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猪圆环病毒2型与猪细小病毒共感染对猪肺泡巨噬细胞吞噬功能及其干扰素表达水平的影响 被引量：13
1
作者 刘祥义 陈立功 +5 位作者 宋勤叶 杨芳 李艳琴 左玉柱 焦健达 王秀平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期105-114,共10页
【目的】分析猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)共感染对猪肺泡巨噬细胞(PAM)吞噬功能及其干扰素表达水平的影响,为进一步阐明猪断奶后多系统衰减综合征的发病机制提供实验依据。【方法】将48头5周龄健康仔猪随机分为PCV2组、PPV组... 【目的】分析猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)共感染对猪肺泡巨噬细胞(PAM)吞噬功能及其干扰素表达水平的影响,为进一步阐明猪断奶后多系统衰减综合征的发病机制提供实验依据。【方法】将48头5周龄健康仔猪随机分为PCV2组、PPV组、PCV2/PPV组和对照组,每组12头。PCV2和PPV组经口鼻途径分别接种PCV2或PPV,PCV2/PPV组同时接种PCV2和PPV,对照组接种细胞营养液。感染后3、7、14和35d(dpi)从每组随机选择3头剖杀,检测PAM的存活率、吞噬活性及其α1型干扰素(IFN-α1)、γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达水平。【结果】PCV2组和PCV2/PPV组PAM的存活率于3、7、14dpi均低于对照组,35dpi均与对照组PAM的存活率接近,PCV2与PCV2/PPV两组之间差异不显著(P>0.05);3个病毒感染组PAM的吞噬功能均显著下降(P<0.01),其中PCV2/PPV组的吞噬功能低于PCV2组(P<0.05);PCV2/PPV组PAM中IFN-α1和IFN-γ mRNA的水平持续低于PCV2、PPV组和对照组的水平(P<0.01)。【结论】PCV2与PPV共感染没有引起PAM的活力进一步下降,但导致其吞噬功能及IFN-α1和IFN-γmRNA的表达水平持续降低。 展开更多
关键词 PCV2 PPV 共感染 猪肺泡巨噬细胞 吞噬功能 干扰素 猪
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PRRSV与PCV2体外共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫学功能的影响 被引量：12
2
作者 冯志新 姜平 +1 位作者 王先炜 李玉峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期950-955,共6页
制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和... 制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和PCV2滴度,INF-α、INF-γ、TNF-α、IL-8和IL-10的mRNA。结果为:①PRRSV能在PAM中增殖,有CPE;PCV2在PAM中感染率较低,无CPE。②PRRSV对PCV2增殖无明显影响。PCV2先于或同时与PRRSV感染对PRRSV的复制具有抑制作用,而PCV2后于PPRSV感染,可促进PRRSV增殖。③PCV2单独感染PAM后能促进INF-α、INF-γ、IL-8和IL-10的大量表达,对TNF-α的表达量影响不大。④PCV2与PRRSV混合感染,尤其是PCV2后于PRRSV感染后,TNF-α、IL-8和IL-10的表达量与单感染组相比明显增加,而INF-γ的表达量明显受到抑制。实验结果表明,PCV2感染时间对PRRSV的增殖影响不同,PRRSV感染后如果再感染PCV2,可以明显促进PRRSV病毒增殖;两种病毒共同刺激了TNF-α、IL-8和IL-10的大量表达,抑制了抗病毒因子INF-γ的表达,从而可能抑制体液免疫和细胞免疫,加重了病理学免疫应答。 展开更多
关键词 PRRSV PCV2 共感染 猪肺泡巨噬细胞 免疫学功能
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脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响 被引量：11
3
作者 冯丽丽 张丽萍 +4 位作者 张改平 乔松林 田晓辉 万博 王秋霞 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第3期106-109,共4页
研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，... 研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明，脂多糖浓度（1-1000ng／mL）对IL-1β、TNF-α影响显著（P％0．05）；刺激时间（1-24h）对IL-1β、TNF-α影响显著（P〈0．05），且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。 展开更多
关键词 脂多糖 猪肺泡巨噬细胞 白细胞介素-1Β 肿瘤坏死因子-Α
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响 被引量：9
4
作者 磨美兰 杨汉春 +4 位作者 郭鑫 吕艳丽 周双海 陈艳红 查振林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期568-573,共6页
