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RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗
被引量:
10
1
作者
邓显文
谢芝勋
+9 位作者
谢志勤
刘加波
庞耀珊
谢丽基
范晴
罗思思
黄莉
黄娇玲
曾婷婷
黄秀琴
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期338-343,共6页
【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列...
【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。
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关键词
猪瘟
病
毒
(CSFV)
猪瘟
兔
化
弱
毒
疫苗
株
(
hclv
)
RT-LAMP
浊度
特异性
敏感度
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职称材料
快速检测猪瘟兔化弱毒疫苗株的TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立
被引量:
3
2
作者
高博
杨晓农
+3 位作者
于学辉
刘内生
向毅勇
曾光志
《西南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2009年第1期92-97,共6页
在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′端非编码区设计一对引物和一条TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了特异性检测HCLV的荧光定量RT-PCR方法.结果表明:该方法检测的最低拷贝数为45拷贝/μL,灵敏度比普通PCR方法高104倍,在较广的...
在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′端非编码区设计一对引物和一条TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了特异性检测HCLV的荧光定量RT-PCR方法.结果表明:该方法检测的最低拷贝数为45拷贝/μL,灵敏度比普通PCR方法高104倍,在较广的范围内(4.5×101~4.5×106拷贝/μL)有良好的线性关系(r=0.994);分别以乙型脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、副猪嗜血杆菌、牛病毒性腹泻/黏膜病病毒作为模板进行TaqManRT-PCR扩增,未出现阳性信号;4个不同浓度标准品组内试验变异系数为1.90%~5.82%,组间试验变异系数为4.02%~5.69%;HCLV3个cDNA样本组内试验变异系数为3.72%~4.93%;组间试验变异系数为2.99%~4.02%.该方法具有很好的灵敏性、特异性及稳定性,能够快速准确定量检测HCLV,为HCLV疫苗的研制、猪瘟病毒分子生物学等方面研究提供了一种快捷有效的工具.
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关键词
猪瘟
兔
化
弱
毒
疫苗
株
(
hclv
)
荧光定量RT-PCR
TaqMan荧光探针
定量检测
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职称材料
题名
RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗
被引量:
10
1
作者
邓显文
谢芝勋
谢志勤
刘加波
庞耀珊
谢丽基
范晴
罗思思
黄莉
黄娇玲
曾婷婷
黄秀琴
机构
广西兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室
出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期338-343,共6页
基金
国家百千万人才工程人选专项项目(945200603)
广西科技重大专项项目(1222003-2-4)
广西特聘专家专项项目(2011B020)
文摘
【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。
关键词
猪瘟
病
毒
(CSFV)
猪瘟
兔
化
弱
毒
疫苗
株
(
hclv
)
RT-LAMP
浊度
特异性
敏感度
Keywords
classical swine fever virus(CSFV)
hog cholera lapinized vaccine(
hclv
)
RT-LAMP
turbidity
specificity
sensitivity
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
快速检测猪瘟兔化弱毒疫苗株的TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立
被引量:
3
2
作者
高博
杨晓农
于学辉
刘内生
向毅勇
曾光志
机构
西南民族大学生命科学与技术学院
出处
《西南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2009年第1期92-97,共6页
文摘
在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′端非编码区设计一对引物和一条TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了特异性检测HCLV的荧光定量RT-PCR方法.结果表明:该方法检测的最低拷贝数为45拷贝/μL,灵敏度比普通PCR方法高104倍,在较广的范围内(4.5×101~4.5×106拷贝/μL)有良好的线性关系(r=0.994);分别以乙型脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、副猪嗜血杆菌、牛病毒性腹泻/黏膜病病毒作为模板进行TaqManRT-PCR扩增,未出现阳性信号;4个不同浓度标准品组内试验变异系数为1.90%~5.82%,组间试验变异系数为4.02%~5.69%;HCLV3个cDNA样本组内试验变异系数为3.72%~4.93%;组间试验变异系数为2.99%~4.02%.该方法具有很好的灵敏性、特异性及稳定性,能够快速准确定量检测HCLV,为HCLV疫苗的研制、猪瘟病毒分子生物学等方面研究提供了一种快捷有效的工具.
关键词
猪瘟
兔
化
弱
毒
疫苗
株
(
hclv
)
荧光定量RT-PCR
TaqMan荧光探针
定量检测
Keywords
hog cholera lapinized virus(
hclv
)
fluorogenic quantitative RT-PCR
TaqMan probe
quantitative detection
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗
邓显文
谢芝勋
谢志勤
刘加波
庞耀珊
谢丽基
范晴
罗思思
黄莉
黄娇玲
曾婷婷
黄秀琴
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
10
下载PDF
职称材料
2
快速检测猪瘟兔化弱毒疫苗株的TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立
高博
杨晓农
于学辉
刘内生
向毅勇
曾光志
《西南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2009
3
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职称材料
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