,需要建立长效的多部门联防联控机制。 展开更多
关键词 活禽 禽流感 h5N1亚型流感病毒 流行病学特征
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甲型H5N1流感病毒M2与HA双基因载体疫苗在小鼠体内的免疫学评价 被引量：1
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作者 郭建强 姚立红 +4 位作者 陈爱珺 徐一 刘晓宇 舒跃龙 张智清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期649-656,共8页
高致病性H5N1亚型禽流感病毒(AIV)严重威胁到人类健康,因此研制高效、安全的禽流感疫苗具有重要意义。以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,PCR扩增基质蛋白2(M2)和血凝素(HA)基因全长开放阅读框片段,构... 高致病性H5N1亚型禽流感病毒(AIV)严重威胁到人类健康,因此研制高效、安全的禽流感疫苗具有重要意义。以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,PCR扩增基质蛋白2(M2)和血凝素(HA)基因全长开放阅读框片段,构建共表达H5N1亚型AIV膜蛋白基因M2和HA的重组质粒pStar-M2/HA。此外,还通过同源重组以293细胞包装出表达M2基因的重组腺病毒Ad-M2以及表达HA基因的重组腺病毒Ad-HA。用间接免疫荧光(IFA)方法检测到了各载体上插入基因的表达。按初免-加强程序分别用重组质粒pStar-M2/HA和重组腺病毒Ad-HA+Ad-M2免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔14d。第1、3次用DNA疫苗,第2、4次用重组腺病毒载体疫苗,每次免疫前及末次免疫后14d采集血清用于检测体液免疫应答,末次免疫后14d采集脾淋巴细胞用于检测细胞免疫应答。血凝抑制(HI)实验检测到免疫后小鼠血清中的HI活性。ELISA实验检测到免疫后小鼠血清中抗H5N1亚型流感病毒表面蛋白的IgG抗体。ELISPOT实验检测到免疫后小鼠针对M2蛋白和HA蛋白的特异性细胞免疫应答。流感病毒M2与HA双基因共免疫的研究,为研究开发新型重组流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 h5N1亚型流感病毒 基质蛋白2 血凝素 联合免疫
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H1亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测H1抗原方法的建立 被引量：1
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作者 谢志勤 谢芝勋 +16 位作者 张艳芳 范晴 张民秀 罗思思 谢丽基 黄娇玲 王盛 曾婷婷 李孟 李丹 邓显文 韦悠 万丽军 阮志华 李小凤 任红玉 刘加波 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1106-1112,共7页
用禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Guangxi/90C/2011(H1N2)毒株制备单克隆抗体(McAb)并建立夹心ELISA检测H1亚型AIV。AIV 90C/2011(H1N2)毒株经纯化灭活后免疫BALB/c小鼠,取第5次免疫3 d后的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用4 U的H1抗原... 用禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Guangxi/90C/2011(H1N2)毒株制备单克隆抗体(McAb)并建立夹心ELISA检测H1亚型AIV。AIV 90C/2011(H1N2)毒株经纯化灭活后免疫BALB/c小鼠,取第5次免疫3 d后的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用4 U的H1抗原经血凝抑制试验(HI)筛选效价高的杂交瘤细胞株并经3次亚克隆,最终获得抗体分泌高且稳定的杂交瘤细胞株。分泌的抗体经H1 HI、Western-blot和间接免疫荧光检测进行验证,并用于建立夹心ELISA方法检测H1 AIV。经融合细胞筛选,获得4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用其中一株7B9制备单克隆抗体,分泌抗体效价达1∶512,其抗体类型经鉴定为Ig G1。用制备的单抗建立夹心ELISA方法检测H1 AIV,测定其阴阳判定值为0.2714。特异性试验显示,检测的H1 AIV毒株D450值均大于0.2714,对照的其他AIV毒株以及新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒毒株的D450值均小于0.2714。敏感性测试最低能检测出10^(-5)稀释的HA效价的H1 AIV。本试验建立的基于McAb的H1 AIV夹心ELISA检测方法特异性好,敏感。 展开更多
关键词 h1亚型禽流感病毒 单克隆抗体 夹心ELISA 检测
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