采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM... 采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM的SLA-DR mRNA转录水平在3、7和14 d下调,低于对照组;感染后3 d,Ii链、SLA-DM和CD40的mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);CD80和CD86mRNA转录水平也在感染后3 d明显下调(P<0.05)。用流式细胞术检测PAM表面的SLA-DR抗原的结果表明,在感染后3 d短暂上升,7 d之后一直低于对照组。由此说明,PRRSV感染早期对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能产生显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降,进而影响机体的体液免疫应答。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺泡巨噬细胞 抗原加工和递呈相关分子 共刺激分子 定量竞争PCR
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猪鼻支原体与猪地方性肺炎 被引量：10
5
作者 王占伟 熊琪琰 邵国青 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1036-1039,共4页
猪鼻支原体(Mhr)是小猪呼吸道的常在菌,在猪群中的检出率很高,可引起猪发生肺炎、多浆膜炎、关节炎和中耳炎,一定程度上影响了猪的生长和生产性能,并可继发其它病原感染,加重呼吸道症状。Mhr也是细胞培养的常见污染物和多种癌症的诱发... 猪鼻支原体(Mhr)是小猪呼吸道的常在菌,在猪群中的检出率很高,可引起猪发生肺炎、多浆膜炎、关节炎和中耳炎,一定程度上影响了猪的生长和生产性能,并可继发其它病原感染,加重呼吸道症状。Mhr也是细胞培养的常见污染物和多种癌症的诱发因素。Mhr引起猪肺炎的机理除了在病理变化方面有介绍外,其深层次的机制还未见报道,其在呼吸道移行及诱导全身性疾病的机制也不清楚。本文将从猪地方性肺炎(SEP)及主要致病原、可能的致病机理和研究方法方面进行阐述Mhr肺炎,为该病的研究和防治提供新思路与新手段,同时也为Mhr和其它病原共感染的研究提供借鉴。 展开更多
关键词 猪鼻支原体 猪地方性肺炎 猪肺泡巨噬细胞 体外感染 致病机理
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PCV2通过NF-κB/NLRP3信号通路调控体外培养PAMs分泌IL-1β 被引量：7
6
作者 李海花 张蕾 +3 位作者 杨春蕾 赵向华 乔家运 王文杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2366-2372,共7页
为探讨猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)产生白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的分子机制,试验选取2头PCV2和PRRSV抗原、抗体均为阴性的6周龄普通仔猪,无菌分离P... 为探讨猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)产生白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的分子机制,试验选取2头PCV2和PRRSV抗原、抗体均为阴性的6周龄普通仔猪,无菌分离PAMs,以体外培养的PAMs为研究对象,采用ELISA方法检测PAMs培养上清液中IL-1β的生成,采用实时荧光定量PCR方法检测PAMs中NLRP3和凋亡相关点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)的mRNA表达水平,分别用小干扰RNA(siRNA)方法和核因子-kappa B(NF-κB)抑制试验分析NLRP3和NF-κB对PCV2诱导PAMs产生IL-1β的调控作用。结果显示,PCV2感染PAMs后能够显著或极显著增加IL-1β、NLRP3(1h除外)和ASC(1、3h除外)的生成(P<0.05;P<0.01)。siRNA能使58.3%的NLRP3基因沉默,且NLRP3沉默后PCV2诱导PAMs产生IL-1β的水平显著下降(P<0.05)。NF-κB被抑制后PCV2诱导PAMs产生IL-1β的水平也明显下降。结果表明,PCV2通过NF-κB/NLRP3信号通路调控体外培养PAMs分泌IL-1β。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪肺泡巨噬细胞 白细胞介素-1Β 核因子-KAPPA B NLRP3
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慢病毒载体介导稳定表达CD163的PAM细胞系的建立及对PRRSV感染的研究 被引量：7
7
作者 王向鹏 魏蕊芳 +1 位作者 肖书奇 周恩民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1797-1804,共8页
本研究旨在通过慢病毒载体系统将猪源CD163转染入永生化的猪肺泡巨噬细胞(PAM)系(CRL-2843),建立稳定表达CD163的PAM细胞系(PAM-CD163)及验证该细胞系对PRRSV的易感性。用PCR方法从pJET1.2-CD163载体上扩增CD163基因编码区,通过酶切连... 本研究旨在通过慢病毒载体系统将猪源CD163转染入永生化的猪肺泡巨噬细胞(PAM)系(CRL-2843),建立稳定表达CD163的PAM细胞系(PAM-CD163)及验证该细胞系对PRRSV的易感性。用PCR方法从pJET1.2-CD163载体上扩增CD163基因编码区,通过酶切连接构建慢病毒表达载体pTrip-CMV-CD163-IRESpur。将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293-T细胞,包装表达CD163的慢病毒。将收获的慢病毒在Polybrene的介导下转导至永生化PAM细胞,采用嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法筛选出稳定表达CD163的PAM细胞系。应用得到的细胞系进行PRRSV感染试验。经过RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western blot和流式细胞术试验证实,筛选出1株能稳定表达CD163的PAM细胞系,命名为PAM-CD163。该株细胞对PRRSV高度易感,PRRSV在PAM-CD163细胞上的毒价可以达到105.0 TCID50·mL-1以上。建立了稳定表达CD163的PAM细胞系,可以用于PRRSV的分离培养和细胞受体的研究。 展开更多
