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犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用
被引量：
2
1
作者
张茜
闫琰
+4 位作者
马婧
李建宁
张薇
黄菱
孙玉宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期253-257,共5页
目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32...
目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32a(+)-VP2,转化至E.coli BL21中,异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物SDS-PAGE分析鉴定;纯化融合蛋白后免疫新西兰家兔,制备多克隆抗体,检测抗体效价及特异性。结果通过酶切和测序证实成功构建原核表达载体p ET-32a(+)-VP2,转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶6 400 000,Western blot法及免疫荧光染色鉴定抗体的特异性。结论成功制备了抗CBV结构蛋白VP2的多克隆抗体。
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关键词
犬
博卡
病毒
(
cbv
)
结构基因VP2
多克隆抗体
下载PDF
职称材料
题名
犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用
被引量：
2
1
作者
张茜
闫琰
马婧
李建宁
张薇
黄菱
孙玉宁
机构
宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期253-257,共5页
基金
国家自然科学基金(81260247)
宁夏高等学校科学技术研究项目(2002260503)
文摘
目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32a(+)-VP2,转化至E.coli BL21中,异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物SDS-PAGE分析鉴定;纯化融合蛋白后免疫新西兰家兔,制备多克隆抗体,检测抗体效价及特异性。结果通过酶切和测序证实成功构建原核表达载体p ET-32a(+)-VP2,转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶6 400 000,Western blot法及免疫荧光染色鉴定抗体的特异性。结论成功制备了抗CBV结构蛋白VP2的多克隆抗体。
关键词
犬
博卡
病毒
(
cbv
)
结构基因VP2
多克隆抗体
Keywords
canine bocavirus
structural protein VP2
polyclonal antibody
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392-33 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用
张茜
闫琰
马婧
李建宁
张薇
黄菱
孙玉宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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