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狂犬病病毒SRV_9株修饰全长基因组cDNA克隆的构建
被引量：
2
1
作者
魏玉荣
易忠
+7 位作者
符子华
马素贞
简子健
胡尔玛西
王海烽
魏婕
朱晶晶
张先锋
《新疆农业大学学报》
CAS
北大核心
2010年第5期416-421,共6页
为获得狂犬病病毒(rabies virus,RV)SRV9株的基因组全长cDNA克隆并对其进行基因修饰,深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,本研究根据GenBank中公布的SRV9基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,从病毒总RNA中将全长...
为获得狂犬病病毒(rabies virus,RV)SRV9株的基因组全长cDNA克隆并对其进行基因修饰,深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,本研究根据GenBank中公布的SRV9基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,从病毒总RNA中将全长基因组11 928 bp分5段扩增,克隆至载体测序鉴定。测序正确后,设计引物缺失基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,又设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区)。利用引物在病毒基因组起始处添加锤头状核酶序列,在病毒序列结尾处添加了丁型肝炎核酶序列。再次测序后克隆至pcDNA3.1(+)载体,利用扩增片段自身内切酶位点顺次进行修饰后全长连接,从而获得含修饰SRV9全长基因组的质粒pcDNA3.1-SRV9,为RV感染性克隆的建立奠定了基础。
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关键词
狂犬病
病毒
srv
9
株
修饰基因组
全长基因质粒构建
下载PDF
职称材料
细粒棘球绦虫EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9株基因组全长cDNA的构建
被引量：
3
2
作者
翟少华
阿尔祖古丽·阿卜力孜
+3 位作者
王楠
胡美荷
赵魁
贺文琦
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第10期3095-3102,共8页
试验旨在通过反向遗传学技术构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9疫苗株,为中国农牧区的狂犬病和包虫病的有效防控提供技术手段。本试验参照狂犬病病毒SRV9株全基因组序列,利用基因合成技术分别合成狂犬病病毒的结构蛋白N、P、L基因,以及N...
试验旨在通过反向遗传学技术构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9疫苗株,为中国农牧区的狂犬病和包虫病的有效防控提供技术手段。本试验参照狂犬病病毒SRV9株全基因组序列,利用基因合成技术分别合成狂犬病病毒的结构蛋白N、P、L基因,以及N-P-M基因融合片段和狂犬病病毒G基因、细粒棘球绦虫EgM123基因与增强型绿色荧光蛋白eGFP融合片段基因,通过载体酶切插入连接方法,依次将狂犬病病毒L基因、N-P-M基因融合片段和G+EgM123+eGFP基因融合片段重组于pcDNA3.1(-)表达载体上,构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9全长cDNA。将合成的基因分别构建于pcDNA3.1(-)表达载体,经转化、质粒酶切、基因测序鉴定结果表明,狂犬病病毒N、P、L、N+P+M和G+EgM123+eGFP基因片段长度分别为1365、1107、6471、3160和3256 bp;EgM123基因重组狂犬病病毒全长cDNA片段长度为12465 bp,各基因片段测序结果为100%。本试验成功构建了EgM123基因重组狂犬病病毒全长cDNA片段和狂犬病病毒N、P、L基因的真核表达载体,为通过反向遗传学拯救EgM123基因重组狂犬病病毒及狂犬病和包虫病二联基因重组口服活疫苗的研制提供参考。
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关键词
狂犬病
病毒
srv
9
株
细粒棘球绦虫
EgM123基因
基因重组
下载PDF
职称材料
题名
狂犬病病毒SRV_9株修饰全长基因组cDNA克隆的构建
被引量：
2
1
作者
魏玉荣
易忠
符子华
马素贞
简子健
胡尔玛西
王海烽
魏婕
朱晶晶
张先锋
机构
新疆畜牧科学院兽医研究所
新疆农业大学动物医学学院
塔里木大学科技处
出处
《新疆农业大学学报》
CAS
北大核心
2010年第5期416-421,共6页
基金
新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目(200611107)
文摘
为获得狂犬病病毒(rabies virus,RV)SRV9株的基因组全长cDNA克隆并对其进行基因修饰,深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,本研究根据GenBank中公布的SRV9基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,从病毒总RNA中将全长基因组11 928 bp分5段扩增,克隆至载体测序鉴定。测序正确后,设计引物缺失基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,又设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区)。利用引物在病毒基因组起始处添加锤头状核酶序列,在病毒序列结尾处添加了丁型肝炎核酶序列。再次测序后克隆至pcDNA3.1(+)载体,利用扩增片段自身内切酶位点顺次进行修饰后全长连接,从而获得含修饰SRV9全长基因组的质粒pcDNA3.1-SRV9,为RV感染性克隆的建立奠定了基础。
关键词
狂犬病
病毒
srv
9
株
修饰基因组
全长基因质粒构建
Keywords
rabies virus strain
srv
9
modification genomes
construction of full-length genome plasmid
分类号
S815.659.5 [农业科学—畜牧学]
下载PDF
职称材料
题名
细粒棘球绦虫EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9株基因组全长cDNA的构建
被引量：
3
2
作者
翟少华
阿尔祖古丽·阿卜力孜
王楠
胡美荷
赵魁
贺文琦
机构
新疆农业大学动物医学学院
吉林大学动物医学学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第10期3095-3102,共8页
基金
新疆维吾尔自治区自然科学基金面上项目(2019D01A43)。
文摘
试验旨在通过反向遗传学技术构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9疫苗株,为中国农牧区的狂犬病和包虫病的有效防控提供技术手段。本试验参照狂犬病病毒SRV9株全基因组序列,利用基因合成技术分别合成狂犬病病毒的结构蛋白N、P、L基因,以及N-P-M基因融合片段和狂犬病病毒G基因、细粒棘球绦虫EgM123基因与增强型绿色荧光蛋白eGFP融合片段基因,通过载体酶切插入连接方法,依次将狂犬病病毒L基因、N-P-M基因融合片段和G+EgM123+eGFP基因融合片段重组于pcDNA3.1(-)表达载体上,构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9全长cDNA。将合成的基因分别构建于pcDNA3.1(-)表达载体,经转化、质粒酶切、基因测序鉴定结果表明,狂犬病病毒N、P、L、N+P+M和G+EgM123+eGFP基因片段长度分别为1365、1107、6471、3160和3256 bp;EgM123基因重组狂犬病病毒全长cDNA片段长度为12465 bp,各基因片段测序结果为100%。本试验成功构建了EgM123基因重组狂犬病病毒全长cDNA片段和狂犬病病毒N、P、L基因的真核表达载体,为通过反向遗传学拯救EgM123基因重组狂犬病病毒及狂犬病和包虫病二联基因重组口服活疫苗的研制提供参考。
关键词
狂犬病
病毒
srv
9
株
细粒棘球绦虫
EgM123基因
基因重组
Keywords
rabies virus
srv
9
Echinococcus granulosus
EgM123 gene
gene recombination
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
狂犬病病毒SRV_9株修饰全长基因组cDNA克隆的构建
魏玉荣
易忠
符子华
马素贞
简子健
胡尔玛西
王海烽
魏婕
朱晶晶
张先锋
《新疆农业大学学报》
CAS
北大核心
2010
2
下载PDF
职称材料
2
细粒棘球绦虫EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9株基因组全长cDNA的构建
翟少华
阿尔祖古丽·阿卜力孜
王楠
胡美荷
赵魁
贺文琦
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
3
下载PDF
职称材料
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