关键词 CD163 慢病毒载体 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺泡巨噬细胞
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葛根素对PEDV感染幼龄仔猪肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结抗氧化功能和免疫功能的影响
8
作者 胡玉妍 王倩 +4 位作者 谌梦 王蕾 赵迪 张倩 侯永清 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期383-390,共8页
本试验采用体内和体外相结合的研究方法,分别利用7日龄仔猪和猪肺泡巨噬细胞3D4/21为研究对象,研究葛根素(Puerarin,PR)对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染仔猪肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的抗氧化能力和免疫... 本试验采用体内和体外相结合的研究方法,分别利用7日龄仔猪和猪肺泡巨噬细胞3D4/21为研究对象,研究葛根素(Puerarin,PR)对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染仔猪肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的抗氧化能力和免疫功能的影响及机理。分别将30头7日龄仔猪和猪肺泡巨噬细胞分为Control组、PEDV组和PEDV+PR组。结果显示:与Control组相比,PEDV感染降低脾脏和肠系膜淋巴结谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的酶活(P<0.05),升高脾脏和肠系膜淋巴结丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)(P<0.05)。PR干预后降低了仔猪肠系膜淋巴结MDA含量、MPO活力(P<0.05),提高肠系膜淋巴结GSH-Px酶活(P<0.05)。PEDV感染上调肠系膜淋巴结和肺脏泛素样蛋白(ISG15)的相对表达量(P<0.05),下调仔猪肠系膜淋巴结鸟苷酸结合蛋白(GBP2)以及脾脏和肺脏白细胞介素10(IL-10)、GBP2的相对表达量(P<0.05)。PR干预后上调脾脏和肺脏IL-10、GBP2、抗黏病毒蛋白1(Mx1)、ISG15的相对表达量(P<0.05),下调肠系膜淋巴结病毒基因和Mx1、ISG15的相对表达量(P<0.05)。转录组结果显示PEDV组和Control组之间的差异表达基因(DEGs)主要富集在天然免疫相关的生物过程。PR干预PEDV的DEGs主要富集在脂代谢相关的生物过程。以上结果表明,PR可以抑制PEDV在肠系膜淋巴结中的复制,降低PEDV诱导的肠系膜淋巴结的氧化应激,影响免疫基因的表达。PR干预可影响PEDV感染3D4/21细胞的脂代谢过程。本研究为指导PR在仔猪PEDV防控中的应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 葛根素 猪流行性腹泻病毒 仔猪 猪肺泡巨噬细胞 免疫器官 抗氧化功能 免疫功能
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博落回提取物对副猪嗜血杆菌诱导的猪肺泡巨噬细胞炎症反应及信号通路影响的研究 被引量：5
9
作者 曾泽 张华琦 桂干北 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期875-880,共6页
博落回(M.cordata)是一种常用的中药,具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗菌、杀虫和抗肿瘤等多种生物学活性。为了探究博落回提取物对副猪嗜血杆菌(G.parasuis)诱导的猪肺泡巨噬细胞(PAM)炎症反应及NF-κB和MAPK信号通路的影响,本研究采用12.... 博落回(M.cordata)是一种常用的中药,具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗菌、杀虫和抗肿瘤等多种生物学活性。为了探究博落回提取物对副猪嗜血杆菌(G.parasuis)诱导的猪肺泡巨噬细胞(PAM)炎症反应及NF-κB和MAPK信号通路的影响,本研究采用12.5 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL和200 ng/mL的博落回提取物分别预处理PAM 4 h,再利用1×107 cfu/mL副猪嗜血杆菌刺激PAM 12 h。以博落回提取物溶剂(TSB培养液)预处理PAM再感染副猪嗜血杆菌作为感染对照组。分别提取各组细胞的RNA和蛋白质,将RNA反转录成cDNA作为模板,采用qRT-PCR检测各组细胞中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的转录水平。通过western blot检测各组细胞中NF-κB信号通路蛋白p65、p-p65、IκBα和p-IκBα及MAPK信号通路蛋白JNK、p-JNK、ERK、p-ERK、p38和p-p38的表达量。结果显示,与空白对照组相比,感染对照组细胞炎性因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的转录水平均显著升高(P<0.05),而不同浓度博落回提取物预处理均能够显著抑制副猪嗜血杆菌诱导炎性细胞因子mRNA的转录水平(P<0.05),且与博落回提取物的浓度呈正相关。