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猪CD151重组抗原表达及其免疫血清的PRRSV感染抑制作用 被引量：4
1
作者 张钰 孙怀昌 +2 位作者 黄燕燕 张鑫宇 夏晓莉 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期1-5,10,共6页
用RT-PCR从猪巨噬细胞中扩增CD151胞外区编码序列,将其插入含细胞毒性T细胞相关抗原4胞外区序列的表达载体,重组载体转化大肠杆菌,SDS-PAGE检测重组蛋白表达;用包涵体纯化和尿素变性与复性法获得可溶性蛋白,纯化蛋白免疫小鼠,ELISA测定... 用RT-PCR从猪巨噬细胞中扩增CD151胞外区编码序列,将其插入含细胞毒性T细胞相关抗原4胞外区序列的表达载体,重组载体转化大肠杆菌,SDS-PAGE检测重组蛋白表达;用包涵体纯化和尿素变性与复性法获得可溶性蛋白,纯化蛋白免疫小鼠,ELISA测定免疫血清抗体效价,Western-blot验证免疫血清特异性;以处理细胞或处理病毒方式,用免疫血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染抑制试验。结果表明:重组菌表达预期的32ku重组蛋白,获得的可溶性重组蛋白纯度较高;免疫血清抗体效价达1∶170 000,在猪巨噬细胞中能检测到预期的29ku蛋白,能抑制PRRSV感染MARC-145细胞,但有毒株差异性,处理病毒的感染抑制作用较强。结果提示猪CD151免疫血清能以结合细胞和结合病毒方式抑制PRRSV感染。 展开更多
关键词 猪cd151 重组抗原 免疫血清 PRRSV 感染抑制
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猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性
2
作者 黄燕燕 郭睿 +3 位作者 张钰 张鑫宇 夏晓莉 孙怀昌 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期507-514,共8页
【目的】建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)易感的猪CD151转基因PK-15细胞系,研究CD151分子在PRRSV感染猪源细胞中的作用。【方法】用RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151全长cDNA... 【目的】建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)易感的猪CD151转基因PK-15细胞系,研究CD151分子在PRRSV感染猪源细胞中的作用。【方法】用RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151全长cDNA,测序正确后克隆入真核表达载体pcDNA3;用重组载体pcDNA-CD151转染PK-15细胞,经G418抗性筛选获得转基因细胞系PK15-CD151,用RT-PCR和免疫荧光试验检测CD151表达;用VR-2332株PRRSV分别感染PK-15细胞、PK15-CD151细胞、MARC-145细胞和3D4-CD163细胞,定期观察细胞病变,用RT-PCR和免疫荧光试验检测病毒RNA基因组和病毒抗原,用半数组织细胞感染剂量测定病毒滴度。【结果】从猪巨噬细胞中克隆得序列正确的猪CD151 cDNA;从重组载体转染的PK-15细胞培养中筛选得G418抗性细胞克隆,并能正确表达猪CD151分子;在PRRSV感染后,PK15-CD151细胞虽然不表现明显的细胞病变,但能检测到病毒RNA基因组和病毒抗原,并能产生较高滴度的感染性病毒;该细胞系已在体外传30代以上,第10、20、30代细胞的PRRSV滴度无明显变化。【结论】猪CD151基因转染能使非易感PK-15细胞获得对PRRSV的易感性,提示猪CD151参与PRRSV感染猪源细胞。 展开更多
关键词 猪cd151 转基因细胞系 猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒
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猪CD151基因的克隆及过表达细胞系的构建
3
作者 樊爽爽 杜丽丽 +4 位作者 郭珍珍 鲁绍芳 曾磊 王江 杨国宇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期33-38,50,共7页
猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）主要感染猪肺泡巨噬细胞，但对猪源的其他细胞系不易感。本试验通过构建PK15-CD151和3D4／21-CD151过表达细胞系，为深入研究PRRSV感染宿主细胞... 猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）主要感染猪肺泡巨噬细胞，但对猪源的其他细胞系不易感。本试验通过构建PK15-CD151和3D4／21-CD151过表达细胞系，为深入研究PRRSV感染宿主细胞的机制奠定基础。应用分子生物学方法、实时荧光定量PCR和荧光显微镜技术，对基因CD151在组织中的分布情况进行检测、基因克隆、真核表达载体的构建、对CD151在PK15和3D4／21细胞内的过表达情况，以及对细胞生长增殖的影响进行了研究。结果显示：CD151基因在不同组织内均有表达，但表达量有差异；PB真核表达载体构建成功，荧光显微镜下可见转染PB载体和CD151基因共转染的PK15和3D4／21细胞表达强烈的绿色荧光，实时荧光定量PCR分析结果进一步证实，CD151在转染后的细胞中获得超表达，并且对细胞的生长增殖无影响。本试验成功构建了PK15-CD151和3D4／21-CD151过表达细胞系，过表达细胞系的成功构建为进一步探索CD151在PRRSV感染细胞过程中的协同作用提供了细胞模型，特别是对深入研究PRRSV的入侵及宿主识别具有重要意义。 展开更多
关键词 PRRSV 猪cd151 基因克隆 载体构建 PK15和3D4/21细胞 真核表达
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