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脂质体介导转染犬肾上皮细胞的方法改进与优化 被引量：2
1
作者 柴百惠 绳秀珍 +2 位作者 唐小千 邢婧 战文斌 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第A02期9-16,共8页
本文使用带绿色荧光蛋白报告基因的真核质粒pCI-neo-EGFP作为外源DNA,将脂质体介导转染犬肾上皮细胞(MDCK)的常规转染法改进为悬浮法,并比较了二者在转染36h后的转染效果,结果显示悬浮法的转染效率显著优于常规法。研究了悬浮转染法不同... 本文使用带绿色荧光蛋白报告基因的真核质粒pCI-neo-EGFP作为外源DNA,将脂质体介导转染犬肾上皮细胞(MDCK)的常规转染法改进为悬浮法,并比较了二者在转染36h后的转染效果,结果显示悬浮法的转染效率显著优于常规法。研究了悬浮转染法不同DNA用量、脂质体/DNA比例和悬浮孵育时间对转染效率和细胞活力的影响。流式细胞术检测结果显示,转染效率与DNA用量呈正相关依赖关系;在DNA用量相同时,转染效率随着脂质体/DNA比例升高呈先上升后下降的趋势;DNA用量为1μg、脂质体/DNA比例为4∶1、悬浮孵育时间为20 min时转染效率最高(21.07%±0.76%)。利用CCK-8细胞毒性试剂盒测定不同条件下的细胞活力,结果表明细胞活力随DNA用量和脂质体/DNA比例的升高及悬浮孵育时间的延长而降低,当DNA用量(0.25μg)和脂质体/DNA比例(2∶1)最低、悬浮孵育20min时,细胞活力最高(95.67%±3.72%),而转染效率最高时细胞活力为69.95%±3.01%。研究结果为进一步建立稳定转染细胞研究模型提供了基础资料。 展开更多
关键词 脂质体 瞬时转染 犬肾上皮连续细胞系(mdck) 悬浮法 转染效率 细胞活力
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