Western blot结果显示,与空白对照组相比,感染对照组NF-κB信号通路蛋白p-p65和p-IκBα及MAPK信号通路蛋白p-JNK、p-ERK和p-p38的表达水平均显著升高(P<0.05),而不同浓度的博落回提取物预处理后均能够显著抑制副猪嗜血杆菌诱导的p-p65、p-IκBα、p-JNK、p-ERK和p-p38蛋白的表达水平(P<0.05),且基本与博落回提取物的浓度呈正相关;各组细胞中NF-κB信号通路蛋白p65和IκBα及MAPK信号通路蛋白JNK、ERK和p38的表达水平均无显著差异。本研究首次证实博落回提取物通过抑制PAM中NF-κB和MAPK信号通路的活化从而抑制副猪嗜血杆菌诱导PAM的炎性反应,为副猪嗜血杆菌病的防治提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 博落回提取物 猪肺泡巨噬细胞 副猪嗜血杆菌 炎性细胞因子 NF-ΚB信号通路 MAPK信号通路
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猪肺炎支原体对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原递呈加工功能相关因子mRNA表达量的影响 被引量：6
10
作者 王贵平 李君佩 +2 位作者 罗广 李晓云 贾杏林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2101-2107,共7页
将从健康仔猪分离到的猪肺泡巨噬细胞(PAM)分别按1∶10、1∶3和1∶1的比例与猪肺炎支原体(Mhp)232株共同孵育。在孵育12h后收获PAM,用qPCR检测PAM中MHCⅡ分子mRNA表达量,确定PAM和Mhp的最佳孵育比(ROI)。将PAM和Mhp按ROI比例混合孵育(... 将从健康仔猪分离到的猪肺泡巨噬细胞(PAM)分别按1∶10、1∶3和1∶1的比例与猪肺炎支原体(Mhp)232株共同孵育。在孵育12h后收获PAM,用qPCR检测PAM中MHCⅡ分子mRNA表达量,确定PAM和Mhp的最佳孵育比(ROI)。将PAM和Mhp按ROI比例混合孵育(试验组),用等体积的10%RPMI-1640液代替Mhp与PAM孵育作为对照组。分别在孵育后12,24,36,48h收获试验组和对照组的PAM。用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PAM中与外源性抗原加工递呈功能相关分子MHCⅡ、SLA-DM、Li和CD86、TLR2和TLR6 mRNA表达量,分析Mhp感染对PAM外源性杭原递呈功能的影响。结果显示:相关因子MHCⅡ、SLA-D、Li、CD86和TLR6在Mhp感染PAM 12h后,mRNA表达量升高(17~380倍);感染24h后降至对照组表达水平的0.043~0.391倍;感染36h后极大地降低;感染后48h全部检测不出。TLR2因子mRNA表达量在Mhp感染12h后降至对照组的0.767倍,感染24h后全部全部检测不出。从检测结果可以看出,Mhp感染早期(12h)可以引起PAM抗原递呈功能相关因子mRNA表达量增加;感染晚期(24h以后)会抑制PAM的外源性抗原递呈加工功能相关因子mRNA表达量。结果表明:Mhp感染早期,动物机体可以通过PAM导致免疫增强,后期会引起免疫抑制。本试验探索了Mhp对PAM外源性抗原加工递呈功能相关因子mRNA表达量影响,为进一步研究Mhp致病机理提供了有益的参考。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 猪肺泡巨噬细胞 外源性抗原递呈加工 MRNA表达量
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桑叶多糖对猪肺泡巨噬细胞的免疫调节作用
11
作者 韩辰淼 王靖萱 +2 位作者 杨海峰 陈晓兰 卜仕金 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3643-3651,共9页
[目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞... [目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞分成空白对照组(BC组)、阳性对照组(LPS组)和不同浓度MLP组,通过Griess法检测猪肺泡巨噬细胞中一氧化氮(NO)释放量;利用中性红吞噬试验检测猪肺泡巨噬细胞吞噬能力;使用ELISA法测定猪肺泡巨噬细胞中白细胞介素-10(IL-10)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测TNF-α、Toll样受体4(TLR4)、IL-6、IL-10以及核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量;通过Western blotting检测猪肺泡巨噬细胞中TLR4和p65蛋白表达量。[结果]与0μg/mL MLP组相比,MLP浓度为20、40和80μg/mL时猪肺泡巨噬细胞增殖率极显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性,后续选择20、40和80μg/mL MLP进行试验。与BC组相比,不同浓度MLP组猪肺泡巨噬细胞吞噬率和NO释放量极显著升高(P<0.01)。ELISA检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中IL-6和TNF-α含量显著或极显著高于BC组(P<0.05;P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,MLP浓度为40和80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6和TLR 4基因mRNA表达量均极显著高于BC组(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中p65和TLR4蛋白表达量极显著高于BC组(P<0.01)。[结论]MLP能激活猪肺泡巨噬细胞,显著促进NO的释放以及IL-6、TNF-α的分泌,具有良好的免疫调节活性,其免疫调节机制与巨噬细胞表面TLR4的激活相关。 展开更多
