为建立一种特异和快速的猪细环病毒(TTSuV)检测方法,本研究通过比对TTSuV的全基因序列,选择其保守区域,设计了针对TTSuV检测的LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪对反应体系及条件进行了优化,建立TTSuV环介导等温扩增...为建立一种特异和快速的猪细环病毒(TTSuV)检测方法,本研究通过比对TTSuV的全基因序列,选择其保守区域,设计了针对TTSuV检测的LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪对反应体系及条件进行了优化,建立TTSuV环介导等温扩增的检测方法。结果表明:该方法最佳反应条件为64℃恒温50 min,病毒的最低检出限为5.5拷贝/μL,并且与其他相关传染病无交叉反应。临床样品检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和2型猪圆环病毒(PCV2)阳性的样品中TTSuV呈高阳性率,分别为92%和87.3%,显著高于非PRRSV和PCV2阳性的猪群。该方法的建立为快速及特异性的检测猪TTSuV提供了有效的方法。展开更多
目的：建立生物制品中猪细环病毒（ Torque teno sus virus，TTSuV）污染的检测方法，并进行方法学分析及初步的应用。方法针对TTSuV保守序列设计引物和探针，建立荧光PCR方法，对方法的特异性、线性、精密度、最低检测限等参数进行验...目的：建立生物制品中猪细环病毒（ Torque teno sus virus，TTSuV）污染的检测方法，并进行方法学分析及初步的应用。方法针对TTSuV保守序列设计引物和探针，建立荧光PCR方法，对方法的特异性、线性、精密度、最低检测限等参数进行验证，并对试验样本对检测的干扰性进行分析。利用该方法对猪全血样品、生产用细胞及轮状病毒疫苗样品进行检测，通过建立TTSuV分型检测的PCR方法对阳性样品进行分型。结果荧光PCR法的特异性较好，与不同种属的细小病毒、猴SV40病毒及猪圆环病毒无明显的交叉反应，TTSuV1和TTSuV2荧光PCR分别在109～103拷贝／μl和109～102拷贝／μl范围内线性较好，R2值达到0．993以上，TTSuV1和TTSuV2的最低检测限分别为1×103拷贝／μl和1×102拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度CV值均小于7％，试验内病毒拷贝数的CV值小于25％，试验间CV值小于45％。细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。对20份猪全血样品进行检测，8份为阳性，其中1份为TTSuV1阳性，4份为TTSuV2阳性，3份为TTSuV1／2混合感染。 TTSuV1和TTSuV2型与标准株序列同源性分别为98％～99％和98％。对细胞样品和轮状病毒疫苗进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了TTSuV荧光PCR检测法，能够用于生物制品TTSuV污染的检测，进一步提高了生物制品的安全性。展开更多
为了研究猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)的流行及遗传变异情况,试验采用PCR方法对从河南省南阳市某规模化养猪场采集的疑似TTSuV阳性猪的淋巴结、肺脏、血清等样品进行检测,并对TTSuV1阳性样品进行全基因组序列测定、同源性...为了研究猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)的流行及遗传变异情况,试验采用PCR方法对从河南省南阳市某规模化养猪场采集的疑似TTSuV阳性猪的淋巴结、肺脏、血清等样品进行检测,并对TTSuV1阳性样品进行全基因组序列测定、同源性分析、遗传进化分析和基因重组分析。结果表明:试验成功从样品中鉴定出2株TTSuV1毒株,其全基因组序列长度分别为2906,2920 bp,分别命名为HeN1-A9株和HeN1-A11株。两毒株与GenBank中TTSuV1型参考毒株的同源性为68.8%~96.0%,与GenBank中TTSuVk2型参考毒株同源性为46.8%~47.6%,两毒株之间的同源性为86.4%。基于TTSuV1全基因组序列构建的遗传进化树分析,两毒株均属于TTSuV1c亚型;而基于TTSuV1第3段基因组序列构建的遗传进化树分析,两毒株均属于TTSuV1b亚型。两毒株均是重组毒株,以西班牙的G21株(GU570201)为亲本毒株,我国的LNJZ株(KT968712)提供重组片段,重组位点分别位于基因组2195~2530 bp和2147~2650 bp处,重组区域为ORF1与ORF3的重叠部分。说明我国已出现新型重组的TTSuV毒株。展开更多
文摘为建立一种特异和快速的猪细环病毒(TTSuV)检测方法,本研究通过比对TTSuV的全基因序列,选择其保守区域,设计了针对TTSuV检测的LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪对反应体系及条件进行了优化,建立TTSuV环介导等温扩增的检测方法。结果表明:该方法最佳反应条件为64℃恒温50 min,病毒的最低检出限为5.5拷贝/μL,并且与其他相关传染病无交叉反应。临床样品检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和2型猪圆环病毒(PCV2)阳性的样品中TTSuV呈高阳性率,分别为92%和87.3%,显著高于非PRRSV和PCV2阳性的猪群。该方法的建立为快速及特异性的检测猪TTSuV提供了有效的方法。
