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猪源盖塔病毒抗体间接ELISA检测方法的初步建立及其优化 被引量：2
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作者 朱世强 王帅勇 +9 位作者 王娟 虞凌雪 姚云 张毅峰 周艳君 单同领 郑浩 童武 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期66-71,共6页
为了建立猪源盖塔病毒(GETV)血清学ELISA抗体检测方法,本实验首先在PK-15细胞上增殖猪源盖塔病毒(GETV-SD1),并对病毒进行灭活处理和超离纯化,将纯化的灭活GETV作为包被抗原,经过包被条件的优化,初步建立了GETV特异性抗体检测的间接ELIS... 为了建立猪源盖塔病毒(GETV)血清学ELISA抗体检测方法,本实验首先在PK-15细胞上增殖猪源盖塔病毒(GETV-SD1),并对病毒进行灭活处理和超离纯化,将纯化的灭活GETV作为包被抗原,经过包被条件的优化,初步建立了GETV特异性抗体检测的间接ELISA方法。结果显示:GETV粒子的最佳包被浓度为200 ng/孔,最佳包被条件为4℃孵育过夜,最佳封闭条件4℃封闭2 h,血清最佳孵育条件为37℃孵育2 h,血清最佳稀释比1∶200,临界值为0.181;特异性检测试验结果表明,该检测方法具有GETV特异性;所建立的方法也具有较好的重复性,批内、批间重复率变异系数均小于10%;通过稀释阳性血清表明该方法具有较好的敏感性。本研究建立的猪源盖塔病毒抗体的间接ELISA检测方法为GETV抗体的有效监测奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 猪源盖塔病毒 全病毒蛋白 间接ELISA
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猪源盖塔病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2
2
作者 王娟 王帅勇 +9 位作者 虞凌雪 张毅峰 严杰聪 王曼茱 周艳君 单同领 童武 郑浩 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期120-126,共7页
猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主,可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期,所以定期对猪群进行GETV监测对... 猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主,可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期,所以定期对猪群进行GETV监测对于预防潜在的GETV暴发具有重要意义。本研究通过分析GETV E2蛋白基因特征,设计特异性引物和探针,条件优化后建立检测GETV感染的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果表明:以阳性质粒为标准品建立的标准曲线在1×10^(2)~1×10^(7)copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为1.61;该检测方法的最低检出限低至3.16 TCID50/mL,远远低于普通PCR的检测限3.16×10^(3)TCID50/mL;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。本研究建立的方法能够快速有效的检测和定量GETV,为猪群中GETV监测提供可靠的检测方法。 展开更多
关键词 猪源盖塔病毒 TaqMan实时荧光定量PCR方法 检测
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