关键词 桑叶多糖 猪肺泡巨噬细胞 免疫调节 细胞因子
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两株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定 被引量：6
12
作者 邓跃 谭菲菲 +5 位作者 王娟 常亚飞 陈喜波 王同燕 李向东 田克恭 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期50-55,共6页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称为"猪蓝耳病",是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪传染性疾病。本研究将采... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称为"猪蓝耳病",是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪传染性疾病。本研究将采集到的2份疑似患有PRRS的流产胎儿的肺组织研磨后离心,取上清液接种猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)盲传3代。通过RT-PCR方法和间接免疫荧光方法,对组织样品及细胞培养物进行了鉴定和分型。结果显示本研究成功从2份样品中分离到了类NADC30,且该毒株可以在PAM细胞上增殖。该研究结果为研究类NADC30毒株的重组机制、致病情况及研制预防疫苗提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 类NADC30 猪肺泡巨噬细胞
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非洲猪瘟病毒MGF360-9L蛋白多克隆抗体的制备及其对病毒复制的影响 被引量：5
13
作者 杨博 申超超 +10 位作者 张婷 郝雨 杨金柯 崔卉梅 赵登率 袁兴国 陈学辉 鲍恩东 张克山 郑海学 刘湘涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期324-332,共9页
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF360-9L蛋白的多克隆抗体并评价其对病毒复制的影响,使用DNAStar 2.1软件预测MGF360-9L的抗原表位,选择并合成了符合抗原要求的MGF360-9L C端多肽CKNLSIAHKHYINDGFND,制备MGF360-9L家兔源多克隆抗体。随后采... 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF360-9L蛋白的多克隆抗体并评价其对病毒复制的影响,使用DNAStar 2.1软件预测MGF360-9L的抗原表位,选择并合成了符合抗原要求的MGF360-9L C端多肽CKNLSIAHKHYINDGFND,制备MGF360-9L家兔源多克隆抗体。随后采用实时荧光定量PCR方法、血细胞吸附试验和Western-blot方法等评价MGF360-9L的多克隆抗体对病毒复制的影响。结果显示,不同稀释倍数的MGF360-9L多克隆抗体在不同感染时间下均可显著降低病毒的拷贝数、效价以及D1133L和B646L(p72)两种病毒蛋白的表达,并且抗体稀释度越低,降低病毒拷贝数、效价以及病毒蛋白表达的作用越强。此外,不同稀释倍数的MGF360-9L多克隆抗体均可抑制感染重组病毒ASFV-GFP的猪肺泡巨噬细胞中绿色荧光蛋白的产生。结果表明,与阴性家兔血清相比,不同稀释倍数的MGF360-9L抗体均可显著抑制ASFV的复制。本研究为ASFV靶向药物和疫苗的研发提供了参考依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 MGF360-9L蛋白 多克隆抗体 抗体功能 猪肺泡巨噬细胞
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猪圆环病毒2型体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞的炎症相关细胞因子mRNA转录分析 被引量：5
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作者 汪伟 王小敏 +2 位作者 何孔旺 温立斌 倪艳秀 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期1225-1228,共4页
通过PCV2病毒感染3D4/21猪肺泡巨噬细胞后炎症相关细胞因子mRNA转录水平变化,探讨PCV2感染后可能的致病途径。通过PCV2病毒体外接种3D4/21细胞,感染不同时间后,收集样品,采用荧光定量PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-8及IL-18mRNA转录水... 通过PCV2病毒感染3D4/21猪肺泡巨噬细胞后炎症相关细胞因子mRNA转录水平变化,探讨PCV2感染后可能的致病途径。通过PCV2病毒体外接种3D4/21细胞,感染不同时间后,收集样品,采用荧光定量PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-8及IL-18mRNA转录水平的变化。结果显示PCV2对3D4/21细胞的IL-1β、IL-8转录主要起抑制作用,对IL-8转录起促进作用。推测其在体内的综合效应导致感染早期机体抗病毒能力降低,引起机体免疫抑制,影响机体特异性免疫应答的正常运转,为PCVD的发病创造了条件。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪肺泡巨噬细胞 炎症相关细胞因子 荧光定量PCR
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甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞氧化应激的影响 被引量：4
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作者 杨裕 关文超 +2 位作者 崔小珍 贾永鑫 YANGShiyu 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期480-487,共8页
【目的】探究甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞引发的氧化应激的影响,为开发治疗副猪嗜血杆菌感染的新型药物提供参考。【方法】利用支气管肺泡灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞,分为6组:阴性对照组,未感染副猪嗜血杆菌的猪肺泡巨... 【目的】探究甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞引发的氧化应激的影响,为开发治疗副猪嗜血杆菌感染的新型药物提供参考。【方法】利用支气管肺泡灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞,分为6组:阴性对照组,未感染副猪嗜血杆菌的猪肺泡巨噬细胞;阳性对照组,感染副猪嗜血杆菌的猪肺泡巨噬细胞;DMSO组,猪肺泡巨噬细胞感染副猪嗜血杆菌后给予0.1%DMSO;5、10和20μg/mL甘草查尔酮A组,猪肺泡巨噬细胞感染副猪嗜血杆菌后给予相应浓度的甘草查尔酮A。各组细胞培养24 h后,用CCK-8法检测细胞活力,用酶标仪或可见光分光光度计检测各组细胞上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)水平,用活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光探针(DCFH-DA)检测ROS水平。【结果】与阴性对照组相比,副猪嗜血杆菌感染组猪肺泡巨噬细胞活力均显著降低(P<0.05),上清液中LDH活性均显著提高(P<0.05),MDA、NO、ROS水平及SOD活性均显著增加(P<0.05);与阳性对照组相比,5、10和20μg/mL甘草查尔酮A组猪肺泡巨噬细胞活力均显著提高(P<0.05),上清液LDH活性均显著降低(P<0.05),10和20μg/mL甘草查尔酮A组MDA、NO和ROS水平均显著降低(P<0.05);5、10和20μg/mL甘草查尔酮A处理组GSH-Px、SOD和T-AOC活性均呈剂量依赖性显著升高(P<0.05)。【结论】副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞导致氧化和抗氧化平衡失调,5~20μg/mL甘草查尔酮A可以降低细胞氧化应激反应。 展开更多
关键词 甘草查尔酮A 副猪嗜血杆菌 猪肺泡巨噬细胞 氧化应激
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猪舍空气细颗粒物对猪肺泡巨噬细胞精氨酸代谢和糖酵解的影响 被引量：1
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作者 沈家鲲 周子琳 +2 位作者 沈丹 刘俊泽 李春梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期747-755,共9页
[目的]本试验旨在探究猪舍空气细颗粒物(PM_(2.5))对猪肺泡巨噬细胞极化相关的精氨酸代谢和糖酵解以及TLR4-NF-κB信号通路的影响。[方法]选用猪肺泡巨噬细胞系(3D4/21)作为细胞模型,设置不同质量浓度(0、25、50和100μg·mL^(-1))... [目的]本试验旨在探究猪舍空气细颗粒物(PM_(2.5))对猪肺泡巨噬细胞极化相关的精氨酸代谢和糖酵解以及TLR4-NF-κB信号通路的影响。[方法]选用猪肺泡巨噬细胞系(3D4/21)作为细胞模型,设置不同质量浓度(0、25、50和100μg·mL^(-1))的PM2.5和不同处理时间(4、8、12、16、20和24 h)处理细胞,收集细胞测定精氨酸代谢、糖酵解以及TLR4-NF-κB信号通路相关指标。[结果]PM_(2.5)处理细胞12 h后,细胞上清液中一氧化氮(NO)浓度随PM2.5处理浓度的升高而逐渐上升,当PM_(2.5)浓度大于50μg·mL^(-1)时,NO浓度极显著升高(P<0.01)。以50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理细胞培养不同时间,发现PM_(2.5)处理16 h内细胞上清液中NO浓度逐渐升高;随着细胞处理时间的延长,PM_(2.5)对细胞的影响逐渐减轻。此外,不同浓度PM_(2.5)处理12 h,细胞内精氨酸酶活性降低,其中,50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理组与对照组相比差异极显著(P<0.01)。同时,随着PM_(2.5)浓度的升高,细胞内乳酸生成量/葡萄糖消耗量(L/G)值升高(P<0.05),标志着细胞内葡萄糖向乳酸转化的比率增高,糖酵解相关基因GLUT-1和GAPDH mRNA表达水平显著提高(P<0.05);100μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理显著提高了细胞内IL-1β mRNA表达水平(P<0.01);50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理后M2巨噬细胞标志物CD206 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),100μg·mL^(-1)PM_(2.5)显著增加细胞TLR4和MyD88 mRNA表达水平(P<0.05)和p-p65蛋白表达水平(P<0.05),激活TLR4-NF-κB信号通路。[结论]猪舍空气PM_(2.5)能够诱导猪肺泡巨噬细胞发生炎症反应,促进细胞内精氨酸和葡萄糖代谢向M1表型特征的代谢转换。 展开更多
关键词 细颗粒物(PM_(2.5)) 猪肺泡巨噬细胞 巨噬细胞极化 精氨酸代谢 糖酵解 p-p65蛋白
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基于CRISPR/Cas9技术构建STING基因敲除猪肺泡巨噬细胞系及其对Ⅰ型干扰素转录的影响 被引量：4
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作者 黄秋艳 杨烨城 +5 位作者 张昆丽 孟繁明 李剑豪 朱向星 王塑天 唐冬生 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期891-898,共8页
【目的】阐明干扰素基因刺激因子(STING)在猪抗病原微生物感染中的作用机制,为猪传染性胃肠炎、流行性腹泻和猪伪狂犬病等病毒性疾病的科学防控提供参考依据。【方法】基于CRISPR/Cas9技术,在STING基因第4、第8外显子中寻找高分靶点并设... 【目的】阐明干扰素基因刺激因子(STING)在猪抗病原微生物感染中的作用机制,为猪传染性胃肠炎、流行性腹泻和猪伪狂犬病等病毒性疾病的科学防控提供参考依据。【方法】基于CRISPR/Cas9技术,在STING基因第4、第8外显子中寻找高分靶点并设计sgRNA序列,将退火的sgRNA与酶切的LentiCRISPRv2载体用T4 DNA连接酶连接以获得LentiCRISPRv2-STING-sgRNA慢病毒载体(STING-sgRNA);以不同的STING-sgRNA慢病毒载体组合及包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染293T细胞,得到含sgRNA的慢病毒再转染3D4/21细胞;经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆细胞株,通过PCR、测序及Western blotting鉴定STING基因的敲除效果;并采用实时荧光定量PCR验证STING基因敲除对I型干扰素表达的影响。【结果】以不同的STING-sgRNA慢病毒载体组合与HA-STING过表达载体共同转染293T细胞,均能在细胞内对STING真核表达载体产生编辑效果,且以STING-sgRNA(1+5)慢病毒载体组合的编辑效率最高。以编辑效率最高的STING-sgRNA(1+5)慢病毒载体组合及包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染293T细胞包装出慢病毒,再用慢病毒感染3D4/21细胞,结果获得1株STING基因大片段(4989 bp)缺失的3D4/21细胞株,Western blotting检测未发现STING蛋白,说明STING基因敲除3D4/21细胞(3D4/21-STING-/-)构建成功。与野生型3D4/21细胞相比,在转染副猪嗜血杆菌DNA刺激下,3D4/21-STING-/-细胞中的IFN-β基因转录水平显著降低(P<0.05)。【结论】采用CRISPR/Cas9技术能成功大片段敲除3D4/21细胞中的STING基因,而导致STING基因功能丧失;STING基因敲除会导致细胞在病原微生物DNA刺激时Ⅰ型干扰素转录障碍,也提示STING基因可能是猪抗病原微生物感染的关键因子。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 STING基因 猪肺泡巨噬细胞 基因敲除 Ⅰ型干扰素
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猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定 被引量：5
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作者 杨达汉 邓守全 +5 位作者 王哲 王丰 薛江东 刘锴 霍晓伟 马德慧 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期632-636,642,共6页
为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)蛋白质间相互的作用,本研究使用SMART技术成功构建了猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文... 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)蛋白质间相互的作用,本研究使用SMART技术成功构建了猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库。首先提取PAM总RNA,使用SMART RACE法经LD PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,通过同源重组的方法将双链cDNA与pGADT7-Rec质粒共转化进酵母Y187感受态,再利用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选阳性克隆,最终构建的文库滴度达到了6.96×10~7 CFU/mL,重组率初步计算达到95%,插入片段范围在200~2 000bp。本研究为PRRSV致病蛋白的筛选以及相关疾病的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪肺泡巨噬细胞 PRRSV SMART技术 酵母双杂交cDNA文库 同源重组
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猪繁殖与呼吸综合征病毒对体外培养的猪肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的动态影响 被引量：5
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作者 贾文思 郭华 +4 位作者 刘子臣 赵情梅 徐嘉萍 陈萌萌 张书霞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期707-712,共6页
为了解猪肺泡巨噬细胞(PAMs)感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)后产生主要细胞因子的变化,阐明PRRS的发病机制,选取PRRSV和猪圆环病毒2型抗原和抗体均为阴性的普通断奶仔猪,分离和培养PAMs,分为试验组和对照组,试验组PAMs用PRRSV感染,... 为了解猪肺泡巨噬细胞(PAMs)感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)后产生主要细胞因子的变化,阐明PRRS的发病机制,选取PRRSV和猪圆环病毒2型抗原和抗体均为阴性的普通断奶仔猪,分离和培养PAMs,分为试验组和对照组,试验组PAMs用PRRSV感染,对照组PAMs加等量的细胞培养液,并于感染后第0、6、12、24和36小时收集培养上清液,用间接免疫荧光法检测PRRSV感染PAMs的情况,用猪特异的ELISA试剂盒测定TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的动态变化。结果显示,感染后第6小时PAMs中就能见到PRRSV,并随着感染时间的延长,病毒量逐渐增加。PRRSV感染后第6小时,PAMs分泌TNF-α的能力就极显著升高(P<0.01),然后逐渐上升,到第36小时时依然极显著高于同时间对照组(P<0.01);试验组PAMs分泌IL-1β在PRRSV作用后第6小时就明显升高(P<0.05),以后一直持续在较高水平,到第36小时仍显著高于对照组(P<0.05);PRRSV感染后,IL-6的分泌始终处在较高水平,并显著高于同时间对照组(P<0.01);PAMs分泌IL-10的能力在PRRSV感染后很快升高,然后呈现下降趋势,第6和12小时显著高于对照组(P<0.05),24h后,试验组与对照组PAMs培养上清中IL-10含量没有显著差异(P>0.05)。结果表明,PRRSV可显著影响PAMs对细胞因子的分泌,导致免疫调节功能的紊乱。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺泡巨噬细胞 细胞因子 酶联免疫吸附试验
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猪ECR1-Like免疫黏附功能对PAMs捕获GFP-E.coli的影响
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作者 张峥 凌小雅 +5 位作者 范阔海 孙娜 孙盼盼 孙耀贵 李宏全 尹伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第19期3905-3916,共12页
【目的】探讨猪红细胞类Ⅰ型补体受体(erythrocyte complement receptor type 1-like,ECR1-like)免疫黏附功能是否能够促进猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)捕获致敏基因工程菌(GFP-Escherichia coli,GFP-E.coli),以... 【目的】探讨猪红细胞类Ⅰ型补体受体(erythrocyte complement receptor type 1-like,ECR1-like)免疫黏附功能是否能够促进猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)捕获致敏基因工程菌(GFP-Escherichia coli,GFP-E.coli),以期阐释猪红细胞免疫的分子机理及红细胞免疫在机体先天免疫中的作用。【方法】利用流式细胞术、菌落平板计数及RT-PCR技术检测PAMs捕获的GFP-E.coli的水平,分析猪ECR1-like免疫黏附对PAMs捕获GFP-E.coli的影响;运用流式细胞术、细胞免疫荧光化学技术检测猪ECR1-like免疫黏附的致敏GFP-E.coli被PAMs移除后,猪红细胞免疫黏附功能的变化及猪ECR1-like数量的变化。【结果】流式细胞术检测发现猪红细胞黏附组较空白对照组中的PAMs平均荧光强度显著提高(P<0.001),且PAMs阳性细胞率也显著提高(P<0.05);菌落涂板计数发现红细胞黏附组较空白对照组PAMs捕获GFP-E.coli情况显著增强(P<0.05);RT-PCR检测发现,红细胞黏附组PAMs中GFP-E.coli的相对数量显著高于空白对照组(P<0.01);进一步阻断猪红细胞表面的CR1-like,流式细胞术检测发现PAMs平均荧光强度降低至256301.56±9208.85(P<0.001),PAMs阳性细胞率降低至(88.32±0.92)%(P>0.05),菌落平板计数发现PAMs捕获GFP-E.coli情况减弱为(136666±8818)CFU/mL(P<0.05),RT-PCR检测发现PAMs中GFP-E.coli的相对数量显著减少(P<0.01);利用细胞流动循环互作技术发现:猪红细胞免疫黏附致敏GFP-E.coli的平均荧光强度由循环前2892.18±47.76降至2407.43±141.78(P<0.05),阳性细胞率由循环前(20.58±0.36)%降至(17.39±0.23)%(P<0.001),黏附水平显著低于循环前,与此同时,间接免疫荧光试验结果显示:试验组循环后猪ECR1-like平均荧光强度由循环前344.33±37.92降低至291.56±11.99(P<0.05),阳性细胞率由(30.20±1.24)%减少至(28.27±0.64)%(P<0.05)。【结论】猪ECR1-like通过免疫黏附功能促进了PAMs对致敏GFP-E.coli的捕获。PAMs移除猪红细胞� 展开更多
关键词 猪 红细胞 猪肺泡巨噬细胞 类Ⅰ型补体受体 免疫黏附
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